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过表达溶质载体家族1成员5和敲低慢病毒载体构建及稳定转染RAW264.7细胞株
1
作者 郭大鑫 范苏苏 +2 位作者 朱振东 侯建红 张旋 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第7期1414-1421,共8页
背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供... 背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的:构建小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体,以建立稳定转染的RAW264.7细胞株,为深入探讨SLC1A5在炎症中的作用提供实验基础。方法:根据SLC1A5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应扩增该基因片段。将目的基因定向接入经Age I/Nhe I酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒,对阳性克隆进一步筛选后测序比对结果;pHelper1.0质粒载体、pHelper2.0质粒载体、目的质粒载体与293T细胞共同培养并转染,获得慢病毒原液进行包装和滴度测定;在此基础上,通过体外培养RAW264.7细胞,确定嘌呤霉素工作质量浓度;不同滴度的慢病毒分别与RAW264.7细胞共同培养,根据荧光强度确定转染效率;用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测稳定转染细胞株的SLC1A5基因和蛋白表达水平。结果与结论:(1)测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功;(2)过表达SLC1A5慢病毒的滴度为1×10~9 TU/mL,敲低SLC1A5慢病毒的滴度为3×10~9 TU/mL;(3)确定RAW264.7细胞嘌呤霉素工作质量浓度为3μg/mL;(4)过表达/敲低SLC1A5慢病毒转染RAW264.7细胞的最佳条件皆为HiTransG P转染增强液且感染复数值等于50;(5)过表达SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量明显上调,而敲低SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量显著下调。结果表明,成功构建了小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体并获得稳定转染的RAW264.7细胞株。 展开更多
关键词 慢病毒载体 溶质载体家族1成员5 slc1A5 过表达 敲低 RAW264.7细胞 稳转细胞株
基于蛋白合成代谢研究补肾健脾方延缓大鼠骨骼肌萎缩机制 被引量:6
2
作者 常岑 金晔华 +3 位作者 康湘萍 郑静 徐划萍 龚张斌 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期3281-3284,共4页
目的:从蛋白质合成角度探析补肾健脾方对糖皮质激素(GC)诱导骨骼肌萎缩的保护机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、美雄酮组。除正常组外,其余3组每天腹腔注射地塞米松(1mg/kg),共14d,进行造模,同时给予相应的中药或美雄... 目的:从蛋白质合成角度探析补肾健脾方对糖皮质激素(GC)诱导骨骼肌萎缩的保护机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、美雄酮组。除正常组外,其余3组每天腹腔注射地塞米松(1mg/kg),共14d,进行造模,同时给予相应的中药或美雄酮干预。检测大鼠握力、腓肠肌湿重/体质量比值、腓肠肌谷氨酰胺浓度及SLC1A5、α-actin、Myosin的mRNA与蛋白质表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠的握力、腓肠肌湿重/体质量比值、α-actin mRNA、Myosin mRNA表达显著下降(P<0.01,P<0.05),SLC1A5蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,中药组大鼠握力、腓肠肌湿重/体质量比值增强(P<0.01,P<0.05),Myosin mRNA表达及SLC1A5蛋白表达升高(P<0.05)。结论:补肾健脾方可通过促进蛋白质合成代谢,改善萎缩骨骼肌的质量与功能。 展开更多
