布鲁氏菌S2疫苗株实时荧光定量PCR检测体系的建立及应用

1

作者 田国忠 刘波 +2 位作者 国原源 苏丽琴 张必科 《中华地方病学杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期328-331,共4页

目的建立一种布鲁氏菌S2疫苗株的实时荧光定量PCR检测体系。方法依据布鲁氏菌S2疫苗株与其他布鲁氏菌参考菌株全基因组序列的差异,设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测体系。自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,收集22株布鲁... 目的建立一种布鲁氏菌S2疫苗株的实时荧光定量PCR检测体系。方法依据布鲁氏菌S2疫苗株与其他布鲁氏菌参考菌株全基因组序列的差异,设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测体系。自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所,收集22株布鲁氏菌参考菌株及8种非布鲁氏菌对照菌株的DNA;同时自布病疫苗生产厂采集环境样本,使用血液/组织基因组DNA提取试剂盒提取环境样本细菌DNA。对获取的DNA先行普通PCR预扩增,再以扩增的PCR产物为模板进行实时荧光定量PCR二次扩增(巢式荧光定量PCR),观察是否出现特异荧光曲线及相应的循环数(Ct值),并测试其灵敏性。结果建立的实时荧光定量PCR检测体系,除S2疫苗株外,其他21株布鲁氏菌参考菌株和8种非布鲁氏菌对照菌株均未检出特异荧光曲线(无Ct值)。建立的检测体系,检测布鲁氏菌S2疫苗株DNA的最低限为4.34 fg;采集的14份环境样本,其中3份检测到布鲁氏菌S2疫苗株DNA。结论建立的实时荧光定量PCR检测体系,能够检测到样本中布鲁氏菌S2疫苗株,具有较好的灵敏性和特异性。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 S2疫苗株 实时荧光定量PCR

原文传递

鉴别布鲁菌S2疫苗株的双重实时荧光PCR方法的建立与应用 被引量：2

2

作者 董浩 原霖 +6 位作者 赵明海 刘巍 许中衎 沈子莹 徐阳 王传彬 梁春南 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期2399-2403,2420,共6页

为了建立一种鉴别布鲁菌S2疫苗株和其他种类布鲁菌的双重实时荧光PCR检测方法,通过查阅文献,分别设计了特异性扩增布鲁菌IS711插入序列和S2疫苗株缺失序列的2套引物探针,并对引物和探针浓度进行了优化,对其敏感性、特异性和重复性进行... 为了建立一种鉴别布鲁菌S2疫苗株和其他种类布鲁菌的双重实时荧光PCR检测方法,通过查阅文献,分别设计了特异性扩增布鲁菌IS711插入序列和S2疫苗株缺失序列的2套引物探针,并对引物和探针浓度进行了优化,对其敏感性、特异性和重复性进行了评价,同时,使用该方法对不同类型的临床样品进行了检测。结果表明,用该方法对2种阳性质粒标准品的最低检测限均为10 copies/μL;该方法能特异性鉴别S2疫苗株,其他非布鲁菌的细菌核酸均未有特异性的扩增曲线;批内和批间重复变异系数均小于3%,重复性良好。对112份临床样品的检测结果显示该方法的阳性样品检出率高于套式PCR检测方法,并可以成功对S2疫苗株的核酸进行鉴别。该研究建立的鉴别布鲁菌S2疫苗株的双重实时荧光PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好,具有较好的临床应用价值。 展开更多

关键词 布鲁菌 S2疫苗株 实时荧光PCR 鉴别诊断

原文传递

布氏杆菌S2疫苗株GL_0002181基因的原核表达 被引量：1

3

作者 王文龙 红梅 呼和巴特尔 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第8期62-67,共6页

