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SEDT-PA致病基因WISP3突变体的构建及在COS-7细胞中的表达定位 被引量：2
1
作者 王敏 周后德 +10 位作者 彭依群 翟木绪 何玉玲 谢辉 隋国良 罗湘杭 郭丽娟 黄佼 杨敏 崔蓉蓉 廖二元 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2006年第6期554-560,共7页
目的通过构建晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病(SEDT-PA)致病型(1000T-C,840delT)Wnt诱导分泌蛋白3(WISP3)与绿色荧光蛋白融合表达的真核表达载体,观察其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位,为研究WISP3突变致SEDT-PA的机理奠定基... 目的通过构建晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病(SEDT-PA)致病型(1000T-C,840delT)Wnt诱导分泌蛋白3(WISP3)与绿色荧光蛋白融合表达的真核表达载体,观察其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位,为研究WISP3突变致SEDT-PA的机理奠定基础。方法从正常人软骨细胞获得野生型WISP3基因的全长cDNA(WT-WISP3);定点突变方法构建携带WISP3基因致病型的重组真核表达质粒MUT1000T/C/pEGFP-C2和MUT840delT/pEGFP-C2;以空白载体pEGFP-C2为对照,脂质体转染法将重组质粒瞬时转染COS-7细胞,48h后用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达;半定量RT-PCR法检测WISP3基因的表达。结果测序和酶切鉴定证实插入片段大小和序列的正确;突变体在COS-7细胞中均高效表达;荧光显微镜观察发现,转染野生型WISP3基因的COS-7细胞中绿色荧光均匀分布在细胞浆和细胞膜,转染突变体的COS-7细胞中荧光呈斑点状染色和聚集现象。结论成功构建了SEDT-PA致病基因WISP3突变体,且发现野生型WISP3蛋白定位于细胞浆和细胞膜,而突变型的WISP3蛋白在细胞浆内异常聚集,为进一步探讨SEDT-PA的发病机制创造条件。 展开更多
关键词 sedt-pa WISP 3 突变体 定点突变 亚细胞定位
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