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SOCS1、SHP1在JAK2V617F突变阳性骨髓增殖性肿瘤中的表达及鲁索替尼的调控作用 被引量：8
1
作者 谢旭磊 杨圣俊 +5 位作者 郝洪岭 王素云 王红杰 齐峰 成志勇 刘贵敏 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期74-80,共7页
目的研究JAK2V617F突变阳性骨髓增殖性肿瘤(MPN)组织中JAK2V617F突变量与磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、细胞因子信号转导抑制蛋白1(SOCS1)、含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶1(SHP1)表达的关系,并探讨JAK2抑制剂鲁索替尼(ruxolitinib)对JAK2V6... 目的研究JAK2V617F突变阳性骨髓增殖性肿瘤(MPN)组织中JAK2V617F突变量与磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、细胞因子信号转导抑制蛋白1(SOCS1)、含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶1(SHP1)表达的关系,并探讨JAK2抑制剂鲁索替尼(ruxolitinib)对JAK2V617F突变阳性人红白血病细胞系HEL细胞的增殖和HEL细胞中SOCS1、SHP1表达的影响。方法纳入2012年7月至2016年8月于河北省人民医院和保定市第一医院就诊的48例JAK2V617F突变阳性的MPN患者为MPN组,同期24例贫血患者为对照组。采用免疫组织化学法检测骨髓组织标本中p-JAK2、SOCS1和SHP1的蛋白表达水平。SOCS1、SHP1蛋白表达量与JAK2V617F突变量的相关分析采用Spearman等级相关分析。用不同浓度(50、100、250、500、1 000 nmol/L)的鲁索替尼处理HEL细胞后,采用CCK-8法检测HEL细胞的活力,q PCR法检测MPN组织和HEL细胞中JAK2V617F突变量以及HEL细胞中JAK2、SOCS1、SHP1 m RNA表达水平,蛋白质印迹法检测HEL细胞中JAK2、p-JAK2、SOCS1、SHP1的蛋白表达水平。结果 (1)MPN组织中JAK2V617F/JAK2比值为(57.33±20.82)%,对照组为0%。MPN患者骨髓细胞质中p-JAK2、SOCS1、SHP1蛋白质表达量与对照组相比差异均有统计学意义(P均<0.01)。(2)MPN组织中SOCS1、SHP1蛋白表达量均与JAK2V617F突变量呈负相关(r=-0.648、-0.692,P均<0.05)。JAK2V617F/JAK2比值<50%MPN患者的SOCS1、SHP1蛋白表达水平高于JAK2V617F/JAK2比值≥50%的MPN患者(P均<0.01),p-JAK2的蛋白表达水平低于JAK2V617F/JAK2比值≥50%者(P<0.01)。(3)250 nmol/L鲁索替尼处理24、48、72 h后,HEL细胞活力分别为(60.06±3.87)%、(52.05±2.88)%、(36.43±2.01)%。随着鲁索替尼浓度的增加,HEL细胞中JAK2的m RNA和蛋白表达与p-JAK2的蛋白表达水平逐渐降低(P<0.01,P<0.05),SOCS1和SHP1的m RNA和蛋白表达逐渐增加(P均<0.01)。结论鲁索替尼能够抑制HEL细胞中JAK2的m RNA和蛋白表达及其磷酸化水平,增加SOCS1、SHP1 m RNA和蛋白表达,降 展开更多
关键词 骨髓增殖性肿瘤 JAK2V617F突变 JAK激酶 细胞因子信号转导抑制蛋白 蛋白酪氨酸磷酸酶 sh2域
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SH2域与磷酸化多肽相互作用的连续溶剂模型研究
2
作者 袁海斌 向明礼 +3 位作者 邓小强 陈俐娟 石兵 杨胜勇 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第3期546-550,共5页
使用连续溶剂模型方法研究了SH2结构域与磷酸化多肽pYXXX(X为20种常见氨基酸残基中的任意一种)之间的相互作用.首先计算了已知的SH2域-磷酸化酪氨酸多肽复合物之间的结合能,理论计算的结果与实验测得的亲合能之间的相关系数为0.91,验证... 使用连续溶剂模型方法研究了SH2结构域与磷酸化多肽pYXXX(X为20种常见氨基酸残基中的任意一种)之间的相互作用.首先计算了已知的SH2域-磷酸化酪氨酸多肽复合物之间的结合能,理论计算的结果与实验测得的亲合能之间的相关系数为0.91,验证了理论模型的正确性.然后,用该模型方法计算了SH2域与pYXXX之间的结合能,分析了磷酸化酪氨酸多肽pYXXX中+1,+2,+3位置上残基对结合能的影响.结果表明+2,+3位置上残基的变化对结合能影响较大,+2位置上带负电的残基和+3位置上的疏水性残基有利于SH2域与pYXXX之间的相互作用,这与实验结果一致. 展开更多
关键词 sh2域 磷酸化酪氨酸多肽 连续溶剂模型 结合能
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重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP及其突变体的构建与鉴定 被引量：10
3
作者 史静 彭智 +5 位作者 罗红伟 曹唯希 陶崑 李亚娟 王海霞 冯文莉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期507-512,共6页