为了鉴别羊种布氏杆菌自然感染和S2疫苗(猪种)免疫羊,选用布氏杆菌S2疫苗株进行了全基因组测序,预测出的编码基因与已公布的布氏杆菌基因组数据库比对分析,找出S2特有基因GL_0002181,对GL_0002181基因进行原核表达及免疫原性验证,同时用... 为了鉴别羊种布氏杆菌自然感染和S2疫苗(猪种)免疫羊,选用布氏杆菌S2疫苗株进行了全基因组测序,预测出的编码基因与已公布的布氏杆菌基因组数据库比对分析,找出S2特有基因GL_0002181,对GL_0002181基因进行原核表达及免疫原性验证,同时用BP26蛋白作为对照组。Western blot结果显示:以S2疫苗免疫绵羊血清作为检测抗体,重组菌BL21(pETGL_0002181)、BL21(pETBP26)与BL21(DE3)空菌比较,分别在31 ku、32 ku处出现了特异性条带,说明重组蛋白能够与S2免疫血清中的抗体发生特异性反应,具有较好的免疫原性;而重组表达菌BL21(pETGL_0002181)菌体蛋白与自然感染血清不反应,重组蛋白BP26与自然感染血清反应,说明GL_0002181基因在S2疫苗株中存在,在羊种自然流行株中不存在。结果表明:GL_0002181抗原可用于布氏杆菌S2疫苗免疫与羊种布氏杆菌自然感染鉴别诊断,为布氏杆菌病有效诊断提供理论依据。 展开更多

关键词 布氏杆菌 S2疫苗株 GL_0002181基因 原核表达 鉴别诊断

原文传递

乙型脑炎病毒减毒活疫苗生产株SA_(14)-14-2基因组全序列的测定 被引量：36

4

作者 曾明 俞永新 +3 位作者 董关木 贾丽丽 姚亚夫 李德富 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期535-539,共5页

目的　对乙型脑炎减毒活疫苗SA14 1 4 2生产株进行全序列测定和分析 ,为进一步了解其基因组结构与疫苗减毒机制的关系及研究疫苗生产的遗传学质控标准奠定基础。方法　根据已发表的SA14 1 4 2株及SA14株的序列 ,设计 6对相互重叠片段的... 目的　对乙型脑炎减毒活疫苗SA14 1 4 2生产株进行全序列测定和分析 ,为进一步了解其基因组结构与疫苗减毒机制的关系及研究疫苗生产的遗传学质控标准奠定基础。方法　根据已发表的SA14 1 4 2株及SA14株的序列 ,设计 6对相互重叠片段的引物 ,通过RT PCR扩增出SA14 1 4 2疫苗生产株的cDNA片段 ,分别克隆到pGEM T载体 ,转化至TG1受体菌中 ,挑取阳性克隆进行鉴定后测定全序列。结果　SA14 1 4 2生产株基因组全序列长 1 0 976个核苷酸 ,96到 1 0 3 94为一个长开放读码框 ,编码 3 43 2个氨基酸。与国外测定的SA14和SA14 1 4 2株的核苷酸序列和氨基酸序列相比 ,同源性均在 99%以上 ,突变位点分散于各个区域 ,以往推测的 7个可能与减毒相关的位点均未发生改变。1 2 96～ 1 50 6间有 4个突变位点 ,有可能作为疫苗质控的遗传学标记。结论　乙脑减毒活疫苗生产株的基因组全序列基本类似于已发表的序列 ,若干不同位点产生的原因可能在于病毒株的不同传代。全序列的测定对于研究疫苗株的减毒机理及疫苗的遗传学质控标准具有一定意义。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 SA14-14-2疫苗株 基因组 序列分析

原文传递

三带喙库蚊和致倦库蚊经口感染乙型脑炎病毒疫苗SA14-14-2株的研究 被引量：11

5

作者 章域震 张海林 +5 位作者 俞永新 冯云 董关木 杨卫红 贾丽丽 姚亚夫 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第7期584-586,591,共4页