关键词 补肾健脾方 地塞米松 骨骼肌萎缩 蛋白合成代谢 氨基酸载体蛋白2 肌球蛋白 机制
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果糖对肝癌细胞增殖的影响
3
作者 程杰娟 梅武轩 +1 位作者 刘佳琪 曾常春 《湖北科技学院学报(医学版)》 2024年第3期189-192,共4页
目的观察果糖摄入对肝癌细胞增殖的影响,并探讨对c-Myc/SLC1A5信号上调的机制。方法培养HepG2肝癌细胞,添加果糖进行干预,分别设置5、10mmol/L为低、高剂量果糖组,设置0mmol/L果糖为空白对照组;应用CCK-8进行细胞活性检测,克隆形成实验... 目的观察果糖摄入对肝癌细胞增殖的影响,并探讨对c-Myc/SLC1A5信号上调的机制。方法培养HepG2肝癌细胞,添加果糖进行干预,分别设置5、10mmol/L为低、高剂量果糖组,设置0mmol/L果糖为空白对照组;应用CCK-8进行细胞活性检测,克隆形成实验进行细胞增殖情况检测,流式细胞术进行细胞周期和细胞凋亡检测;应用荧光定量PCR检测c-Myc和SLC1A5的mRNA的转录情况,蛋白免疫印迹检测c-Myc和SLC1A5的蛋白表达情况,以明确其机制。结果CCK-8细胞增值率及克隆形成实验细胞增殖结果均显示果糖能促进肝癌细胞的体外增殖(高剂量组>低剂量组>空白组),且差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示果糖能抑制肝癌细胞的体外凋亡(高剂量组<低剂量组<空白组),然而G 2/M期的细胞所占比例结果为高剂量组>低剂量组>空白组。c-Myc和SLC1A5 mRNA的相对表达量及蛋白表达结果均为高剂量组>低剂量组>空白组。结论果糖摄入可以促进肝癌细胞的体外增殖,诱导c-Myc/SLC1A5的表达,该结果提示过多的果糖摄入具有促进肝癌发生与发展的潜在可能,其作用机制可能与c-Myc/SLC1A5的激活密切相关。 展开更多
关键词 果糖 肝癌细胞 C-MYC slc1A5 细胞增殖
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谷氨酰胺转运载体SLC1A5对食管鳞癌细胞恶性生物学的影响及其机制
4
作者 赵华山 张旭东 +5 位作者 陈乐乐 金星 周克旭 杜越 高社干 张秀森 《食管疾病》 2024年第1期8-11,23,共5页
目的探讨谷氨酰胺转运载体SLC1A5在食管鳞癌细胞系中的表达、对增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法采用实时定量PCR及免疫印迹法检测人正常食管上皮细胞系(SHEE)和食管鳞癌细胞系(KYSE30、KYSE70、KYSE140、TE1)中SLC1A5的表达水平。在... 目的探讨谷氨酰胺转运载体SLC1A5在食管鳞癌细胞系中的表达、对增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法采用实时定量PCR及免疫印迹法检测人正常食管上皮细胞系(SHEE)和食管鳞癌细胞系(KYSE30、KYSE70、KYSE140、TE1)中SLC1A5的表达水平。在SLC1A5高表达的KYSE70细胞中采用CRISPR/Cas9方法敲除SLC1A5,采用CCK8测定和划痕实验检测对照、敲除SLC1A5和使用SLC1A5抑制剂V-9302后KYSE70细胞的增殖和迁移能力。采用GSH/GSSG试剂盒检测对照、敲除SLC1A5和使用SLC1A5抑制剂V-9302后KYSE70细胞的谷氨酰胺代谢情况。结果SLC1A5在食管癌细胞系KYSE70中高表达,与正常食管上皮中的表达有统计学差异(P<0.05)。SLC1A5敲除或被抑制的KYSE70细胞的增殖能力低于未处理细胞(P<0.05),处理组划痕的迁移面积较未处理组明显减少(P<0.05),处理组的GSH/GSSG比率较未处理组的显著降低(P<0.05)。结论SLC1A5在ESCC细胞系中表达增高,抑制SLC1A5可降低ESCC细胞的增殖迁移能力与谷氨酰胺代谢,SLC1A5可能是食管癌治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 slc1A5 食管癌 增殖 凋亡 谷氨酰胺代谢
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SLC1A5对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株放射敏感性的影响及作用机制 被引量:2
5
作者 宋秋露 黄娟婵 +3 位作者 林春香 韦可璇 唐敏 赵伟 《中国癌症防治杂志》 CAS 2023年第2期163-169,共7页