目的构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HA标签的SH2基因重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP及其突变体Ad5-hSH2mt-EGFP,并观察其对K562细胞增殖的影响。方法设计并化学合成引物,采用RT-PCR法扩增hSH2基因,重叠PCR法扩增hSH2mt基因,分别克隆至pAd... 目的构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HA标签的SH2基因重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP及其突变体Ad5-hSH2mt-EGFP,并观察其对K562细胞增殖的影响。方法设计并化学合成引物,采用RT-PCR法扩增hSH2基因,重叠PCR法扩增hSH2mt基因,分别克隆至pAdTrack-CMV,构建穿梭质粒,经PmeⅠ酶切,转化感受态pAdEasy-BJ5183,在细菌内同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒质粒pAd5-hSH2-EGPF和pAd5-hSH2mt-EGPF,PacⅠ酶切后转染AD293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP和Ad5-hSH2mt-EGFP,扩增病毒,测定滴度并经PCR和Western blot鉴定。重组腺病毒感染K562细胞,MTT法检测病毒对K562细胞增殖活性的影响。结果重组腺病毒质粒pAd5-hSH2-EGFP和pAd5-hSH2mt-EGFP经酶切鉴定构建正确;重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP和Ad5-hSH2mt-EGFP的滴度均可达1.6×1012;PCR结果表明,2种重组腺病毒包装和扩增成功,Western blot结果表明,重组腺病毒携带的目的基因能够在AD293细胞中表达;MTT检测证实,Ad5-hSH2-EGFP对K562细胞的增殖具有明显的抑制作用。结论已成功构建重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP和Ad5-hSH2mt-EGFP,Ad5-hSH2-EGFP能在体外明显抑制K562细胞的增殖,为进一步探讨SH2基因对慢性粒细胞白血病的治疗作用及其机制奠定了基础。 展开更多
关键词 重组腺病毒 含sh2域蛋白质酪氨酸磷酸酶类 K562细胞 细胞增殖
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腺病毒介导的SD-HA融合蛋白表达对慢性粒细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响 被引量：1
4
作者 彭智 桂敏 +1 位作者 冯文莉 杜莉 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第15期1922-1924,共3页
目的探讨腺病毒介导的SD-HA融合蛋白表达对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法外源性融合蛋白表达的检测采用Westernblot;细胞经免疫荧光染色后用激光共聚焦显微镜观察SD-HA融合蛋白在细胞中的定位;采用MTT法检测细胞增... 目的探讨腺病毒介导的SD-HA融合蛋白表达对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法外源性融合蛋白表达的检测采用Westernblot;细胞经免疫荧光染色后用激光共聚焦显微镜观察SD-HA融合蛋白在细胞中的定位;采用MTT法检测细胞增殖的情况;采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果 SD-HA、SmD-HA融合蛋白能在CML细胞株中有效表达,且定位于胞浆。重组腺病毒Ad5F35-SD-HA感染CML细胞后能特异性阻滞CML细胞周期由G0/G1期向S期推进,具有抑制细胞的增殖效应,且对照组比较早期凋亡细胞明显增多(P<0.05)。结论腺病毒介导的SD-HA基因转染对CML细胞有抑制增殖和诱导凋亡的双重效应。 展开更多
关键词 白血病 髓系 慢性 BCR-ABL阳性 含sh2域蛋白质酪氨酸磷酸酶类 细胞增殖 细胞凋亡
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Src同源酪氨酸磷酸酶(Shp2)在雄性生殖调控的研究进展
5
作者 郭凯敏 刘凌云 田润辉 《中国男科学杂志》 CAS CSCD 2016年第7期64-67,共4页
Src同源酪氨酸磷酸酶（Src homology phosphotyrosyl phosphatase2， Shp2）是非受体蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase, PTP）家族成员之一，由蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型11（protein tyrosine phosphatase nonreceptor11... Src同源酪氨酸磷酸酶（Src homology phosphotyrosyl phosphatase2， Shp2）是非受体蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase, PTP）家族成员之一，由蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型11（protein tyrosine phosphatase nonreceptor11，PTPN11）基因编码并在人类细胞和组织中广泛表达，参与细胞多种生物活动，包括细胞的增殖、分化、有丝分裂、器官发育、免疫反应以及代谢过程。已有大量研究显示Shp2参与多种疾病的发生，如全身系统肿瘤（胰腺癌[1]、肺癌[2]、肝癌[3]、乳腺癌[4]等），在介导细胞增殖和分化过程中，Shp2是关键的细胞内调控因子，其作用已被广泛揭示。而Shp2在睾丸组织的表达以及调控精子方面的研究最近才成为热点。本文就近些年Shp2在雄性生殖的调控方面做一综述。 展开更多
关键词 含sh2域蛋白质酪氨酸磷酸酶类 精子发生 雄激素类
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