目的通过实验,确定被SA14-14-2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后,是否存在感染和传播的可能.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,用乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊,感染后不同时... 目的通过实验,确定被SA14-14-2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后,是否存在感染和传播的可能.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,用乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊,感染后不同时间取一定数量的蚊,研磨制成悬液,应用空斑试验方法检测感染后不同时间蚊体内的病毒存在情况和病毒滴度.结果在用6.06logPFU/ml SA14-14-2病毒经口感染的两种库蚊中,没有检测到病毒空斑,即没发现蚊虫的感染;在用较高的6.18logPFU/ml病毒经口感染的三带喙库蚊和致倦库蚊中,分别有一组蚊虫出现低滴度感染,空斑形成单位分别是1.24和1.11log10PFU/ml;在用野毒株经口感染的两种库蚊,共计19组蚊虫中,有14组发生感染,空斑形成单位在3.18～4.79log10PFU/ml.结论作为乙脑主要传播媒介的三带喙库蚊和致倦库蚊对SA14-14-2疫苗株病毒的经口感染和病毒在体内的复制严重受限,当叮咬接种疫苗的人后,不具备发生乙脑病毒感染和传播的能力. 展开更多

关键词 乙型脑炎SA14—14—2疫苗株 三带喙库蚊 致倦库蚊 经口感染 空斑试验

下载PDF 职称材料

三带喙库蚊胸腔接种乙型脑炎减毒活疫苗病毒的感染动态及致病力观察 被引量：8

6

作者 冯云 张海林 +5 位作者 俞永新 章域震 杨卫红 董关木 贾丽丽 姚亚夫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期278-281,共4页

目的通过蚊虫胸腔接种乙脑病毒减毒活疫苗SAl4-14-2株。了解该疫苗病毒在蚊虫体内的繁殖情况及其毒力稳定性，进一步评价该疫苗的安全性。方法建立三带喙库蚊的实验室种群，用SA14-14-2、SA14和中山株胸腔接种三带喙库蚊，感染后不同时... 目的通过蚊虫胸腔接种乙脑病毒减毒活疫苗SAl4-14-2株。了解该疫苗病毒在蚊虫体内的繁殖情况及其毒力稳定性，进一步评价该疫苗的安全性。方法建立三带喙库蚊的实验室种群，用SA14-14-2、SA14和中山株胸腔接种三带喙库蚊，感染后不同时间取一定数量的蚊虫。研磨制成悬液，用空斑试验检测蚊虫体内的病毒滴度。用感染蚊悬液接种乳鼠和感染蚊虫直接叮咬乳鼠的方法，观察对乳鼠的致病性。结果SAl4-14-2、SAl4和中山株病毒感染蚊虫后，第2～20d蚊虫体内均能检测到病毒，其中SA14-14-2株的滴度为2～3．72logPFU／ml，SAl4株为3～4．85logPFU／ml，中山株为3～5．40log-PFu／ml。中山株的感染滴度最高，其次是SA14株，SAl4-14—2株的感染滴度最低。表明蚊虫对野毒株（中山株和SA14株）更为敏感。感染SA14-14-2病毒的三带喙库蚊悬液接种乳鼠，未能引起乳鼠发病或死亡。感染SA14-14-2病毒的三带喙库蚊叮咬乳鼠，未见乳鼠发病或死亡，也未从小白鼠血清中检测到乙脑病毒抗体。结论经胸腔接种。SA14-14-2病毒能在三带喙库蚊体内稳定繁殖。动物接种和蚊虫叮咬试验表明，经蚊体内繁殖的SA14-14-2病毒毒力仍保持原有的弱毒特性，表明该减毒活疫苗通过蚊虫体内繁殖后不会造成传播。 展开更多

关键词 流行性乙型脑炎病毒 SSA14-14-2疫苗株 三带喙库蚊 胸腔接种 动物感染实验 空斑试验

下载PDF 职称材料

布鲁氏菌疫苗株S2全基因组测序及牛羊布鲁氏菌比较基因组学研究 被引量：7

7

作者 红梅 冯陈晨 +2 位作者 岳建伟 呼和巴特尔 王文龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1133-1136,共4页

