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鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：5
1
作者 马秀丽 冯涛 +3 位作者 宋敏训 李峰 廖明 辛朝安 《广东农业科学》 CAS CSCD 2007年第7期81-84,共4页
根据GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列设计、合成引物,以山东、江苏、广东等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到预期大小的目的片段。将山东分离株扩增的目的片段克隆到pGM-T载体,酶切鉴定得到阳性重组质粒。对重... 根据GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列设计、合成引物,以山东、江苏、广东等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到预期大小的目的片段。将山东分离株扩增的目的片段克隆到pGM-T载体,酶切鉴定得到阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定,与参考毒株R85952的序列比较发现,山东分离株与参考序列的同源性为97.4%。试验结果表明,所建立的RT-PCR方法最低模板检出量为100 pg,且该方法只能特异地检测出DHV,不能检出鸭瘟病毒、小鹅瘟病毒、鹅副粘病毒和番鸭细小病毒等。自然感染病料的检测分离结果表明,该方法既可用于DHV-Ⅰ分离株的快速鉴定,也可用于临床感染病例的检测与诊断。 展开更多
关键词 鸭病毒性肝炎病毒 Ⅰ型 RT-PCR 检测
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正常妊娠妇女及习惯性流产患者IL-2、IL-10mRNA的表达差异 被引量：3
2
作者 居忠亮 张淼发 +1 位作者 吴乾渝 范丽安 《上海医学检验杂志》 北大核心 2001年第6期340-342,共3页
目的检测正常妊娠妇女、习惯性流产患者外周血单个核细胞 (PBMC)内 T辅助细胞亚型 (Th1)细胞因子白细胞介素 - 2 (IL- 2 )、T辅助细胞 2亚型 (Th2 )细胞因子白细胞介素 10 (IL- 10 ) m RNA表达水平的差异。方法用半定量逆转录 -聚合酶... 目的检测正常妊娠妇女、习惯性流产患者外周血单个核细胞 (PBMC)内 T辅助细胞亚型 (Th1)细胞因子白细胞介素 - 2 (IL- 2 )、T辅助细胞 2亚型 (Th2 )细胞因子白细胞介素 10 (IL- 10 ) m RNA表达水平的差异。方法用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)的方法检测 10例正常非孕妇女、10例正常妊娠妇女、10例习惯性流产患者 PBMC内 IL- 2、IL- 10 m RNA的表达水平。结果同正常非孕对照相比 ,正常妊娠妇女 IL- 10 m RNA明显升高 ,习惯性流产患者 IL- 10 m RNA降低 ,IL- 2 m RNA明显升高 ;同正常妊娠妇女相比 ,习惯性流产患者 IL- 2 m RNA及 IL- 10 m RNA均明显降低。结论正常妊娠分泌 IL- 10升高 ,当孕妇分泌 IL- 10降低而分泌 IL- 2升高时 。 展开更多
关键词 白细胞介素-2 白细胞介素-10 习惯性流产 逆转录-聚合酶链反应 妊娠
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GADD45β在肝癌中的异常表达 被引量：2
3
作者 杨娟 杨玉秀 +2 位作者 韩双印 白阳秋 张立达 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第21期2417-2422,共6页
目的:探讨生长抑制DNA损伤诱导因子β(GADD45β)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生、发展的关系.方法:应用寡核苷酸基因芯片、反转录PCR(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测GADD45β在人正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中的... 目的:探讨生长抑制DNA损伤诱导因子β(GADD45β)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生、发展的关系.方法:应用寡核苷酸基因芯片、反转录PCR(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测GADD45β在人正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中的异常表达,分析GADD45β与临床病理学特征的关系及其异常表达的可能分子生物学机制.结果:正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中GADD45β mRNA的阳性表达率分别为80%、60%和26%,肝癌组织与正常肝组织间有非常统计学差异(χ2=15.128,P<0.01);GADD45β蛋白的阳性表达率在正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中分别为85%、70%和31%,有显著统计学差异(χ2=24.619,P<0.01).GADD45β在肝癌组织中的表达缺失与病理学分级显著相关(P<0.01).结论:GADD45β作为抑癌基因在肝癌的发生发展中起到相当重要的作用,且与肿瘤分化程度密切相关. 展开更多