目的探讨溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株放射敏感性的影响及其作用机制。方法采用直线加速器X射线和SLC1A5抑制剂L-γ-谷氨酰-对-硝基苯胺(L-γ-glutamyl-p-nitroanilide,... 目的探讨溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株放射敏感性的影响及其作用机制。方法采用直线加速器X射线和SLC1A5抑制剂L-γ-谷氨酰-对-硝基苯胺(L-γ-glutamyl-p-nitroanilide,GPNA)处理三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株,选取4 Gy、8 Gy剂量单独照射或分别联合3 mmol/L GPNA处理,采用CCK-8法检测细胞增殖能力;然后选取8 Gy剂量单独照射或联合3 mmol/L GPNA进行处理,分为对照组(DMSO组)、SLC1A5抑制剂组(GPNA组)、照射组(IR组)、联合组(IR+GPNA组)。采用细胞克隆形成实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力。采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光探针(DCFH-DA)检测细胞内的ROS水平,丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞内的MDA含量,Mito-Tracker Red CMXRos染色实验观察细胞线粒体形态,RT-qPCR法检测前列素内环氧化物合成酶2(prostaglandin synthase 2,PTGS2)基因的表达水平。结果与DMSO组相比,4 Gy组、8 Gy组、4 Gy+GPNA组和8 Gy+GPNA组细胞增殖能力均下降(均P<0.01),且4 Gy+GPNA组、8 Gy+GPNA组细胞增殖能力均低于对应的单纯照射组(均P<0.01),其中高辐射剂量组下降更明显;与DMSO组相比,IR组、GPNA组和IR+GPNA组的细胞克隆形成能力、迁移能力、侵袭能力均降低(均P<0.01),且IR+GPNA组降低更明显。与DMSO组相比,GPNA组、IR组和IR+GPNA组都存在不同程度的细胞内ROS水平增加,线粒体形态缩小,MDA含量升高以及PTGS2基因表达升高(均P<0.05),其中IR+GPNA组变化更为明显。结论SLC1A5抑制剂在照射的基础上进一步抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力,提高细胞放射敏感性,其机制可能与铁死亡激活有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 MDA-MB-231细胞 放射敏感性 slc1A5 铁死亡
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miR-571靶向SLC1A5调控食管癌细胞TE-13的凋亡研究 被引量:1
6
作者 涂启敏 姚元波 《生物技术》 CAS 2021年第4期358-362,328,共6页
[目的]探讨miR-571调控食管癌细胞凋亡的潜在分子机制。[方法]纳入2019年1月~2020年5月我院收治的食管癌患者60例,分析miR-571在其癌组织和癌旁组织中的表达情况。在食道癌细胞系Eca-109、NEC、TE-5、TE-10、TE-11、TE-13、KYSE-30、KYS... [目的]探讨miR-571调控食管癌细胞凋亡的潜在分子机制。[方法]纳入2019年1月~2020年5月我院收治的食管癌患者60例,分析miR-571在其癌组织和癌旁组织中的表达情况。在食道癌细胞系Eca-109、NEC、TE-5、TE-10、TE-11、TE-13、KYSE-30、KYSE-150、KYSE-450、KYSE-510中过表达或敲低miR-571,分析其凋亡水平。通过miRDB在线分析和荧光素酶报告系统检测miR-571的底物。[结果]miR-571在食管癌组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。在多种食管癌细胞中过表达miR-571后凋亡水平均有不同程度的上升(P<0.05);而敲低miR-571后凋亡水平均有不同程度的下降(P<0.05)。敲低SLC1A5时,食管癌细胞TE-13的凋亡水平上升(P<0.05)。过表达SLC1A5后,管癌细胞TE-13的凋亡水平下降(P<0.05)。在食管癌细胞TE-13中敲低miR-571后,SLC1A5的mRNA水平和蛋白水平上升(P<0.05);而过表达miR-571后,SLC1A5的mRNA水平和蛋白水平下降(P<0.05)。同时,荧光素酶报告实验发现miR-571靶向SLC1A5的3’端非编码区(P<0.05)。同时敲低miR-571和SLC1A5后,食管癌细胞TE-13的凋亡水平无明显变化(P<0.05)。同时过表达miR-571和SLC1A5后,食管癌细胞TE-13的凋亡水平无明显变化(P<0.05)。[结论]miR-571通过靶向SLC1A5 mRNA的3’端非编码区,降低SLC1A5的翻译水平,并促进了食管癌细胞TE-13的凋亡。 展开更多
