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RNA干扰抑制γ突触核蛋白的表达对人结肠癌细胞株增殖和侵袭能力的影响 被引量：3
1
作者 黄峰 许少华 +3 位作者 叶青 郑秋红 许扬梅 刘沁颖 《中华胃肠外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期446-452,共7页
目的探讨抑制γ突触核蛋白（SNCG）基因表达对结肠癌细胞株生长及侵袭能力的影响。方法针对SNCG基因的mRNA序列（GENBANK：No．NM003087．2），设计合成干扰SNCG基因表达的RNA（siRNA）有效靶序列及其DNA，与慢病毒骨架质粒GV115（hU6-M... 目的探讨抑制γ突触核蛋白（SNCG）基因表达对结肠癌细胞株生长及侵袭能力的影响。方法针对SNCG基因的mRNA序列（GENBANK：No．NM003087．2），设计合成干扰SNCG基因表达的RNA（siRNA）有效靶序列及其DNA，与慢病毒骨架质粒GV115（hU6-MCS-CMV—EGFP）连接并包装．获得实验组慢病毒LV-SNCG-RNAi-EGFP，并用相同步骤构建阴性对照组慢病毒LV-SNCG-NCIEGFP。用两种重组慢病毒分别感染人结肠癌SW1116细胞（实验组：RNAi组，阴性对照组：NC组），荧光显微镜下观察感染后shRNA荧光标签（EGFP）的表达情况；利用实时定量聚合酶链反应（Real．timePCR）检测RNAi组与NC组细胞中SNCG基因表达mRNA的干扰效果；以野生型SW1116细胞为空白对照（野生型组），用Westernblot方法检测RNAi组、NC组和野生型组细胞中SNCG基因表达蛋白的干扰效果；CCK．8细胞增殖实验、软琼脂克隆形成实验和Transwell侵袭实验．用于评价RNA干扰SNCG基因表达对RNAi组与NC组细胞的体外生长及侵袭能力的抑制作用。结果成功构建并获得了稳定表达重组慢病毒的SW1116细胞株，表达慢病毒LV-SNCG-RNAi-EGFP及LV-SNCG-NC-EGFP滴度均为8×10^8Tu／ml。RNAi组SNCG基因相对表达水平（2-△△△）为0．114±0．030，低于于对照NC组的SNCG基因相对表达水平（2-△△Q：1．009±0．161），差异有统计学意义（P=0．009）；RNAi组SNCG基因干扰效率达到76．8％。RNAi组的SNCG蛋白相对表达量为12．001±2．884，低于NC组（蛋白相对表达量：32．445±4，731）和野生型组（蛋白相对表达量：34．308±6．920），差异有统计学意义（P=0．018，P=0．020）。CCK-8细胞增殖实验显示，干扰SNCG基因表达后，RNAi组细胞的体外增殖能力从48h开始受到明显抑制，并持续到120h，与NC组及野生型组差异具有统计学意义（P=0．036）。RNAi组克隆明显偏小，RNAi组平均直径（0．582±0．103）mm，低� 展开更多
关键词 结肠肿瘤 sncg基因 慢病毒载体 RNA干扰 基因转染
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人SNCG基因shRNA慢病毒载体质粒的构建及鉴定 被引量：3
2
作者 李文怡 范余娟 +2 位作者 徐红 范江涛 孙丹 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第26期13-16,共4页
目的构建人SNCG基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒载体质粒,并观察用其转染后人子宫内膜癌HEC-1-A和Ishikawa细胞SNCG mRNA和蛋白的表达变化。方法设计3种SNCG基因特异性shRNA序列SNCGKD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3,用脂质体Lipofectamine 2000... 目的构建人SNCG基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒载体质粒,并观察用其转染后人子宫内膜癌HEC-1-A和Ishikawa细胞SNCG mRNA和蛋白的表达变化。方法设计3种SNCG基因特异性shRNA序列SNCGKD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3,用脂质体Lipofectamine 2000在293T细胞构建成慢病毒载体质粒。用SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3慢病毒载体质粒转染人子宫内膜癌HEC-1-A和Ishikawa细胞,用实时荧光定量PCR法检测SNCG mRNA,用Western blot法检测SNCG蛋白。