关键词 寡核苷酸芯片 反转录聚合酶链式反应 免疫组织化学 肝细胞癌 GADD45β 低表达
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肝癌组织中KLF4的表达及意义 被引量：2
4
作者 房新辉 杨玉秀 +3 位作者 韩双印 白阳秋 张立达 田宏杰 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第1期4-6,共3页
目的探讨Kruppel样因子4(KLF4)在肝细胞癌(简称肝癌)中的表达及意义。方法应用寡核苷酸基因芯片、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测KLF4在健康人、肝硬化及肝癌组织中的表达,并分析KLF4与肝癌临床病理特征的关系。结... 目的探讨Kruppel样因子4(KLF4)在肝细胞癌(简称肝癌)中的表达及意义。方法应用寡核苷酸基因芯片、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测KLF4在健康人、肝硬化及肝癌组织中的表达,并分析KLF4与肝癌临床病理特征的关系。结果寡核苷酸基因芯片分析,KLF4在肝癌差异表达基因谱中明显下调(Ratio=0.438);RT-PCR及免疫组织化学方法证实,KLF4在肝癌中低表达,其表达缺失与病理学分级显著相关。结论KLF4在肝癌组织中的低表达与肿瘤分化程度密切相关。 展开更多
关键词 寡核苷酸芯片 逆转录聚合酶链反应 免疫组织化学 癌 肝细胞 KLF4
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大鼠卵巢发育过程中Smad4的表达(英文) 被引量：3
5
作者 苗竹林 王自能 +1 位作者 程龙球 章韵 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期127-131,共5页
目的了解转化生长因子-β超家族(TGF-βs)在调节卵泡发育过程中的信号转导模式,以探讨在不同发育阶段大鼠卵巢中Smad4蛋白及mRNA的表达。方法选择不同发育时期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测卵巢中Smad4蛋白表达,并进行图像分析;采用半... 目的了解转化生长因子-β超家族(TGF-βs)在调节卵泡发育过程中的信号转导模式,以探讨在不同发育阶段大鼠卵巢中Smad4蛋白及mRNA的表达。方法选择不同发育时期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测卵巢中Smad4蛋白表达,并进行图像分析;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Smad4mRNA在卵巢中的表达,以GAPDH作为内对照与特异性Smad4同时进行扩增,并计算Smad4和GAPDH的RT-PCR产物积分吸光度比值来表示Smad4mRNA的含量。结果Smad4广泛表达于卵巢组织,但主要表达在卵泡中,其表达部位和强度随卵巢的成熟度不同而变化;在卵巢发育早期,Smad4主要在原始卵泡和窦前卵泡中表达,而在间质中的表达较弱;随着卵巢的发育成熟,Smad4在间质中的表达逐渐增强,性成熟后,在窦状及成熟卵泡颗粒细胞和卵泡膜的表达与间质细胞比较无显著差异(P>0.05)。Smad4在卵泡中的表达强度也发生了变化,即随着卵泡的发育,Smad4在窦状及成熟卵泡卵母细胞的表达明显减弱,与窦前卵泡卵母细胞比较有显著差异(P<0.05,P<0.01);与窦前卵泡比较,Smad4在卵泡膜细胞的表达逐渐增强(P<0.01),而在各级卵泡颗粒细胞中的表达无显著差异(P>0.05)。RT-PCR结果显示各阶段卵巢均有mRNA的表达,从第3周起Smad4mRNA的表达明显增强,Smad4和GAPDH积分吸光度比值? 展开更多
关键词 卵巢 SD大鼠 SMAD4 免疫组化 RT—PCR
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喉鳞癌中扭曲基因、上皮型钙黏附蛋白和神经型钙黏附蛋白基因表达及相关研究 被引量：3
6
作者 朱艳艳 俞建平 赵瑞力 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2014年第1期27-31,35,共6页