目的为了了解布鲁氏菌S2疫苗株全基因组结构及分子生物学功能。方法对布鲁氏菌疫苗株S2进行全基因组测序,并与GenBank公布的6株牛羊布鲁氏菌进行比较基因组学研究。结果与结论通过全基因组测序发现S2基因组大小为3 331 982bp,预测基因有... 目的为了了解布鲁氏菌S2疫苗株全基因组结构及分子生物学功能。方法对布鲁氏菌疫苗株S2进行全基因组测序,并与GenBank公布的6株牛羊布鲁氏菌进行比较基因组学研究。结果与结论通过全基因组测序发现S2基因组大小为3 331 982bp,预测基因有3 243个,GC含量为57.23%。S2预测基因中大多数基因功能主要与糖代谢﹑氨基酸代谢﹑氨基酸转运和膜转运有关。通过比较基因组学研究发现S2有20个特有基因。另外S2与GenBank公布的S2序列进行比对发现有19个差异基因。 展开更多

关键词 布鲁氏菌 布鲁氏菌疫S2疫苗株 全基因组测序 比较基因组学研究

下载PDF 职称材料

布鲁菌S2疫苗株免疫牛与牛种、羊种布鲁菌自然感染牛ELISA鉴别诊断方法的建立 被引量：6

8

作者 武宁 王晶钰 +6 位作者 刘万华 邱渊皓 任娟娟 唐攀 曹晓蕾 陈占莉 江越德 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期243-247,共5页

为建立区分猪种布鲁菌S2疫苗株接种奶牛与布鲁菌自然感染奶牛,BLAST比对分析羊种、牛种、猪种、犬种、沙林鼠种和绵羊种6种布鲁菌基因序列,发现repA-related基因是猪种布鲁菌与牛种及羊种布鲁菌的差异基因。设计引物PCR扩增获得repA-rel... 为建立区分猪种布鲁菌S2疫苗株接种奶牛与布鲁菌自然感染奶牛,BLAST比对分析羊种、牛种、猪种、犬种、沙林鼠种和绵羊种6种布鲁菌基因序列,发现repA-related基因是猪种布鲁菌与牛种及羊种布鲁菌的差异基因。设计引物PCR扩增获得repA-related基因片段,克隆并原核表达得到了布鲁菌repA-related融合蛋白,以repA-related蛋白建立间接ELISA检测方法。用repA-related蛋白间接ELISA检测猪种S2疫苗株接种动物血清为阳性,检测牛种和羊种布鲁菌自然感染动物血清为阴性。repA-related蛋白间接ELISA能从试管凝聚实验(SAT)及常规ELISA检测阳性的奶牛血清样本中,区分出S2疫苗接种牛与牛种布鲁菌感染牛。 展开更多

关键词 布鲁菌病 布鲁菌S2疫苗株 repA-related蛋白 间接ELISA 鉴别诊断

原文传递

鸡传染性喉气管炎病毒SA_2疫苗株免疫效力的研究 被引量：1

9

作者 朱庆虎 黄骏明 +1 位作者 郭连喜 田枫岚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期141-143,共3页

鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）疫苗株尿囊膜乳剂原液经点眼接种２、７和１５日龄雏，２日龄雏鸡组在接种后第７天有２０％（１／５）鸡出现眼睑肿胀和流泪等眼部反应，７日龄和１５日龄雏鸡组无明显临床变化。用该疫苗株乳剂原液点... 鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）疫苗株尿囊膜乳剂原液经点眼接种２、７和１５日龄雏，２日龄雏鸡组在接种后第７天有２０％（１／５）鸡出现眼睑肿胀和流泪等眼部反应，７日龄和１５日龄雏鸡组无明显临床变化。用该疫苗株乳剂原液点眼接种１月龄以上鸡眼部无明显反应，但通过气管接种后，２６．７％（４／１５）鸡表现出ＩＬＴ临床症状。试验用ＳＡ２株点眼接种免疫１月龄以上鸡，免疫组保护率为１００％（２０／２０），对照组发病率为１００％（１０／１０）、死亡率为４０％（４／１０）。２、７和１５日龄雏鸡点眼毒力试验的３组鸡，于接种后２１～３４天用王岗株ＩＬＴ强毒攻击，１００％得到保护，而对照组鸡１００％发病。试验结果表明，ＳＡ２疫苗株是一株毒力温和。 展开更多

