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中国高发区肝细胞癌p53基因热点突变的规律性 被引量:12
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作者 明利华 袁宝珠 +2 位作者 朱源荣 吴志远 孙宗棠 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期122-124,共3页
目的研究中国高发区肝细胞癌(HCC)p53基因249密码子高频度突变的规律性,为探寻癌变机制及基于p53的基因和免疫治疗提供依据。方法用巢式PCR结合DNA测序和限制性片段长度多态(RFLP)分析的方法,研究1994... 目的研究中国高发区肝细胞癌(HCC)p53基因249密码子高频度突变的规律性,为探寻癌变机制及基于p53的基因和免疫治疗提供依据。方法用巢式PCR结合DNA测序和限制性片段长度多态(RFLP)分析的方法,研究1994~1997年收集的97例启东和22例北京的肝细胞癌标本中,p53基因249密码子的突变率及突变的基因型。用免疫组化法研究癌及癌周细胞中p53蛋白的表达程度。结果1994~1997年,启东肝细胞癌中,p53基因249密码子的错义突变率继续保持在一个很高的水平,平均达到53.6%(52/97),极显著地高于北京地区(0/22)。249密码子为杂合型的样本,经癌组织富集后,均显示为突变的纯合子型。249密码子突变的p53蛋白在癌细胞核内高度积累,其阳性率达95.2%(20/21),而在癌旁的肝组织中阳性率为0%(0/35)。结论启东肝细胞癌中,p53基因发生着249密码子的持续性、纯合型的高频度错义突变,它伴随着p53蛋白在癌细胞核内较普遍的高度积累。这些特征为进一步了解癌变机制。 展开更多
关键词 肝肿瘤 P53基因 基因突变
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乙型肝炎病毒表面抗原主蛋白基因转基因细胞系的建立与细胞性质的研究 被引量:14
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作者 任贵方 阮薇琴 +7 位作者 田淑芳 梅雅芳 阮力 杨安道 杨芙蓉 王申 王秀平 朱既明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第2期112-119,共8页
使用本研究室以前构造的双拷贝乙肝病毒重组DNA质粒pSV_2DHBR2-32经改造构成pSV_2DHBR1-32。用此质粒转化CHO-dhfr^-细胞,经克隆、选择、加压增殖建立7个高产HBs-Ag的细胞系,其中首选B43对其生物学性状研究的结果说明,未发现微生物污染... 使用本研究室以前构造的双拷贝乙肝病毒重组DNA质粒pSV_2DHBR2-32经改造构成pSV_2DHBR1-32。用此质粒转化CHO-dhfr^-细胞,经克隆、选择、加压增殖建立7个高产HBs-Ag的细胞系,其中首选B43对其生物学性状研究的结果说明,未发现微生物污染,无致瘤性,遗传稳定,纯度满意,核酸杂交试验说明该细胞是整合型,每个细胞约有200个左右的S基因拷贝,转瓶培养研究B43细胞分泌HBsAg的最佳条件为转瓶容积4升,表面积1300cm^2,细胞长成单层后换维持液150ml,其后每48小时收、换液1次,在36℃每小时8转,连续收液60天左右, 每升收液最高产HBsAg为7.5mg。此细胞可用作乙肝基因工程疫苗生产的候选细胞系。 展开更多
关键词 乙肝病毒 主蛋白基因 转基因系
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人白细胞介素-2基因表达载体的构建及抗乙肝病毒作用 被引量:9
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作者 成军 斯崇文 +1 位作者 王勤环 于敏 《肝脏病杂志》 CSCD 1995年第2期67-70,共4页
构建了人白细胞介素-2(IL-2)基因重组逆转录病毒表达载体pZIPhulL-,以DNA-磷酸钙共沉淀技术转染包装细胞系PA317,以G418筛选,得到分泌假病毒颗粒滴度达到106CFU/ml的细胞克隆。以8为感染倍... 构建了人白细胞介素-2(IL-2)基因重组逆转录病毒表达载体pZIPhulL-,以DNA-磷酸钙共沉淀技术转染包装细胞系PA317,以G418筛选,得到分泌假病毒颗粒滴度达到106CFU/ml的细胞克隆。以8为感染倍数感染2.2.15细胞系,IL-2分泌表达水平为6I/m1,可显著抑制HBsAg的分泌表达,对HBeAg也有一定的抑制作用。但不含IL-2基因的逆转录病毒载体pZIPSV(X)的假病毒颗粒感染2.2.15细胞以后对乙肝病毒无显著影响。以6IU/ml的重组人IL-2也不能抑制HBsAg及HBeAg的表达。在细胞水平上,实现了人IL-2转基因表达及抗乙肝病毒的基因治疗。 展开更多
