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SPLUNC1基因在2种绵羊不同组织器官中差异表达分析
1
作者 李珂儿 李劼 +2 位作者 李增强 魏立翔 孙延鸣 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第7期89-94,共6页
SPLUNC1是抗病原微生物感染的关键蛋白。为研究SPLUNC1基因在2种绵羊不同组织器官中的差异表达情况,试验选取健康新疆阿勒泰羊5只,多胎萨福克羊5只,放血处死后分别采集气管、支气管、肺脏、胃、食管、结肠、心脏、脾脏、皮肤,提取RNA,... SPLUNC1是抗病原微生物感染的关键蛋白。为研究SPLUNC1基因在2种绵羊不同组织器官中的差异表达情况,试验选取健康新疆阿勒泰羊5只,多胎萨福克羊5只,放血处死后分别采集气管、支气管、肺脏、胃、食管、结肠、心脏、脾脏、皮肤,提取RNA,反转录合成cDNA。以cDNA为模板,扩增SPLUNC1基因748 bp特征片段,克隆至pMD19-T载体中,提取质粒。以梯度稀释的质粒为模板,建立SPLUNC1基因转录本拷贝数的绝对定量标准曲线,对2种绵羊各组织器官中SPLUNC1的mRNA初始拷贝数进行定量分析。结果表明:阿勒泰羊标准曲线扩增效率(E)为97%,回归系数(R^(2))为0.9990,SPLUNC1 mRNA初始拷贝数从高至低依次为气管、支气管、肺脏、脾脏、食管、心脏、胃、结肠、皮肤。萨福克羊标准曲线扩增效率(E)为99%,回归系数(R^(2))为0.9989,SPLUNC1 mRNA初始拷贝数从高至低依次为气管、支气管、肺脏、脾脏、心脏、食管、胃、结肠、皮肤。2种绵羊的气管SPLUNC1 mRNA表达量均显著高于其他各组织(P<0.05),皮肤表达量最低。新疆阿勒泰羊的9种组织器官该基因表达量均显著高于多胎萨福克羊(P<0.05)。上述结果说明绵羊的SPLUNC1基因的分布具有组织器官特异性,为揭示绵羊抗感染的分子调控机制提供一定参考。 展开更多
关键词 多胎萨福克羊 阿勒泰羊 splunc1基因 实时定量PCR 组织表达
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巴什拜羊SPLUNC1基因的克隆与真核表达
2
作者 王继雪 沈文 孙延鸣 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第3期628-634,共7页
为了克隆巴什拜羊SPLUNC1基因并表达该蛋白,本试验从巴什拜羊肺脏组织中提取总RNA,利用RTPCR方法扩增出SPLUNC1基因开放阅读框序列,将该基因片段插入到真核表达质粒pPIC9K中构建pPIC9K-SPLUNC1重组质粒,然后将pPIC9K-SPLUNC1重组质粒线... 为了克隆巴什拜羊SPLUNC1基因并表达该蛋白,本试验从巴什拜羊肺脏组织中提取总RNA,利用RTPCR方法扩增出SPLUNC1基因开放阅读框序列,将该基因片段插入到真核表达质粒pPIC9K中构建pPIC9K-SPLUNC1重组质粒,然后将pPIC9K-SPLUNC1重组质粒线性化并电击转化入毕赤酵母GS115中,经甲醇诱导蛋白表达后用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定目的蛋白。结果表明,经RT-PCR扩增成功获得大小为748bp的SPLUNC1基因;构建的pPIC9K-SPLUNC1重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定与预期结果一致;SDS-PAGE及Western blotting检测鉴定结果表明获得大小为25.53ku的SPLUNC1蛋白。本试验结果为进一步研究巴什拜羊SPLUNC1蛋白的生物学活性奠定基础。 展开更多
关键词 巴什拜羊 splunc1基因 克隆 真核表达
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