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结核分枝杆菌包涵体蛋白Rv3480c的克隆、表达与纯化
被引量：
5
1
作者
文强
唐明美
+3 位作者
陈玲
彭章丽
何月娟
唐正洪
《遵义医学院学报》
2017年第4期401-404,409,共5页
目的应用分子生物学技术对结核分枝杆菌重组抗原Rv3480c基因进行克隆、表达和纯化。方法以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增,克隆Rv3480c基因片段,产物经验证后与载体质粒p ET28a连接重组质粒,将验...
目的应用分子生物学技术对结核分枝杆菌重组抗原Rv3480c基因进行克隆、表达和纯化。方法以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增,克隆Rv3480c基因片段,产物经验证后与载体质粒p ET28a连接重组质粒,将验证构建成功的重组质粒转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)菌体内,经异丙基半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,溶解包涵体,并通过多次低温冻融、不同浓度尿素复性方法进行包涵体蛋白质的纯化。结果扩增后基因电泳试验及测序证实成功重组目的基因,用尿素溶液和磷酸盐缓冲液(PBS)透析和纯化重组蛋白,Western-Blot证实成功重组结核分枝杆菌抗原Rv3480c。结论应用分子生物学技术成功获得结核分枝杆菌Rv3480c蛋白,为其结构和功能的进一步研究奠定了基础,并为包涵体蛋白的纯化提供了新的技术思路。
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关键词
结核分枝杆菌
rv
3480
c
包涵体
克隆
纯化
下载PDF
职称材料
题名
结核分枝杆菌包涵体蛋白Rv3480c的克隆、表达与纯化
被引量：
5
1
作者
文强
唐明美
陈玲
彭章丽
何月娟
唐正洪
机构
遵义医学院附属医院呼吸二科
山东省临沂市人民医院东医疗区内三科
出处
《遵义医学院学报》
2017年第4期401-404,409,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(NO:81360002)
文摘
目的应用分子生物学技术对结核分枝杆菌重组抗原Rv3480c基因进行克隆、表达和纯化。方法以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增,克隆Rv3480c基因片段,产物经验证后与载体质粒p ET28a连接重组质粒,将验证构建成功的重组质粒转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)菌体内,经异丙基半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,溶解包涵体,并通过多次低温冻融、不同浓度尿素复性方法进行包涵体蛋白质的纯化。结果扩增后基因电泳试验及测序证实成功重组目的基因,用尿素溶液和磷酸盐缓冲液(PBS)透析和纯化重组蛋白,Western-Blot证实成功重组结核分枝杆菌抗原Rv3480c。结论应用分子生物学技术成功获得结核分枝杆菌Rv3480c蛋白,为其结构和功能的进一步研究奠定了基础,并为包涵体蛋白的纯化提供了新的技术思路。
关键词
结核分枝杆菌
rv
3480
c
包涵体
克隆
纯化
Keywords
My
c
oba
c
terium tuber
c
ulosis
rv
3480
c
in
c
lusion body
c
loning
purifi
c
ation
分类号
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌包涵体蛋白Rv3480c的克隆、表达与纯化
文强
唐明美
陈玲
彭章丽
何月娟
唐正洪
《遵义医学院学报》
2017
5
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