关键词 基因治疗 HbV 白细胞介素2 逆转录病毒 乙型肝炎
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HBsAg/截短型HCV核心蛋白融合基因对番茄的遗传转化 被引量:3
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作者 何乃彦 于源华 +2 位作者 张晓 于鹏 张振民 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第20期4022-4025,共4页
[目的]本研究旨在探索乙肝病毒表面抗原/截短型HCV核心蛋白融合基因在植物中表达乙肝丙肝双价抗原的可能性,以期为进一步研制植物乙肝丙肝双价口服疫苗打下基础。[方法]应用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在丙肝病毒(HCV)截短型... [目的]本研究旨在探索乙肝病毒表面抗原/截短型HCV核心蛋白融合基因在植物中表达乙肝丙肝双价抗原的可能性,以期为进一步研制植物乙肝丙肝双价口服疫苗打下基础。[方法]应用重组PCR技术将乙肝病毒(HBV)S基因连接在丙肝病毒(HCV)截短型核心蛋白序列的5'端,2者通过柔性肽(Gly4Ser)2序列相连,构建成融合基因BC。将融合基因BC克隆到植物双元表达载体pBin438上,获得pBin438BC,然后用冻融法将其转入根癌农杆菌EHA105中,侵染丽春番茄子叶和下胚轴,经预培养、共培养、脱菌培养、筛选培养、生根培养,提取抗性植株基因组DNA,进行PCR及PCR-Southern检测。[结果]获得了9株抗卡那霉素的番茄植株,5株获得阳性信号。[结论]初步表明目的基因已整合到番茄基因组中。 展开更多
关键词 乙肝病毒S基因 丙肝病毒核心蛋白 融合基因 农杆菌 转基因番茄
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含不同长度前C序列的乙型肝炎病毒核心抗原基因在重组痘苗病毒中的表达 被引量:1
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作者 程度胜 韩素文 +1 位作者 项秉一 方继明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第2期170-175,共6页
<正> 核酸序列分析表明,乙型肝炎(乙肝)病毒核心抗原基因(C基因)编码区内存在两个ATG。目前认为第二个ATG为乙肝病毒C抗原的起始密码子,两个ATG之间的序列称为前C序列,共87bp。Uy、Rutter、Roossinck及景新等的研究表明,含前C序列... <正> 核酸序列分析表明,乙型肝炎(乙肝)病毒核心抗原基因(C基因)编码区内存在两个ATG。目前认为第二个ATG为乙肝病毒C抗原的起始密码子,两个ATG之间的序列称为前C序列,共87bp。Uy、Rutter、Roossinck及景新等的研究表明,含前C序列时,C基因在大肠杆菌中的表达是形成具有HBeAg活性的P25~e膜蛋白,在哺乳动物细胞中的表达则是形成分泌性的HBeAg;不含前C序列时。 展开更多
关键词 乙肝病毒 核心抗原基因 痘苗
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原发性肝细胞癌p53基因突变检测
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作者 周凤 王锦蓉 +5 位作者 雷秉钧 赵连三 唐红 王小飞 张贤良 李俸媛 《华西医科大学学报》 CSCD 1997年第1期50-54,共5页
为了解在黄曲霉毒素B1(AFB1)低含量区以HBV为主要危险因素的HCCp53基因突变情况,并分析它与HBV及其它因素的关系,作者筛检了成都地区32例原发性肝癌(HCC),分别应用PCR-RFLPSouthern吸印... 为了解在黄曲霉毒素B1(AFB1)低含量区以HBV为主要危险因素的HCCp53基因突变情况,并分析它与HBV及其它因素的关系,作者筛检了成都地区32例原发性肝癌(HCC),分别应用PCR-RFLPSouthern吸印杂交及免疫组化染色法检测了32例HCC及27份癌旁肝组织中p53基因突变、HBVDNA整合及HBsAg表达。结果:所有HCC病例均感染过HBV,肝癌细胞中HBVDNA整合率71.9%,癌旁组织均有肝硬化或/和慢活肝病变,且HBsAg表达率96.3%。32例HCC中检出8例P53蛋白阳性(25%),这种改变与HBVDNA整合及HBsAg表达无明显关系,而与HCC发生年龄有关;32例HCC组织中有2例p53基因第249号编码子突变(6.25%),明显低于AFB1高含量区HCC,而与台湾、日本等AFB1低含量区报道一致,提示:成都地区HCC与HBV感染确有密切关系;p53改变在HCC发生上有一定作用,但是多数HCC并无p53基因突变又提示HCC发生尚涉及其它复杂机制;HBV在HCCp53基因改变中的作用机制值得进一步探索。 展开更多