目的研究转录因子扭曲基因(Twist)在喉鳞癌(LSCC)中的表达及其通过对上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)的作用在判断肿瘤的生物学行为方面的意义。方法采用免疫组织化学SP法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方... 目的研究转录因子扭曲基因(Twist)在喉鳞癌(LSCC)中的表达及其通过对上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)的作用在判断肿瘤的生物学行为方面的意义。方法采用免疫组织化学SP法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测49例喉鳞癌及20例癌旁组织中Twist、E-cadherin和N-cadherin基因的表达情况。结果 Twist在喉癌组织中的阳性表达率(61.22%)明显高于癌旁组织(25%)(P<0.01);Twist在喉癌组织中的mRNA相对表达量(0.93±0.39)明显高于癌旁组织(0.57±0.24)(P<0.01);Twist在喉癌中蛋白及mRNA表达均与淋巴结转移、临床分期相关,而与肿瘤病理学分级、临床分型及年龄无关。在mRNA及蛋白水平,Twist与E-cadherin,N-cadherin与E-cadherin的表达均呈负相关;Twist与N-cadherin均呈正相关。结论 Twist在喉鳞癌中过度表达,可能通过分别上调N-cadherin和下调E-cadherin的表达,进而在喉鳞癌的浸润、转移过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 喉鳞癌 扭曲基因 上皮型钙黏附蛋白 神经型钙黏附蛋白 免疫组织化学 反转录聚合酶链反应
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新基因LX3与白细胞介素-6诱导的相关性 被引量：2
7
作者 夏荣 黎燕 +2 位作者 冯建男 兰炯采 沈倍奋 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期384-386,共3页
目的研究功能未知新基因LX3[1]与白细胞介素-6(IL-6)的相关性,为研究IL-6的作用机制寻找新的靶基因。方法反转录-PCR(RT-PCR)分析不同浓度IL-6处理的U937细胞及同一浓度IL-6诱导不同时间的U937细胞中新基因LX3的表达差异;NorthernBlot分... 目的研究功能未知新基因LX3[1]与白细胞介素-6(IL-6)的相关性,为研究IL-6的作用机制寻找新的靶基因。方法反转录-PCR(RT-PCR)分析不同浓度IL-6处理的U937细胞及同一浓度IL-6诱导不同时间的U937细胞中新基因LX3的表达差异;NorthernBlot分析IL-6诱导前后U937细胞中新基因LX3表达的变化。结果LX3基因在U937细胞中的表达量随IL-6诱导浓度的增加而增加,在IL-6浓度为500ng/ml时表达量最高,而在0ng/ml时不表达;时间表达谱分析显示在IL-6刺激8h时新基因LX3的表达量最高;Northern印迹分析显示新基因LX3在IL-6诱导后的U937细胞中的表达量明显升高。结论LX3是与IL-6诱导紧密相关的新基因。 展开更多
关键词 白细胞介素-6 LX3 反转录-PCR
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人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量：2
8
作者 祝骥 马文丽 +3 位作者 毛向明 李凌 宋艳斌 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期395-398,共4页
目的克隆中国人的肥胖基因,并在大肠杆菌中高效表达人瘦素蛋白。方法用RT-PCR从培养的中国人脂肪细胞提取的总RNA中扩增出肥胖基因,与TA载体连接后进行核酸序列测定,并将该基因定向克隆至高效表达质粒pBV220,在大肠杆菌中表达。结果克... 目的克隆中国人的肥胖基因,并在大肠杆菌中高效表达人瘦素蛋白。方法用RT-PCR从培养的中国人脂肪细胞提取的总RNA中扩增出肥胖基因,与TA载体连接后进行核酸序列测定,并将该基因定向克隆至高效表达质粒pBV220,在大肠杆菌中表达。结果克隆出中国人肥胖基因,其cDNA序列与文献报道的一致,构建了重组质粒pBV220-OB,并成功地实现了人肥胖基因在大肠杆菌中的表达。结论人肥胖基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达,为进一步研究该基因在肥胖症及其相关疾病中的作用,以及在脂肪代谢与脂肪细胞分化中的调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 肥胖症 肥胖基因 反转录PCR 基因表达 瘦素蛋白
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人血小板衍生生长因子B链基因酵母表达载体的构建 被引量：1
9
作者 杨春露 陈建庭 +3 位作者 邓凡 唐焕章 谭小云 罗深秋 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第3期273-276,共4页