关键词 miR-571 slc1A5 食管癌 TE-13 凋亡
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SLC1A5在结直肠癌中的表达及与其转移的关系 被引量:1
7
作者 刘婷 《实用癌症杂志》 2016年第1期47-49,共3页
目的分析溶质载体家族1成员5(SLC1A5)蛋白在原发性结直肠癌组织和癌旁正常黏膜组织中的表达情况及其与结直肠癌临床病理参数的关系。方法应用组织芯片和免疫组化的方法,检测80例原发性结直肠癌组织和35例癌旁正常组织中SLC1A5的表达,分... 目的分析溶质载体家族1成员5(SLC1A5)蛋白在原发性结直肠癌组织和癌旁正常黏膜组织中的表达情况及其与结直肠癌临床病理参数的关系。方法应用组织芯片和免疫组化的方法,检测80例原发性结直肠癌组织和35例癌旁正常组织中SLC1A5的表达,分析SLC1A5表达与结直肠癌临床病理参数的相关性。结果 SLC1A5在80例结直肠癌患者癌组织标本中的阳性表达率(88.75%)高于35例癌旁正常组织中阳性表达率(42.86%)(P<0.05)。SLC1A5高表达与结直肠癌患者是否存在远处转移有关(P<0.05)。但癌组织中SLC1A5的表达水平与患者性别、年龄、T分期、N分期和分化程度无明显相关性(P>0.05)。结论 SLC1A5可能是一个促进肿瘤远处转移的因子。 展开更多
关键词 溶质载体家族1成员5 结直肠肿瘤 肿瘤转移
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谷氨酰胺转运蛋白SLC1A5在胶质瘤中的表达及其临床病理学意义
8
作者 房信博 冯茜 +1 位作者 张旭光 王琳娜 《中国疗养医学》 2018年第9期897-900,共4页
目的葡萄糖无氧糖酵解被认为是肿瘤细胞的重要能量代谢方式之一,但近来研究发现,谷氨酰胺也是肿瘤细胞赖以生存的重要营养物质。肿瘤细胞在内外因素驱动下发生谷氨酰胺代谢重编程,可从细胞外摄取谷氨酰胺。SLC1A5是细胞吸收外源性谷氨... 目的葡萄糖无氧糖酵解被认为是肿瘤细胞的重要能量代谢方式之一,但近来研究发现,谷氨酰胺也是肿瘤细胞赖以生存的重要营养物质。肿瘤细胞在内外因素驱动下发生谷氨酰胺代谢重编程,可从细胞外摄取谷氨酰胺。SLC1A5是细胞吸收外源性谷氨酰胺最主要的转运蛋白。细胞通过SLC1A5来调控谷氨酰胺转运进入细胞内进而为细胞代谢提供能量来源。SLC1A5在多种肿瘤中已有报道,但在胶质瘤中尚未见有相关研究报道。本研究探讨SLC1A5在胶质瘤中表达的临床病理学意义及在体外胶质瘤细胞中的生物学作用。方法在本研究中我们通过免疫组化检测了70对胶质瘤及正常脑组织中SLC1A5的表达;并分析其表达的临床病理学意义及预后意义。在体外胶质瘤细胞系U87中运用短发夹RNA干扰沉默SLC1A5后,检测U87细胞系的增生和浸润。结果相比正常脑组织,SLC1A5在胶质瘤中显著性上调表达;其表达水平与肿瘤大小及不良预后具有统计学相关性。沉默SLC1A5能够显著性抑制U87细胞的增生及浸润。结论 SLC1A5可以作为胶质瘤的一个潜在干预靶点。 展开更多
关键词 slc1A5 胶质瘤 谷氨酰胺转运 增生 浸润
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氨基酸转运载体SLC1A5在肿瘤中的研究进展
9
作者 彭征 吴平 《广东医学院学报》 2014年第1期89-90,共2页
细胞对氨基酸的摄入依赖于多种氨基酸转运载体的介导。溶质载体家族1成员5(Solute Carrier Family 1Member 5,SLC1A5)作为氨基酸载体系统重要一员,主要负责谷氨酰胺以及一些无大型支链的中性氨基酸的跨膜转运。研究表明,SLC1A5在多种肿... 细胞对氨基酸的摄入依赖于多种氨基酸转运载体的介导。溶质载体家族1成员5(Solute Carrier Family 1Member 5,SLC1A5)作为氨基酸载体系统重要一员,主要负责谷氨酰胺以及一些无大型支链的中性氨基酸的跨膜转运。研究表明,SLC1A5在多种肿瘤中呈异常高表达,并与肿瘤细胞增殖密切相关。该文主要对SLC1A5的结构功能及其在肿瘤中的作用进行了综述。 展开更多
关键词 slc1A5 谷氨酰胺 肿瘤 综述文献
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CircFOXK2调节miR-330-5p/SLC1A5轴对卵巢癌细胞恶性生物学行为的影响