关键词 肝细胞癌 肝肿瘤 P53基因 基因突变 HbV
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人肝癌中p16和CDK4基因的遗传变异及其与HBV感染之间的关系 被引量:9
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作者 王辉云 严瑞琪 +2 位作者 吴秋良 龙江斌 梁启万 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期25-28,共4页
目的探讨抑癌基因p16和癌基因CDK4的遗传变异在人肝癌发生发展中的作用及其相互关系以及与HBV感染之间的关系。方法取手术切除的肝癌标本,用Southern杂交法对p16和CDK4基因以及HBV的状态进行检测,同时切... 目的探讨抑癌基因p16和癌基因CDK4的遗传变异在人肝癌发生发展中的作用及其相互关系以及与HBV感染之间的关系。方法取手术切除的肝癌标本,用Southern杂交法对p16和CDK4基因以及HBV的状态进行检测,同时切片行病理检查。结果36例肝癌中4例有p16纯合性缺失,3例半合子丢失,总丢失率为19.4%,其中约1/3的p16丢失发生在肿瘤小于5cm的肝癌;在有HBV-DNA整合和无整合的病例中,p16的丢失率差异无显著性。37例肝癌中5例(13.2%)发生CDK4扩增,与p16的丢失无重叠;CDK4的扩增全部发生在有HBV整合的肝癌中。结论p16的丢失在部分肝癌的发生发展中起着一定的作用,但与HBV-DNA的整合无关;CDK4的扩增可能与HBV-DNA的整合以及肝癌的进展有关。 展开更多
关键词 肝细胞癌 乙型肝炎病毒 遗传变异 P16 CDK4
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S基因突变对慢性乙型肝炎肝硬化患者血清AFP、PTX3表达及预后的影响
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作者 秦旭 侯志云 +2 位作者 张松 马丽 朝浩鹏 《肝脏》 2022年第2期178-181,共4页
目的 探讨S基因突变与AFP、PTX3水平及患者预后的相关性。方法 选取2017年7月至2019年6月于北京市大兴区人民医院治疗的76例慢性乙型肝炎肝硬化患者为研究对象(肝硬化组);同期选取慢性乙型肝炎患者87例作为对照(肝炎组);根据S基因是否... 目的 探讨S基因突变与AFP、PTX3水平及患者预后的相关性。方法 选取2017年7月至2019年6月于北京市大兴区人民医院治疗的76例慢性乙型肝炎肝硬化患者为研究对象(肝硬化组);同期选取慢性乙型肝炎患者87例作为对照(肝炎组);根据S基因是否发生突变将慢性乙型肝炎肝硬化患者分为S基因突变组22例和S基因未突变组54例。采用半套式PCR检测HBV S基因突变情况;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清AFP、PTX3水平;采用全自动生化分析仪检测血清总胆红素(TBil)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)水平;Pearson法分析S基因突变慢性乙型肝炎肝硬化患者血清AFP、PTX3水平与肝功能指标相关性;多因素logistic回归分析影响慢性乙型肝炎肝硬化患者预后的因素。结果 肝硬化组TBil水平为(42.59±6.81)μmol/L,S基因突变患者比例为(22/54),高于肝炎组的(25.46±7.32)μmol/L和(9/78),AST(156.83±24.57)U/L、ALT水平(125.31±30.25)U/L低于肝炎组的(238.46±40.22)U/L、(193.74±42.81)U/L,差异均有统计学意义(t/χ^(2)=15.395、9.114、15.362、11.626,均P<0.05);S基因突变组血清AFP(5.98±2.01)ng/mL、PTX3(5.24±1.43)μg/L高于S基因未突变组的(4.86±1.34)ng/mL和(3.84±1.05)μg/L,差异均有统计学意义(t=2.839、4.729,均P<0.05);S基因突变慢性乙型肝炎肝硬化患者血清中AFP、PTX3水平与TBil均呈正相关(r=0.502、0.479,均P<0.05),与AST、ALT均呈负相关(P<0.05);S基因突变与慢性乙型肝炎肝硬化患者预后有关(r=0.553,P<0.05),且发生S基因突变的慢性乙型肝炎肝硬化患者中预后不良比例高于预后良好(86.36%比13.64%);S基因突变、AFP是影响慢性乙型肝炎肝硬化患者发生不良预后的独立危险因素(P<0.05)。结论 S基因突变可能导致慢性乙型肝炎肝硬化患者血清AFP、PTX3水平升高,且可能对患者不良预后的预测具有重要意义。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎肝硬化 乙型肝炎病毒S基因突变 甲胎蛋白 正五聚蛋白3 预后
