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指环蛋白31对表皮生长因子受体表达的调控作用及其机制 被引量：1
1
作者 薛富强 苏荣健 +2 位作者 贺武斌 宋慧娟 栾治东 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期15-21,共7页
目的:探讨指环蛋白31(RNF31)对表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响,并分析RNF31对EGFR的调控机制。方法:采用免疫共沉淀(Co-IP)法验证RNF31蛋白与EGFR蛋白的相互作用。HEK293T细胞分为空载体组(转染pcDNA3.1空载体)和RNF31组(转染RNF31-F... 目的:探讨指环蛋白31(RNF31)对表皮生长因子受体(EGFR)表达的影响,并分析RNF31对EGFR的调控机制。方法:采用免疫共沉淀(Co-IP)法验证RNF31蛋白与EGFR蛋白的相互作用。HEK293T细胞分为空载体组(转染pcDNA3.1空载体)和RNF31组(转染RNF31-Flag质粒),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测细胞中EGFR mRNA和蛋白表达水平。RNF31的泛素连接酶功能位点(RNF31C699/702S)和去泛素化酶结合位点(RNF31N84A Y93A)突变后,采用Western blotting法检测各组细胞中EGFR蛋白表达水平。HEK293细胞分为空载体组、RNF31组(转染RNF31-Flag质粒)、RNF31+EGFR抑制剂吉非替尼(Gefitinib)组和RNF31+EGFR抑制剂厄洛替尼(Erlotinib)组,采用Western blotting法检测各组细胞中EGFR及其下游信号通路蛋白表达水平。结果:Co-IP法检测,RNF31蛋白与EGFR蛋白存在相互作用。与空载体组比较,RNF31组细胞中EGFR mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。与空载体组比较,转染RNF31C699/702S组和野生型RNF31组细胞中EGFR蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与RNF31组比较,转染RNF31N84A Y93A组细胞中EGFR蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与空载体组比较,RNF31组细胞中EGFR及其下游信号通路中核因子κB(NF-κB)、磷酸化信号传导与转录激活因子3(p-STAT3)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和磷酸化MAPK(p-MAPK)蛋白表达水平明显升高(P<0.05),RNF31+Gefitinib组和RNF31+Erlotinib组细胞中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、STAT3和MAPK蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:RNF31通过去泛素化酶结合结构域发挥去泛素化的作用,降低EGFR蛋白分子表面的泛素化水平,使EGFR蛋白降解速率减慢,同时高表达的EGFR可以激活其下游与细胞增殖和分裂相关蛋白的表达。 展开更多
关键词 指环蛋白31 表皮生长因子受体 泛素化 蛋白互作 去泛素化酶
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微小RNA-378转染对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及其机制
2
作者 陈小平 任新萍 +1 位作者 杜依蓓 薛金玲 《山东医药》 CAS 2018年第35期50-53,共4页
目的观察微小RNA-378(miRNA-378)转染对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响,并探讨其可能机制。方法 miRNA-378过表达质粒转染的SKOV3细胞作为实验组,空白载体质粒转染的SKOV3细胞作为阴性对照组,SKOV3细胞作为空白对照组。采用Real-time PCR... 目的观察微小RNA-378(miRNA-378)转染对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响,并探讨其可能机制。方法 miRNA-378过表达质粒转染的SKOV3细胞作为实验组,空白载体质粒转染的SKOV3细胞作为阴性对照组,SKOV3细胞作为空白对照组。采用Real-time PCR检测各组细胞中miRNA-378、环指蛋白31(RNF31)mRNA,Western blotting检测各组细胞中RNF31蛋白,CCK-8实验检测各组细胞增殖能力,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。结果实验组SKOV3细胞miRNA-378相对表达量高于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05);实验组SKOV3细胞RNF31 mRNA和蛋白相对表达量分别低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05);实验组SKOV3细胞的增殖能力明显低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05);实验组SKOV3细胞的克隆形成能力低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.05)。结论 miRNA-378转染可抑制卵巢癌细胞株SKOV3增殖,miRNA-378可能通过抑制RNF31基因表达而发挥抑制卵巢癌细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 微小核苷酸 微小RNA 微小RNA-378 环指蛋白31 卵巢癌细胞 细胞增殖
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