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人SNARE复合物相关蛋白的表达与纯化
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作者 支旭勃 陈款民 +5 位作者 王昭维 李倩楠 孙雪嫄 张芷萌 杨影 李元 《生物技术》 CAS 2024年第4期407-411,438,共6页
[目的]构建人SNARE复合物中的SNAP25、Syntaxin 1a和VAMP1蛋白真核表达载体,并于体外进行表达纯化。[方法]将重组质粒转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组杆粒;用脂质体转化法,将重组杆粒转染至Sf9昆虫细胞中... [目的]构建人SNARE复合物中的SNAP25、Syntaxin 1a和VAMP1蛋白真核表达载体,并于体外进行表达纯化。[方法]将重组质粒转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组杆粒;用脂质体转化法,将重组杆粒转染至Sf9昆虫细胞中使其产生重组病毒,最后对病毒进行扩增后再感染Sf9昆虫细胞表达目的蛋白;所得蛋白进行Western Blot鉴定及纯化。[结果]测序结果表明SNAP25、Syntaxin 1a和VAMP1真核表达载体构建成功,Western Blot检测出三种蛋白的特异性条带,利用His标签蛋白纯化出Syntaxin 1a蛋白。[结论]利用杆状病毒表达系统成功表达出了SNARE复合物相关蛋白。 展开更多
关键词 SNARE复合物 snap25蛋白 Syntaxin 1a蛋白 VAMP1蛋白 重组杆粒 杆状病毒 Sf9昆虫细胞 蛋白纯化
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用于肉毒毒素活性测定的特异性绿色荧光融合蛋白的制备
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作者 吉元刚 张国利 +12 位作者 李泽鸿 岳玉环 吴广谋 田园 刘雨玲 李玉洁 赵鑫 付玉和 王冬冬 张培培 侯天全 徐艳玲 马洪园 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第9期901-905,共5页
目的制备含有7种血清型肉毒毒素切割位点(SNAP25-VAMP)的特异性绿色荧光融合蛋白,在E.coli中诱导表达,纯化后用于肉毒毒素活性测定。方法根据SNARE蛋白复合物中SNAPE25和VAMP基因序列及各血清型肉毒毒素(Bo NTs)的切割位点,设计合成含有... 目的制备含有7种血清型肉毒毒素切割位点(SNAP25-VAMP)的特异性绿色荧光融合蛋白,在E.coli中诱导表达,纯化后用于肉毒毒素活性测定。方法根据SNARE蛋白复合物中SNAPE25和VAMP基因序列及各血清型肉毒毒素(Bo NTs)的切割位点,设计合成含有SNAREs中突触小体(SNAP25)和突触小泡膜蛋白(VAMP)的Bam HⅠ-HIS6-SNAP62-Eco RⅠ-VAMP57C-TAA-HindⅢ(以下简称为SV)基因,连接至p ET-28a-GFP载体上,构建重组质粒p ET-28a-GFP-SV,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后,经DEAE阴离子交换层析、Cu2+金属螯合层析、Q阴离子交换层析3步纯化,BCA法测定纯化产物的蛋白浓度,ELISA法检测B型肉毒毒素轻链蛋白(Bo NT/BL)活性。结果构建的质粒p ET-28a-GFP-SV经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的GFP-SV融合蛋白相对分子量约40 000,主要以可溶形式存在,蛋白浓度为18.4μg/μl,纯度可达70%以上。利用该融合蛋白的荧光强弱变化可测定Bo NT/BL活性大小,同时也可测定其抗体中和活性大小。结论制备的含有SV的特异性绿色荧光融合蛋白在E.coli中获得了高效表达,为后续各型肉毒毒素活性检测及抗体中和毒素活性检测奠定了基础。 展开更多
关键词 snap25-VAMP 绿色荧光蛋白 肉毒毒素活性 血清型
原文传递
突触小体相关蛋白SNAP25的原核表达、纯化及鉴定
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作者 安佳佳 韦娜 +2 位作者 熊向华 汪建华 张惟材 《生物技术通讯》 CAS 2011年第2期192-195,共4页
目的:克隆突触小体相关蛋白(SNAP25)基因,原核表达、纯化并鉴定SNAP25蛋白。方法:PCR扩增SNAP25基因,克隆至表达质粒pTIG-Trx,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western印迹分析... 目的:克隆突触小体相关蛋白(SNAP25)基因,原核表达、纯化并鉴定SNAP25蛋白。方法:PCR扩增SNAP25基因,克隆至表达质粒pTIG-Trx,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western印迹分析肉毒神经毒素BoNT/A轻链对该蛋白的裂解情况。结果:构建了pTIG-SNAP25表达质粒,经IPTG诱导表达,目的蛋白占全菌蛋白的26.2%,表达形式为可溶性表达,表达量达115.4mg/L,纯化后蛋白纯度达95%以上;经SDS-PAGE及Western印迹分析,SNAP25蛋白可被BoNT/A轻链特异降解。结论:克隆了SNAP25基因,在原核系统中表达、纯化并鉴定了重组SNAP25蛋白。 展开更多
关键词 突触小体相关蛋白(snap25) 基因克隆 可溶性表达
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SNARE Protein in Cellular Membrane Trafficking, Its Regulation and as a Potential Target for Cancer Treatment
