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S100A16基因shRNA真核表达质粒的构建及其干扰效果的初步鉴定 被引量：8
1
作者 辛婧 张日华 +1 位作者 杜新丽 刘云 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期324-327,共4页
目的:构建S100A16基因RNA干扰(RNAi)的真核表达质粒,转染3T3-L1小鼠前体脂肪细胞,初步鉴定其干扰效果。方法:以小鼠S100A16基因为靶基因,以PLKO.1-sP6-GFP质粒为载体,根据GenBank数据库提供的S100A16基因核苷酸序列,选择设计2条siRNA干... 目的:构建S100A16基因RNA干扰(RNAi)的真核表达质粒,转染3T3-L1小鼠前体脂肪细胞,初步鉴定其干扰效果。方法:以小鼠S100A16基因为靶基因,以PLKO.1-sP6-GFP质粒为载体,根据GenBank数据库提供的S100A16基因核苷酸序列,选择设计2条siRNA干扰序列,构建针对S100A16基因的shRNA真核表达质粒PLKO.1-S100A16-GFP-shRNA1、2,经PCR鉴定和测序分析,确认质粒构建成功后,用脂质体LipofectamineTM 2000将重组质粒瞬时转染小鼠3T3-L1小鼠前体脂肪细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计算转染效率,Real-time RT-PCR法检测质粒对S100A16基因的表达抑制效果。结果:构建的shRNA序列经PCR和DNA测序证实与设计完全一致;在荧光显微镜下观察到3T3-L1细胞表达绿色荧光蛋白(GFP),证实重组质粒已转入细胞,转染效率达到90%;Real-time RT-PCR结果显示转入PLKO.1-S100A16-GFP-shRNA2的3T3-L1细胞中S100A16基因被特异抑制,基因表达抑制率达70%以上,与空白对照组、阴性序列对照组的差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论:成功构建了靶向S100A16基因的shRNA真核表达质粒PLKO.1-S100A16-GFP-shRNA1和2,并筛选出有效抑制S100A16基因表达的质粒,为进一步研究S100A16基因功能奠定了基础。 展开更多
关键词 小鼠前体脂肪细胞 RNA干扰 S100A16基因
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S100A16在食管鳞癌中的表达及其对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响
2
作者 王海 赵翠平 +3 位作者 周林艳 阚敬保 石永康 查全斌 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2023年第1期23-29,共7页
目的 探讨S100A16在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其对ESCC细胞迁移、侵袭能力的影响。方法 利用生物信息学分析S100A16在ESCC中的表达趋势及生存情况,利用免疫组化进一步验证S100A16在ESCC患者癌组织中的表达,构建S100A16-overex... 目的 探讨S100A16在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其对ESCC细胞迁移、侵袭能力的影响。方法 利用生物信息学分析S100A16在ESCC中的表达趋势及生存情况,利用免疫组化进一步验证S100A16在ESCC患者癌组织中的表达,构建S100A16-overexpression和S100A16-siRNA细胞模型,采用细胞划痕实验及细胞侵袭实验观察S100A16对TE12细胞迁移能力及侵袭能力的影响。结果 GEO数据库中分析ESCC GSE26886芯片,发现S100A16在ESCC中表达上调;而在TCGA和GTEx数据库中分析发现,S100A16在ESCC中表达下调。利用基因表达谱动态分析(GEPIA)在线分析网站进行生存分析,结果显示S100A16对食管癌患者的总生存期及无病生存期均无显著影响(P>0.05)。S100A16在ESCC癌组织中的低表达率和高表达率分别为65.0%(52/80)、35.0%(28/80),S100A16在癌旁组织中的低表达率和高表达率分别为40.0%(32/80)、60.0%(48/80);S100A16在ESCC癌组织中低表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示,S100A16在ESCC患者癌组织的阳性表达总评分明显低于癌旁组织(3.60±3.54 vs. 5.94±3.69,P<0.01)。ESCC中的S100A16表达与年龄、性别、TNM分期无关(P>0.05),而与组织分化程度有关(P<0.001)。S100A16-siRNA组TE12细胞愈合能力和穿孔数量显著增强,均显著高于S100A16-overexpression组(P<0.001)。结论 S100A16在ESCC组织中低表达,高表达S100A16可抑制ESCC细胞的迁移及侵袭能力。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 S100A16基因 迁移 侵袭
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S100A16转基因小鼠的构建与鉴定 被引量：2
3
作者 杜新丽 薛一 +2 位作者 张媛媛 张日华 刘云 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期325-328,共4页
目的:构建系统表达S100A16基因型小鼠,为研究S100A16基因的生物学功能提供模型动物。方法 :将S100A16cDNA插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射方法建立转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,采用定量PCR(QPCR)方法筛... 目的:构建系统表达S100A16基因型小鼠,为研究S100A16基因的生物学功能提供模型动物。方法 :将S100A16cDNA插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射方法建立转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,采用定量PCR(QPCR)方法筛选高表达品系。结果:成功构建S100A16转基因载体,建立了S100A16转基因小鼠,通过PCR及QPCR方法筛选出两个高表达品系(line A,line B)。结论:建立了系统表达S100A16的转基因小鼠,转入的S100A16基因在脂肪、肝脏、肌肉、肺等组织高表达,为研究S100A16的生物学功能特别是在肥胖中的作用及机制提供了动物模型。 展开更多
关键词 S100A16基因 转基因小鼠 肥胖 胰岛素抵抗
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