关键词 SA2疫苗株 免疫效力 鸡 ILTV

下载PDF 职称材料

猪繁殖与呼吸综合征病毒野毒株与基因缺失弱毒疫苗株TJM-F92一步RT-PCR鉴别方法的建立 被引量：9

10

作者 梅林 高英杰 +1 位作者 梁智选 赵建增 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期492-494,共3页

目的建立一种猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)野毒株与基因缺失弱毒疫苗株TJM-F92一步RT-PCR鉴别方法。方法基于高致病性PRRSV TJ株及其基因缺失致弱疫苗株TJM-F92的nsp2基因序列设... 目的建立一种猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)野毒株与基因缺失弱毒疫苗株TJM-F92一步RT-PCR鉴别方法。方法基于高致病性PRRSV TJ株及其基因缺失致弱疫苗株TJM-F92的nsp2基因序列设计1对引物,建立可鉴别不同高致病性PRRSV野毒株与基因双缺失弱毒疫苗株的一步法RT-PCR,并进行特异性、灵敏度、敏感性、重复性验证。结果高致病性PRRSV TJ株扩增出1 100 bp的条带,基因缺失弱毒疫苗株TJM-F92扩增出740 bp的条带,可对两毒株作出准确鉴别;建立的一步法RT-PCR可测出101TCID50/ml的PRRSV-TJ疫苗毒株,灵敏度较高;对已知阳性和阴性仔猪血清样品的检测结果100%相符,敏感性较高,且重复性较好。结论建立的一步法RT-PCR可用于接种TJM-F92疫苗猪群中PRRSV野毒感染与疫苗免疫猪的临床鉴别,有助于评价疫苗的免疫效果并及早发现野毒感染。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp2基因缺失疫苗株 野毒株 逆转录聚合酶链反应

原文传递

生产用流感病毒H3N2型疫苗株血凝素蛋白HA1的基因分析

11

作者 马雷钧 杨月莲 +2 位作者 周锋 杨菲茹 马相虎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第12期1164-1168,共5页

目的分析生产用流感病毒H3N2型疫苗株血凝素蛋白HA1基因变异对病毒特性的影响。方法比较2005～2008年间上海生物制品研究所流感病毒H3N2型各疫苗株的生产数据,并对H3N2型各疫苗株的HA1基因序列数据进行分析。结果各疫苗株中,A/NewYork/5... 目的分析生产用流感病毒H3N2型疫苗株血凝素蛋白HA1基因变异对病毒特性的影响。方法比较2005～2008年间上海生物制品研究所流感病毒H3N2型各疫苗株的生产数据,并对H3N2型各疫苗株的HA1基因序列数据进行分析。结果各疫苗株中,A/NewYork/55/2004(NYMCX-157)的血凝素得率最高,A/Brisbane/10/2007(IVR-147)最低;2006～2007年度疫苗候选株A/Wisconsin/67/2005(NYMCX-161B)的病毒复制能力优于A/Hiroshima/52/2005(IVR-142);各疫苗株的氨基酸差异均未直接涉及到HA1蛋白二硫键组成位点,直接涉及到HA1蛋白抗原决定簇位点、HA1蛋白糖基化位点和HA蛋白受体结合位点的变异分别有3处(140、156和193位)、1处(165位)和1处(225位)。结论2005～2008年间各流感病毒疫苗株血凝素得率因株而异,HA1蛋白抗原决定簇位点变异属于正常的不同毒株间的差异;糖基化位点、二硫键组成位点和受体结合位点基本保守;还需进一步研究部分位点氨基酸变异是否与病毒复制能力密切相关,并探讨改善复制能力的可能性。 展开更多

关键词 流感病毒 H3N2型疫苗株 血凝素 重配株 复制能力 抗原性

原文传递