结果利用AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切连接转化后的3组阳性转化子,1%琼脂糖凝胶电泳,特异条带与预计结果相符。Chromas Lite比对分析基因测序结果,鉴定结果与Gen Bank数据库一致,表明合成的3对SNCG shRNA序列SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3插入正确。HEC-1-A和Ishikawa细胞转染SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3慢病毒载体质粒后SNCG mRNA和蛋白的表达均显著降低(P均<0.05)。结论成功构建了3种SNCG shRNA慢病毒载体质粒,用其转染HEC-1-A和Ishikawa细胞后可有效沉默SNCG基因表达。 展开更多
关键词 sncg基因 短发夹干扰RNA 慢病毒载体质粒 子宫内膜癌 基因沉默
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SNCG在结直肠癌肝转移中的表达及其临床意义 被引量：3
3
作者 郭春光 孙力超 +2 位作者 刘骞 解亦斌 王翔 《中华胃肠外科杂志》 CAS 2012年第6期625-628,共4页
目的探讨SNCG在结直肠癌肝转移患者中的表达情况及其临床意义。方法收集1999年1月至2003年12月间中国医学科学院肿瘤医院收治的具有完整临床病理及随访资料的217例结直肠癌手术标本。其中113例伴肝转移，104例无肝转移。采用免疫组织化... 目的探讨SNCG在结直肠癌肝转移患者中的表达情况及其临床意义。方法收集1999年1月至2003年12月间中国医学科学院肿瘤医院收治的具有完整临床病理及随访资料的217例结直肠癌手术标本。其中113例伴肝转移，104例无肝转移。采用免疫组织化学染色检测SNCG在结直肠癌组织中的表达。分析SNCG表达与结直肠癌肝转移临床病理特征及预后的关系。结果肝转移组和无肝转移组患者结直肠癌组织中SNCG阳性表达率分别为68．1％（77／113）和27．9％（29／104），差异有统计学意义（P〈0．05）。Logistic多因素分析显示，SNCG表达是判断结直肠癌是否伴有肝转移的独立因素（OR=8．29，95％CI：3．37～20．37，P〈0．01）。SNCG阳性表达与阴性表达的同时性肝转移患者术后中位生存时间分别为8．2个月和12．6个月．差异有统计学意义（P〈0．05）；Cox多因素分析显示，SNCG表达是结直肠癌同时性肝转移患者的独立预后因素（RR：1．97．95％CI：1．10—3．53，P〈0．05）。结论SNCG在肝转移患者的结直肠癌组织中高表达．SNCG表达不仅可以作为结直肠癌肝转移预示因子，也是同时性肝转移的重要预后因素。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 肿瘤转移 肝 基因 sncg 预后
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SNCG基因转染对PC-3细胞抗肿瘤药物作用效果的影响 被引量：2
4
作者 陈家梁 王波 +5 位作者 张丽荣 何帮顺 潘玉琴 曾庆娣 蒋华新 王书奎 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2008年第12期1077-1082,共6页
目的:观察转染了质粒PCI-NEO-SNCG后的前列腺癌激素非依赖性细胞系PC-3细胞对抗肿瘤药物顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、紫杉醇(TAX)的敏感性,探讨SNCG的表达对各种抗肿瘤药物作用效果的影响。方法:转染质粒... 目的:观察转染了质粒PCI-NEO-SNCG后的前列腺癌激素非依赖性细胞系PC-3细胞对抗肿瘤药物顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、长春新碱(VCR)、紫杉醇(TAX)的敏感性,探讨SNCG的表达对各种抗肿瘤药物作用效果的影响。方法:转染质粒PCI-NEO和PCI-NEO-SNCG至PC-3细胞,采用RT-PCR法检测PC-3细胞中SNCG的表达;MTT法检测各抗肿瘤药物对转染后PC-3细胞的抑制作用;流式细胞术分析转染细胞经TAX作用后的细胞周期及凋亡。结果:5种抗肿瘤药物对转染了空载体PCI-NEO质粒及PCI-NEO-SNCG质粒细胞的生长抑制作用均存在时间依赖性;转染PCI-NEO的PC-3细胞组与转染PCI-NEO-SNCG的PC-3细胞组中各种抗肿瘤药物的抑制效果比较显示,DDP、5-FU、ADM、VCR的抑制效果两组间没有显著性差异(P>0.05),而TAX对转染PCI-NEO-SNCG的细胞的抑制率较转染PCI-NEO的细胞显著降低(P<0.01);经TAX处理48 h后,在转染PCI-NEO质粒的细胞中,停留在G2-M期的细胞比例显著高于转染PCI-NEO-SNCG质粒的细胞(P<0.01),而停留在G0-G1期及S期的细胞比例,在转染PCI-NEO质粒的细胞中显著低于转染PCI-NEO-SNCG质粒的细胞(P<0.01);在转染PCI-NEO质粒的细胞中Caspase-3的表达显著高于转染PCI-NEO-SNCG质粒的细胞(P<0.01)。结论:TAX对转染了SNCG基因的PC-3细胞中的生长抑制作用明显降低,提示SNCG的表达可抑制TAX的作用效果,这一发现可为前列腺癌的个体化治疗提供理论依据和指导。 展开更多