目的构建带信号肽和不带信号肽的人血小板衍生生长因子B(PDGF-B)链基因酵母表达载体,探讨该基因在酵母中的表达效率和活性。方法利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人血管内皮细胞总RNA中扩增出PDGF-B的cDNA,克隆入pGEM-T载体,进行序列... 目的构建带信号肽和不带信号肽的人血小板衍生生长因子B(PDGF-B)链基因酵母表达载体,探讨该基因在酵母中的表达效率和活性。方法利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人血管内皮细胞总RNA中扩增出PDGF-B的cDNA,克隆入pGEM-T载体,进行序列测定。进而克隆至酵母表达质粒pMETB和pMETαA并进行重组子双酶切鉴定。结果扩增获得了含信号肽(578 bp)和不含信号肽(340 bp)的编码PDGF-B链基因;构建了PDGF-B的酵母表达载体pMETB-PDGFB1,pMETαA-PDGFB2。测序结果显示,重组载体中目的基因序列与GENE BANK公布的序列一致。结论人血小板衍生生长因子B链基因酵母表达载体构建成功,为进一步在酵母中的高效表达奠定基础。 展开更多
关键词 人血小板衍生生长因子 B链基因 酵母 表达 载体
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环孢霉素A对NIT-1胰岛β细胞基因表达谱的影响 被引量：1
10
作者 贾志敏 徐伟 +4 位作者 余乐 张嘉杰 吕琳 雷林生 吴曙光 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第7期853-857,共5页
目的采用基因芯片技术,观察免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)对NIT-1胰岛β细胞基因表达谱的影响。方法体外培养NIT-1胰岛β细胞,以10μmol/LCsA处理24h。应用基因芯片分别检测CsA处理24h及空白对照组NIT-1胰岛β细胞的基因表达谱。结果CsA作用... 目的采用基因芯片技术,观察免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)对NIT-1胰岛β细胞基因表达谱的影响。方法体外培养NIT-1胰岛β细胞,以10μmol/LCsA处理24h。应用基因芯片分别检测CsA处理24h及空白对照组NIT-1胰岛β细胞的基因表达谱。结果CsA作用于NIT-1胰岛β细胞24h后,在4096条基因中,有38条基因表达上调,其中已知功能基因13条,主要是与应激反应、蛋白质合成及细胞生长相关的基因。有46条基因表达下调,其中已知功能基因25条,主要是与细胞生长发育、氧化磷酸化过程及蛋白合成有关的基因。RT-PCR技术验证了Zfr、Tpi和Pax63个基因表达的变化。结论CsA作用于NIT-1胰岛β细胞24h后,可影响NIT-1细胞中多种基因的表达,其中对细胞生长发育、氧化磷酸化等有关基因表达的抑制作用,可能与CsA抑制NIT-1细胞胰岛素释放的作用机制相关。本研究为进一步深入研究CsA对胰岛β细胞的作用机制提供了线索和依据。 展开更多
关键词 环孢霉素A NIT—1细胞 胰岛Β细胞 RT—PCR 基因芯片
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老年心脏病患者血清柯萨奇病毒B特异性抗体和核酸的检测 被引量：1
11
作者 孙芸芸 蒋文玲 罗宪玲 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第5期572-573,共2页
目的了解柯萨奇B组病毒(CVB)在老年人中的感染状况,探讨CVB感染与心血管疾病的内在关系。方法采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和反转录PCR方法对230例老年人进行了CVB IgG 抗体和核酸检测。结果心脏病组CVB IgG抗体阳性率为43.61%(75/1... 目的了解柯萨奇B组病毒(CVB)在老年人中的感染状况,探讨CVB感染与心血管疾病的内在关系。方法采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和反转录PCR方法对230例老年人进行了CVB IgG 抗体和核酸检测。结果心脏病组CVB IgG抗体阳性率为43.61%(75/172),对照组抗体阳性率为15.52%(9/58),两者比较有显著性差异(P<0.01)。CVB RNA 检测结果显示,心脏病组阳性率为20.93%(36/172),对照组为3.45%(25/58),两者比较有显著性差异(P<0.01)。结论在老年心脏病患者中CVB感染较为普遍,应引起重视。 展开更多
关键词 心脏病 血清 柯萨奇病毒B 特异性抗体 核酸 检测
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SARS病毒基因的PCR扩增及序列测定 被引量：1
12
作者 石缨 金梅枝 +5 位作者 朱美财 占志 高和 刘春灵 蔡庆 周平 《空军总医院学报》 2003年第3期135-137,F004,共4页
