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人成纤维细胞生长因子受体2Ⅲc及其突变型重组腺病毒的获得和在乳腺癌细胞中的表达 被引量：2
1
作者 张勇仓 李丽玲 +5 位作者 陈小佳 秦丽 郭淑军 刘兰 徐丽慧 洪岸 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期363-370,共8页
获得人成纤维细胞生长因子受体2Ⅲc(FGFR2Ⅲc)及其S252W突变型重组腺病毒,感染乳腺癌细胞MDA-MB-231,为下一步研究FGFR2Ⅲc基因的功能和作用机制奠定基础。以本实验室保存的含FGFR2Ⅲc基因的质粒为模板,PCR扩增得到FGFR2Ⅲc基因,重叠延... 获得人成纤维细胞生长因子受体2Ⅲc(FGFR2Ⅲc)及其S252W突变型重组腺病毒,感染乳腺癌细胞MDA-MB-231,为下一步研究FGFR2Ⅲc基因的功能和作用机制奠定基础。以本实验室保存的含FGFR2Ⅲc基因的质粒为模板,PCR扩增得到FGFR2Ⅲc基因,重叠延伸法PCR获得FGFR2ⅢcS252W突变型基因;分别将上述野生型和突变型基因克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,得到重组穿梭质粒pAdTrack-FGFR2Ⅲc和pAdTrack-FGFR2ⅢcS252W,DNA测序证实。Pme I酶切后分别与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ-5183感受态细菌同源重组,得到的重组表达质粒Ad-FGFR2Ⅲc和Ad-FGFR2ⅢcS252W Pac I酶切线性化后转染HEK293A细胞进行重组腺病毒的包装和扩增,通过GFP报告基因观察病毒表达情况。收集重组病毒颗粒并测定滴度,进一步感染乳腺癌细胞MDA-MB-231,RT-PCR和Western blotting方法检测目的基因的表达,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法和流式细胞术分析细胞增殖情况。结果表明,成功构建了人FGFR2Ⅲc及其S252W突变型基因的重组腺病毒表达载体,获得的重组腺病毒颗粒能高效感染MDA-MB-231细胞,并表达目的基因。MTT结果显示FGFR2Ⅲc和S252W均能抑制MDA-MB-231细胞增殖,S252W抑制效果更加明显。流式细胞术表明FGFR2Ⅲc和S252W均能使MDA-MB-231细胞周期停滞于G0/G1期,抑制细胞增殖。 展开更多
关键词 FGFR2Ⅲc S252w突变 腺病毒载体 MDA-MB-231细胞
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FGFR2IIIc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌作用的研究
2
作者 张勇仓 旦增顿珠 +1 位作者 王聚乐 洪岸 《西藏大学学报（社会科学版）》 CSSCI 2011年第6期83-87,共5页
目的:研究FGFR2IIIc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌的作用。方法:确定腺病毒颗粒Ad、Ad-FGFR2IIIc及Ad-FGFR2IIIcS252W感染4T1细胞的最佳MOI,并通过RT-PCR检测外源目的基因的表达。建立BALB/c小鼠的4T1乳腺癌模型,在此模型上原位注射重... 目的:研究FGFR2IIIc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌的作用。方法:确定腺病毒颗粒Ad、Ad-FGFR2IIIc及Ad-FGFR2IIIcS252W感染4T1细胞的最佳MOI,并通过RT-PCR检测外源目的基因的表达。建立BALB/c小鼠的4T1乳腺癌模型,在此模型上原位注射重组腺病毒颗粒治疗17天,观察其对小鼠肿瘤的作用。结果:当MOI=60时腺病毒对4T1细胞的感染率可达到95%以上,RT-PCR结果显示,FGFR2IIIc和FGFR2IIIcS252W可在4T1细胞中成功表达。与对照组和Ad组比较,Ad-FGFR2IIIc对小鼠肿瘤无明显作用,Ad-FGFR2IIIcS252W能显著减缓小鼠肿瘤体积和质量的增长。结论:FGFR2IIIc对BALB/c小鼠4T1乳腺癌无显著作用,FGFR2IIIcS252W能够显著抑制BALB/c小鼠4T1乳腺癌的生长。 展开更多
关键词 FGFR2IIIc S252w突变 腺病毒 4T1乳腺癌小鼠
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