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RANTES gene single nucleotide polymorphisms and expression in patients with chronic hepatitis B virus infection 被引量:19
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作者 DUANZhong-ping ZHAOXiu-ying +4 位作者 HUANGDe-zhuang HELi-xiang CHENYu ZHAOChun-hui ZHENGBo-jian 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2005年第11期909-914,共6页
Background Regulated on activation, normal T-cell expressed and secreted (RANTES) plays a critical role in T-lymphocyte activation and proliferation. The process is involved in both acute and chronic phases of inflamm... Background Regulated on activation, normal T-cell expressed and secreted (RANTES) plays a critical role in T-lymphocyte activation and proliferation. The process is involved in both acute and chronic phases of inflammation. The present study was to ascertain the possible correlations between chronic hepatitis B virus (HBV) infection and the RANTES gene polymorphisms and their expression. Methods The study included 130 HBV negative healthy donors and 152 patients with chronic hepatitis B (CHB) virus infection. The polymerase chain reaction (PCR) and restriction fragment length polymorphisms (RFLPs) were used to detect RANTES gene single nucleotide polymorphisms (SNPs). RANTES levels in the platelet depleted plasma were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Results RANTES alleles -403G, -28C and In1.1T were the predominant alleles in the subjects studied. No significant correlation was found between CHB infection and the RANTES alleles, while a significant correlation was found between CHB infection and increased RANTES expression in platelet depleted plasma (P<0.05). Conclusions SNPs in RANTES gene do not affect chronic HBV infection or the outcome of interferon-α treatment in patients positive for HBV “e” antigen (HBeAg+). However, patients with CHB infection express the higher levels of plasma RANTES, which is thus associated with CHB infection. 展开更多
关键词 RANTES gene POLYMORPHISM hepatitis b virus INFECTION
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