目的　利用 RT- PCR技术检测 SARS疑似或临床确诊病人咽拭子、血清及白细胞中的 SARS病毒 ,并分析了扩增产物内一个可能的突变位点。　方法　采用 Trizol试剂或病毒 RNA提取试剂盒 ,抽提 SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的 RN... 目的　利用 RT- PCR技术检测 SARS疑似或临床确诊病人咽拭子、血清及白细胞中的 SARS病毒 ,并分析了扩增产物内一个可能的突变位点。　方法　采用 Trizol试剂或病毒 RNA提取试剂盒 ,抽提 SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的 RNA ,进行 RT- PCR和 nest PCR反应 ,检测 SARS病毒 RNA ,并对扩增产物进行 DNA测序。　结果　 14例SARS疑似患者中 2例咽拭子 RT- PCR结果阳性 ,约占 14 % ;5例临床确诊病人中 2例咽拭子 nest PCR结果阳性 ,约占 4 0 % ;6例临床确诊 SARS病人中 1例血清 nest PCR结果阳性 ,占 17% ,其他 5例疑似患者结果阴性 ;在 2 2份疑似患者外周血白细胞中未检测到 SARS病毒 ;扩增产物 DNA序列与美国和加拿大在 Gen Bank中报道的序列一致。　结论　 RT- PCR方法是一种快速有效的 SARS病毒检测手段 ,为临床诊断及发病机制研究提供了依据 ;扩增片段内未发现突变。 展开更多
关键词 SARS病毒 PCR扩增 序列测定 基因扩增 发病机制
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Real time RT-PCR定量检测AFP mRNA表达水平方法的建立
13
作者 聂常富 王建国 +3 位作者 李荣 荆晓岳 王福利 何蕴韶 《新乡医学院学报》 CAS 2003年第5期308-309,313,共3页
目的　建立realtime逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测AFPmRNA表达水平方法。方法　提取BEL740 2细胞总RNA ,进行RT PCR扩增并纯化AFP基因片段 ,构建重组质粒 ,建立realtimeRT PCR检测AFPmRNA表达水平方法。结果　重组质粒的阳性克隆效率... 目的　建立realtime逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测AFPmRNA表达水平方法。方法　提取BEL740 2细胞总RNA ,进行RT PCR扩增并纯化AFP基因片段 ,构建重组质粒 ,建立realtimeRT PCR检测AFPmRNA表达水平方法。结果　重组质粒的阳性克隆效率为 81.8% ,经酶切鉴定 ,目的基因片段已插入PMD 18T载体内 ,得到realtimeRT PCR动力学曲线。结论　成功建立了realtimeRT PCR定量检测AFPmRNA表达水平方法。 展开更多
关键词 甲胎蛋白 mRNA定量 逆转录聚合酶链反应
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聚合酶链反应检测血浆及外周血单个核细胞中HCV-RNA的意义
14
作者 刘薇 曾令兰 +1 位作者 郭劲松 李璐 《疾病控制杂志》 CAS 2000年第4期321-322,共2页
目的　为提高丙型肝炎病毒 RNA(HCV- RNA)的检出率。方法　采用套式逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术 ,检测 2 0 0例抗 - HCV阴性 ,AL T反复异常 ,临床疑似丙型肝炎患者的血浆及外周血单个核细胞 (PBMC)中 HCV- RNA。结果　 5 2例患者... 目的　为提高丙型肝炎病毒 RNA(HCV- RNA)的检出率。方法　采用套式逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术 ,检测 2 0 0例抗 - HCV阴性 ,AL T反复异常 ,临床疑似丙型肝炎患者的血浆及外周血单个核细胞 (PBMC)中 HCV- RNA。结果　 5 2例患者血浆中检出 HCV - RNA,阳性率为2 6 % ,78例患者 PBMC中检出 HCV- RNA ,阳性率为 39% ,其中两者同时双阳性有 2 2例 ,阳性率为 11%。结论　同步检测丙型肝炎患者血浆及 PBMC中 HCV- RNA,在避免漏诊 ,提高临床诊断率及指导医生治疗方面是很有必要的 ,同时在研究其发病机理中有着一定意义。 展开更多
关键词 逆转录聚合酶链反应 外周血单个核细胞 HCV
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ROS融合基因不是中国胆管癌病人的常见表达基因(英文)
15
作者 刘鹏敏 武雅君 +2 位作者 孙丽 左强 石敏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期474-478,共5页
目的探讨胆管癌中ROS融合基因的表达情况。方法收集经甲醛固定和石蜡包埋的I-IV期胆管癌组织,采用RT-PCR对胆管癌组织进行ROS融合基因(FIG-ROS、SLC34A2-ROS、CD74-ROS)检测。SERPINA1作为参照基因。结果在56个中国人胆管癌样本中,80.4%... 目的探讨胆管癌中ROS融合基因的表达情况。方法收集经甲醛固定和石蜡包埋的I-IV期胆管癌组织,采用RT-PCR对胆管癌组织进行ROS融合基因(FIG-ROS、SLC34A2-ROS、CD74-ROS)检测。SERPINA1作为参照基因。结果在56个中国人胆管癌样本中,80.4%(45/56)表达SERPINA1,在这些样本中没有任何一种ROS融合基因表达。结论 ROS融合基因在中国胆管癌病人中不是常见表达基因。 展开更多