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作者 Mohammed Mehdi M. K. C. Menon 《Open Journal of Immunology》 2016年第1期34-48,共15页
The role of SNARE [soluble NSF (N-ethylmaleimide-sensitive factor) accessory protein receptor] protein in cellular trafficking, membrane fusion and vesicle release in synaptic nerve terminals is described. The purpose... The role of SNARE [soluble NSF (N-ethylmaleimide-sensitive factor) accessory protein receptor] protein in cellular trafficking, membrane fusion and vesicle release in synaptic nerve terminals is described. The purpose of this review is to highlight the role of SNAREs in vital inflammatory conditions in maturing dendritic cells in order to retain the capacity to present new antigens together with altered cytokine secretory functions. This role of SNAREs can be used as novel targets for therapy in inflammatory diseases. The essential mechanism of SNAREs proteins for regulation of tumour formation through multiple signals and transportation pathways is also discussed. Finally, this review summarizes the current knowledge of SNARE proteins in regulating endocytosis in cancer cells and the possible therapeutic applications related to the pathogenesis of tumor formation. 展开更多
关键词 SNARE protein Inflammatory Diseases SYNTAXIN VAMP snap-25 NSF TUMOUR
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慢性脑缺血大鼠空间学习记忆能力与前额叶皮质突触相关蛋白-25表达的相关研究 被引量:1
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作者 林春雨 《中国医学工程》 2016年第4期24-26,共3页
目的探讨慢性脑缺血大鼠空间学习记忆能力与前额叶皮质突触相关蛋白-25(SNAP-25)表达的相关性。方法将20只慢性脑缺血大鼠实验模型设为试验组,另选取20只健康大鼠作为对照组,采用Morris水迷宫评估两组大鼠的空间学习记忆能力,检测两组... 目的探讨慢性脑缺血大鼠空间学习记忆能力与前额叶皮质突触相关蛋白-25(SNAP-25)表达的相关性。方法将20只慢性脑缺血大鼠实验模型设为试验组,另选取20只健康大鼠作为对照组,采用Morris水迷宫评估两组大鼠的空间学习记忆能力,检测两组大鼠前额叶皮质SNAP-25蛋白表达,分析慢性脑缺血大鼠认知功能损害与前额叶皮质SNAP-25蛋白表达的相关性。结果试验组大鼠的空间学习记忆能力较对照组大鼠差(P<0.05),前额叶皮质SNAP-25蛋白表达水平高于对照组大鼠(P<0.05)。结论前额叶皮质SNAP-25蛋白表达水平与大鼠认知功能损害程度呈正相关,可作为评估大鼠认知功能损害程度的辅助指标。 展开更多
关键词 慢性脑缺血大鼠 空间学习记忆能力 前额叶皮质 snap-25 蛋白表达 相关性
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SNAP-25与神经病理性疼痛的关系研究
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作者 贾丹丹 黄诚 《赣南医学院学报》 2022年第2期125-129,共5页
神经病理性疼痛(Neuropathic pain,NP)是由神经损伤引起的疼痛,表现为一种慢性、持续的症状,严重影响患者的生活质量。目前神经病理性疼痛的药物治疗效果不佳,且存在明显的不良反应,如阿片类药物具有较强的镇痛作用,但易引起药物成瘾和... 神经病理性疼痛(Neuropathic pain,NP)是由神经损伤引起的疼痛,表现为一种慢性、持续的症状,严重影响患者的生活质量。目前神经病理性疼痛的药物治疗效果不佳,且存在明显的不良反应,如阿片类药物具有较强的镇痛作用,但易引起药物成瘾和依赖性等不良反应。所以要想达到理想的治疗效果,探讨神经病理性疼痛的病理生理过程是不可或缺的。神经病理性疼痛的产生可能与兴奋性抑制失衡有关,由囊泡释放的神经递质与多种蛋白质相互作用,参与了疼痛信号的传递。可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感性因子附着型蛋白受体(Soluble N-ethylmaie-sensitive factor attachment protein receptors,SNARE)复合物SNAP-25在囊泡胞吐中起关键作用,通过下调SNAP-25来抑制突触前膜释放伤害性神经递质,进而达到镇痛效果。 展开更多
关键词 神经病理性疼痛 snap-25 可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感性因子附着型蛋白受体复合物
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