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小鼠睾丸生精新基因SRG4原核表达与纯化
被引量：
4
1
作者
邢晓为
袁洪
王维
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第8期701-703,共3页
目的：原核表达小鼠睾丸生精新基因SRG4, 并对重组蛋白进行纯化, 为研究SRG4的生物学功能奠定基础.方法：应用RT-PCR从小鼠睾丸中扩增SRG4 C端包含一个Sad1_UNC like domain的587 bp片段, 将PCR产物克隆至pUCm-T载体.随后, cDNA片段亚...
目的：原核表达小鼠睾丸生精新基因SRG4, 并对重组蛋白进行纯化, 为研究SRG4的生物学功能奠定基础.方法：应用RT-PCR从小鼠睾丸中扩增SRG4 C端包含一个Sad1_UNC like domain的587 bp片段, 将PCR产物克隆至pUCm-T载体.随后, cDNA片段亚克隆至带有6个组氨酸标签的原核表达载体PQE-30中, 测序鉴定.将重组质粒PQE-30-SRG4转化大肠杆菌M15, IPTG诱导, 表达产物以Western blot进行鉴定, 并进一步通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化.结果：成功地构建了原核表达质粒PQE-30-SRG4.IPTG诱导4 ～5 h, SRG4融合蛋白表达量达最高.Western blot分析证实, IPTG诱导表达的蛋白是SRG4融合蛋白.Ni-NTA Agarose纯化后得到较纯的SRG4融合蛋白.结论：重组质粒PQE-30-SRG4能在大肠杆菌M15中表达, 包含Sad1_UNC like domain的纯化SRG4融合蛋白可用于研究SRG4在精子发生中的生物学功能.
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关键词
srg
4
克隆
原核表达
融合蛋白
精子发生
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职称材料
SRG4在出生后小鼠睾丸及隐睾中的表达特性
被引量：
1
2
作者
邢晓为
李麓芸
卢光琇
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期699-704,共6页
研究小鼠生精新基因SRG4在出生后小鼠睾丸及手术隐睾中的表达特性,为了解SRG4在精子发生中的作用奠定基础。取出生后1,3,12w小鼠睾丸进行免疫组化检测,观察SRG4蛋白在出生后小鼠不同发育阶段睾丸中的表达;制备单侧手术隐睾模型,取术后0...
研究小鼠生精新基因SRG4在出生后小鼠睾丸及手术隐睾中的表达特性,为了解SRG4在精子发生中的作用奠定基础。取出生后1,3,12w小鼠睾丸进行免疫组化检测,观察SRG4蛋白在出生后小鼠不同发育阶段睾丸中的表达;制备单侧手术隐睾模型,取术后0～18d的隐睾组织进行半定量RT-PCR检测,观察SRG4 mRNA在隐睾病变过程中的表达变化,并对隐睾术后18d睾丸进行组织原位杂交分析。免疫组化分析结果表明,SRG4蛋白在出生1w的小鼠睾丸中几乎检测不到,在出生3w的小鼠睾丸中有明显表达,在出生12w的小鼠中大量表达,主要分布在精母细胞和圆形精子细胞胞浆及胞膜,呈不均匀分布。半定量RT-PCR结果发现,SRG4 mRNA在小鼠隐睾术后0～6d表达没有明显下调,9d开始表达下调,第18d表达最低。组织原位杂交结果表明,术后18d隐睾睾丸生殖细胞大量凋亡,精曲小管中仅见到个别的SRG4阳性信号,而对照则不受影响。上述结果说明,SRG4蛋白表达受小鼠生长发育调控;隐睾模型中,随着生殖细胞的大量凋亡,SRG4基因表达下调,提示SRG4基因可作为一个精子发生特定阶段的分子标记用以研究精子发生过程。
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关键词
srg
4
睾丸
隐睾
精子发生
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职称材料
题名
小鼠睾丸生精新基因SRG4原核表达与纯化
被引量：
4
1
作者
邢晓为
袁洪
王维
机构
中南大学湘雅三医院细胞移植与基因治疗中心