关键词 sncg基因 前列腺癌 PC-3细胞 转染 紫杉醇
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慢病毒介导的靶向SNCG敲除对人结肠癌SW1116裸鼠结肠癌肝转移实验模型的影响
5
作者 许少华 周东 +1 位作者 张辉 陈昭硕 《福建医药杂志》 CAS 2019年第5期120-123,共4页
目的研究慢病毒介导的丫突触核蛋白(SNCG)基因敲除对人结肠癌SW1116细胞在裸鼠结肠癌肝转移实验模型中的影响。方法前期实验中,通过SNCG基因敲除并慢病毒转染,构建稳定表达的SNCG敲除实验组(RNAi组)、转染空质粒的空质粒对照组(NC组)。... 目的研究慢病毒介导的丫突触核蛋白(SNCG)基因敲除对人结肠癌SW1116细胞在裸鼠结肠癌肝转移实验模型中的影响。方法前期实验中,通过SNCG基因敲除并慢病毒转染,构建稳定表达的SNCG敲除实验组(RNAi组)、转染空质粒的空质粒对照组(NC组)。复苏基因敲除实验组(RNAi组)、空质粒对照组(NC组)及空白对照组(CON组)的野生型SW1116细胞,保脾法建立裸鼠结肠癌肝转移模型,免疫组化染色、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测SNCG基因的表达。结果1)成功构建裸鼠结肠癌肝转移模型。2)与对照组比较,RNAi组裸鼠移植瘤生长缓慢,原位成瘤率及肝转移率均明显下降。3)免疫组化、RT-PCR及Western blot结果显示,RNAi组SNCG mRNA和蛋白表达均明显下降。结论SNCG基因沉默后,裸鼠脾脏原位移植瘤及转移瘤的数量变少,体积变小。在体内,靶向SNCG敲除降低了原位移植瘤及肝脏转移瘤中SNCG基因的mRNA及蛋白表达,表明SNCG基因对结肠癌的增生、侵袭起积极推动作用。利用RNAi技术抑制SNCG基因的表达有望为结肠癌的基因治疗提供新靶点、新手段。 展开更多
关键词 慢病毒载体 sncg基因 基因敲除 裸鼠 结肠癌肝转移
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抑制γ-突触核蛋白表达对乳腺癌T47D细胞放射敏感性的影响
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作者 吴丽娜 朴春南 +2 位作者 田梅 阮健磊 刘建香 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期19-23,共5页
目的探讨γ突触核蛋白（γ-synuclein，SNCG）对乳腺癌细胞辐射敏感性的影响。方法合成SNCG的siRNA干扰序列并转染T47D细胞。用RT-PCR和Western blot法分别从基因水平和蛋白水平检测SNCG基因的表达。实验设SNCGsiRNA干扰组（干扰组）、... 目的探讨γ突触核蛋白（γ-synuclein，SNCG）对乳腺癌细胞辐射敏感性的影响。方法合成SNCG的siRNA干扰序列并转染T47D细胞。用RT-PCR和Western blot法分别从基因水平和蛋白水平检测SNCG基因的表达。实验设SNCGsiRNA干扰组（干扰组）、阴性对照组、空白对照组。各组细胞分别接受不同剂量γ射线照射，集落形成实验检测细胞放射敏感性，CCK-8实验检测细胞增殖能力变化，Western blot法检测AKT及mTOR磷酸化变化。结果SNCG siRNA干扰组较空白对照组的SNCG基因和蛋白表达都明显下降。在4、6、8Gy照射下干扰组的乳腺癌细胞数量明显低于未转染SNCG的对照组（t=5．449、8．882、21．503，P〈0．05），其中6Gy照射时，干扰组的细胞增殖能力在照后24、48、72h均较其他对照组低（t=5．603、4．839、6．115，P〈0．05），且干扰组AKT及mTOR磷酸化水平降低，而总的AKT及mTOR未见明显变化。结论抑制SNCG的表达可增强乳腺癌细胞对射线的放射敏感性．其机制可能与AKT信号通路被抑制有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 γ-突触核蛋白 放射敏感性 基因治疗
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