10
作者 段伟 刘钰 《现代肿瘤医学》 CAS 2024年第3期431-437,共7页
目的:探讨CircFOXK2对卵巢癌(ovarian cancer, OC)细胞恶性生物学行为的影响以及在此过程中对miR-330-5p/SLC1A5轴的调节机制。方法:将人OC细胞系的SKOV3细胞分为NC组(未转染)、 si-CircFOXK2-NC组(转染si-CircFOXK2-NC)、si-CircFOXK2... 目的:探讨CircFOXK2对卵巢癌(ovarian cancer, OC)细胞恶性生物学行为的影响以及在此过程中对miR-330-5p/SLC1A5轴的调节机制。方法:将人OC细胞系的SKOV3细胞分为NC组(未转染)、 si-CircFOXK2-NC组(转染si-CircFOXK2-NC)、si-CircFOXK2组(转染si-CircFOXK2)、 si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p-NC组(转染si-CircFOXK2和anti-miR-330-5p-NC)、si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p组(转染si-CircFOXK2和anti-miR-330-5p)。qRT-PCR检测细胞中CircFOXK2、miR-330-5p、SLC1A5 mRNA的表达;Western blot检测细胞中SLC1A5蛋白表达水平;CCK-8检测SKOV3细胞增殖;克隆形成实验检测SKOV3细胞克隆数量;流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡情况;Transwell小室实验测定SKOV3细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验验证CircFOXK2、miR-330-5p、SLC1A5三者的靶向关系。结果:与NC组和si-CircFOXK2-NC组相比,转染si-CircFOXK2组OC细胞中CircFOXK2、SLC1A5 mRNA水平及SLC1A5蛋白表达、细胞增殖活性、迁移和侵袭能力均降低(P<0.05),miR-330-5p的表达、细胞凋亡率均升高(P<0.05);anti-miR-330-5p回补实验结果显示,si-CircFOXK2+anti-miR-330-5p组细胞中SLC1A5 mRNA水平及SLC1A5蛋白表达升高,细胞增殖活性及迁移和侵袭能力降低(P<0.05)。结论:敲低CircFOXK2能够上调miR-330-5p表达,下调SLC1A5的表达,抑制OC细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为。 展开更多
关键词 卵巢癌 CircFOXK2 miR-330-5p/slc1A5 增殖 凋亡 迁移和侵袭
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氨基酸转运载体SLC1A5在胃癌组织中的表达及其临床病理学意义 被引量:2
11
作者 陆健 龚镭 +2 位作者 王小云 张丽莉 杨怡莎 《现代生物医学进展》 CAS 2019年第20期3880-3885,共6页
目的:研究氨基酸转运载体溶质载体家族1成员5(Solute Carrier Family 1 Member 5, SLC1A5)蛋白在胃癌组织中的表达情况,并探讨其与胃癌临床病理特征及预后的相关性。方法:收集进展期胃癌组织及对应癌旁组织90例,应用免疫组化技术检测SLC... 目的:研究氨基酸转运载体溶质载体家族1成员5(Solute Carrier Family 1 Member 5, SLC1A5)蛋白在胃癌组织中的表达情况,并探讨其与胃癌临床病理特征及预后的相关性。方法:收集进展期胃癌组织及对应癌旁组织90例,应用免疫组化技术检测SLC1A5在上述组织中的表达情况,并统计分析其表达与胃癌临床病理特征及预后的关系。同时通过基因数据库分析SLC1A5在胃癌组织和癌旁组织中表达情况及其对胃癌患者预后的影响。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中SLC1A5表达明显上调(P<0.0001)。数据库研究也显示SLC1A5在胃癌组织中表达明显上调(GSE 65801,P=0.0046;GSE 63809,P<0.0001;GSE 27342,P=0.0147)。胃癌组织中SLC1A5高表达与肿瘤大小(P<0.05)、肿瘤浸润深度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)、TNM分期(P<0.05)和Ki-67(P<0.01)相关,而与年龄、性别、肿瘤位置及分化程度均无显著相关性(P>0.05)。胃癌组织中SLC1A5表达强度与患者预后相关,表达越高,患者预后越差(总体生存率,P=0.0131;无复发生存率,P=0.0293)。数据库分析也显示SLC1A5高表达可明显缩短患者的总体生存期(GSE 14210,P=0.011;GSE 22377,P=0.0015)和无进展生存期(GSE 14210,P=0.0095;GSE 22377,P=0.0012)。结论:SLC1A5蛋白表达在胃癌组织中明显上调,且与肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关。SLC1A5高表达与胃癌患者预后不良密切相关。 展开更多