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第8期701-703,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30600681)
湖南省自然科学基金资助项目(05JJ40044)
文摘
目的：原核表达小鼠睾丸生精新基因SRG4, 并对重组蛋白进行纯化, 为研究SRG4的生物学功能奠定基础.方法：应用RT-PCR从小鼠睾丸中扩增SRG4 C端包含一个Sad1_UNC like domain的587 bp片段, 将PCR产物克隆至pUCm-T载体.随后, cDNA片段亚克隆至带有6个组氨酸标签的原核表达载体PQE-30中, 测序鉴定.将重组质粒PQE-30-SRG4转化大肠杆菌M15, IPTG诱导, 表达产物以Western blot进行鉴定, 并进一步通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化.结果：成功地构建了原核表达质粒PQE-30-SRG4.IPTG诱导4 ～5 h, SRG4融合蛋白表达量达最高.Western blot分析证实, IPTG诱导表达的蛋白是SRG4融合蛋白.Ni-NTA Agarose纯化后得到较纯的SRG4融合蛋白.结论：重组质粒PQE-30-SRG4能在大肠杆菌M15中表达, 包含Sad1_UNC like domain的纯化SRG4融合蛋白可用于研究SRG4在精子发生中的生物学功能.
关键词
srg
4
克隆
原核表达
融合蛋白
精子发生
Keywords
srg
4
clone
prokaryotic expression
fusionprotein
spermatogenesis
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
下载PDF
职称材料
题名
SRG4在出生后小鼠睾丸及隐睾中的表达特性
被引量：
1
2
作者
邢晓为
李麓芸
卢光琇
机构
中南大学湘雅三医院医学实验中心
中南大学生殖与干细胞工程研究所
中南大学生殖与干细胞工程研究所
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期699-704,共6页
基金
国家自然基金项目(编号:30371493)资助~~
文摘
研究小鼠生精新基因SRG4在出生后小鼠睾丸及手术隐睾中的表达特性,为了解SRG4在精子发生中的作用奠定基础。取出生后1,3,12w小鼠睾丸进行免疫组化检测,观察SRG4蛋白在出生后小鼠不同发育阶段睾丸中的表达;制备单侧手术隐睾模型,取术后0～18d的隐睾组织进行半定量RT-PCR检测,观察SRG4 mRNA在隐睾病变过程中的表达变化,并对隐睾术后18d睾丸进行组织原位杂交分析。免疫组化分析结果表明,SRG4蛋白在出生1w的小鼠睾丸中几乎检测不到,在出生3w的小鼠睾丸中有明显表达,在出生12w的小鼠中大量表达,主要分布在精母细胞和圆形精子细胞胞浆及胞膜,呈不均匀分布。半定量RT-PCR结果发现,SRG4 mRNA在小鼠隐睾术后0～6d表达没有明显下调,9d开始表达下调,第18d表达最低。组织原位杂交结果表明,术后18d隐睾睾丸生殖细胞大量凋亡,精曲小管中仅见到个别的SRG4阳性信号,而对照则不受影响。上述结果说明,SRG4蛋白表达受小鼠生长发育调控;隐睾模型中,随着生殖细胞的大量凋亡,SRG4基因表达下调,提示SRG4基因可作为一个精子发生特定阶段的分子标记用以研究精子发生过程。
关键词
srg
4
睾丸
隐睾
精子发生
Keywords
srg
4
testis
cryptorchid testis
spermatogenesis
分类号
Q344 [生物学—遗传学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠睾丸生精新基因SRG4原核表达与纯化
邢晓为
袁洪
王维
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
下载PDF
职称材料
2
SRG4在出生后小鼠睾丸及隐睾中的表达特性
邢晓为
李麓芸
卢光琇
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
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职称材料
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