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题名PD-L1胞外域密码子优化及原核表达纯化
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作者
方宇
吕舰
王志华
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机构
武汉大学人民医院
中国医学科学院/北京协和医学院国家心血管疾病中心、阜外医院心血管疾病国家重点实验室
中国医学科学院阜外医院深圳市心血管疾病重点实验室
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出处
《医学研究杂志》
2021年第12期49-54,共6页
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基金
国家自然科学基金资助项目(81722007)。
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文摘
目的获取活性的PD-L1胞外域蛋白。方法本研究基于大肠杆菌的原核表达系统,通过稀有密码子优化,将PD-L1胞外域优化后的基因序列转入pET-28a(+)载体中,诱导其以可溶性状态在细菌上清裂解液中表达,再通过SDS-PAGE考马斯亮蓝染色对所得蛋白进行检测分析。结果在密码子优化前,改变温度或者IPTG浓度等诱导条件,目的蛋白始终在包涵体中表达,无法得到保持生物活性、可溶性的PD-L1胞外域蛋白;密码子优化后,通过摸索诱导条件,发现在16℃,0.1mmol/L IPTG的诱导条件下,诱导12h,成功在细菌上清裂解液中得到可溶性的PD-L1胞外域目的蛋白,经镍离子螯合纯化树脂纯化后,获得了保持生物活性及结构的PD-L1胞外域目的蛋白。结论成功获取活性的PD-L1胞外域蛋白为SELEX筛选识别PD-L1胞外域特异性DNA/RNA适体提供实验基础,为通过DNA/RNA适体与PD-L1结合从而阻断PD-1/PD-L1信号通路导致的肿瘤的免疫逃逸提供了新的临床思路。
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关键词
PD-L1
原核表达
密码子优化
SELEX
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Keywords
PD-L1
Prokaryotic expression system
Rare codons optimization
selxe
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分类号
R331
[医药卫生—人体生理学]
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题名核酸适配子在医学中的应用研究
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作者
何大莉
曾照芳
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机构
重庆医科大学检验医学院
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出处
《生物信息学》
2012年第4期297-300,共4页
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文摘
核酸适配子与其靶物质的结合过程类似于抗原抗体反应,凡涉及抗体的领域几乎都可以用核酸适配子代替。与抗体相比核酸适配子具有稳定性好、易于人工合成和修饰、靶分子范围更广、与靶物质结合的特异性和敏感性更强等优点。近年来,核酸适配子已广泛应用于药物研发、基础医学研究、疾病诊断、临床治疗等方面。
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关键词
核酸适配子
selxe技术
临床诊断
临床治疗
药物研发
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Keywords
Aptamer
selxe technology
clinical diagnosis
clinical care
drug development
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分类号
Q343.15
[生物学—遗传学]
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