关键词 胃癌 溶质载体家族1成员5 诊断 预后
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miR-137通过靶向MCL1和谷氨酰胺转运SLC1A5调节肺癌细胞的铁死亡机制 被引量:2
12
作者 曹西迎 谢春发 +3 位作者 吴志诚 章祖雄 钟炜祥 黄明登 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期1135-1140,共6页
目的 探讨miR-137通过靶向髓系白血病1蛋白(MCL1)和谷氨酰胺转运蛋白溶质载体家族A1成员(SLC1A)5调节肺癌细胞铁死亡的机制。方法 非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549从美国典型培养物保藏中心获得。培养基均补充有10%胎牛血清(FBS),在37℃... 目的 探讨miR-137通过靶向髓系白血病1蛋白(MCL1)和谷氨酰胺转运蛋白溶质载体家族A1成员(SLC1A)5调节肺癌细胞铁死亡的机制。方法 非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549从美国典型培养物保藏中心获得。培养基均补充有10%胎牛血清(FBS),在37℃的含5%CO_(2)的潮湿空气中孵育。培养细胞以进行miR-137载体转染,直至细胞融合度达到70%~80%。将培养细胞分为对照组、miR-137转染组和miR-137沉默组。通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析细胞MCL1和SLC1A5、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4 mRNA表达。通过双重荧光素酶报告基因测定miR-137与MCL1和SLC1A的靶向作用。通过铁测定试剂盒测量每个细胞系中的Fe2+浓度。通过线粒体超氧化物(MitoSOX)指示剂测量了细胞中MitoSOX的产生。通过相应试剂盒检测活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平。通过流式细胞仪检测细胞凋亡。通过Transwell法测定miR-137对细胞迁移、侵袭的影响。结果 miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组MCL1、GPX4和SLC1A5 mRNA表达显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组MCL1、SLC1A5和GPX4 mRNA表达显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-137转染组显著降低了用Wt-SLC1A5和Wt-MCL1载体共转染的NSCLC细胞中的荧光素酶活性(P<0.05),而Mut-SLC1A5和Mut-MCL1模拟共转染荧光素酶活性酶无显著变化(P>0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组Fe2+浓度、MitoSOX浓度显著降低,线粒体相对膜电位显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组Fe2+浓度、MitoSOX浓度显著升高,线粒体相对膜电位显著降低(P<0.05)。miR-137沉默组较miR-137转染组和对照组ROS和MDA浓度显著降低,GSH浓度显著升高(P<0.05),miR-137转染组较对照组ROS和MDA浓度显著升高,GSH浓度显著降低(P<0.05)。24、48和72 h时,miR-137转染组较miR-137沉默组和对照组细胞凋亡率显著升高(P<0.05),72 h时miR-137沉默组较对照组细胞凋亡率显著� 展开更多
关键词 miR-137 髓系白血病1蛋白(MCL1) 蛋白溶质载体家族A1成员(slc1A)5 肺癌细胞 铁死亡
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