关键词 ROS融合基因 胆管癌 RT-PCR
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铁调节蛋白1真核表达质粒的构建及功能初步研究
16
作者 成春明 王丹 朱俐 《交通医学》 2012年第2期103-107,111,共6页
目的:构建人来源铁调节蛋白1(IRP1)真核表达质粒,检测该质粒在人肝癌细胞(HepG2)中的表达及其对转铁蛋白受体1(TfR1)和二价金属转运体1(DMT1)表达的影响。方法:从HepG2细胞中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应获得IRP1的cDNA。根据不同... 目的:构建人来源铁调节蛋白1(IRP1)真核表达质粒,检测该质粒在人肝癌细胞(HepG2)中的表达及其对转铁蛋白受体1(TfR1)和二价金属转运体1(DMT1)表达的影响。方法:从HepG2细胞中提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应获得IRP1的cDNA。根据不同的酶切位点分别构建IRP1 4个分段目的基因,依次连接4段基因并将其构建入真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证碱基序列。用FuGENEHD将质粒pcDNA3.1(+)-IRP1瞬时转染至HepG2。以QRT-PCR方法检测转染pcDNA3.1(+)-IRP1质粒,观察对IRP1以及其调控基因TfR1和DMT1表达的影响。结果:扩增出IRP1全长cDNA,构建真核表达质粒,4个质粒经相应酶双酶切后,分子量分别为1261bp、502bp、600bp、310bp。经检测质粒转染至HepG2细胞后,IRP1表达显著高于转染空载质粒细胞。结果显示与对照组相比,转染真核pcDNA3.1(+)-IRP1质粒后IRP1表达显著上调约50倍,TfR1表达增加约3倍,DMT1表达增加约1.5倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建人IRP1基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IRP1,并证明其能在HepG2细胞内高表达,从而影响IRP1调控基因的表达。 展开更多
关键词 铁调节蛋白1 真核表达 质粒构建 逆转录聚合酶链反应 原发性肝细胞癌
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环孢菌素A对体外NIT-1胰岛β细胞增殖及其增殖相关基因表达的影响
17
作者 余乐 雷林生 吴曙光 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第11期1278-1280,共3页
目的观察环孢霉素A(CsA)对体外培养的NIT-1胰岛β细胞增殖和poα1mRNA表达的影响.方法用MTT法检测不同浓度的CsA(0.05～10μmol/L)作用48和72h后NIT-1胰岛β细胞增殖的情况.利用半定量RT-PCR法检测10μmol/LCsA处理NIT-1胰岛β细胞48h后... 目的观察环孢霉素A(CsA)对体外培养的NIT-1胰岛β细胞增殖和poα1mRNA表达的影响.方法用MTT法检测不同浓度的CsA(0.05～10μmol/L)作用48和72h后NIT-1胰岛β细胞增殖的情况.利用半定量RT-PCR法检测10μmol/LCsA处理NIT-1胰岛β细胞48h后polα1在mRNA水平上的表达.结果CsA可抑制NIT-1胰岛β细胞的增殖,且与时间、剂量正相关.另外,CsA还下调了polα1mRNA的表达.结论CsA可抑制NIT-1胰岛β细胞增殖,其机制可能与下调polα1mRNA表达有关. 展开更多
关键词 环孢菌素A NIT-1胰岛β细胞 细胞增殖 基因表达 细胞培养
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反转录聚合酶链反应检测胃癌病人中心静脉血CK20mRNA表达及其临床意义
18
作者 孟兴凯 张俊晶 +3 位作者 岳根全 陈怀增 彭淑牖 杨成旺 《内蒙古医学院学报》 2006年第5期371-374,共4页
目的:运用巢式反转录聚合酶链反应(nest RT-PCR)技术,探讨细胞角蛋白20(CK20mRNA)在胃癌病人中心静脉血的表达及其临床意义。方法:nest RT-PCR检测胃癌病人中心静脉血及良性疾病病人中心静脉血CK20mRNA,表达情况与临床病理因素进行分析... 目的:运用巢式反转录聚合酶链反应(nest RT-PCR)技术,探讨细胞角蛋白20(CK20mRNA)在胃癌病人中心静脉血的表达及其临床意义。方法:nest RT-PCR检测胃癌病人中心静脉血及良性疾病病人中心静脉血CK20mRNA,表达情况与临床病理因素进行分析。结果:64例胃癌病人34例CK20mRNA阳性,阳性率为53.1%,良性病病人16例均阴性;胃癌病人血液CK20mRNA的阳性率与肿瘤大小、腹腔和肝转移、临床分期相关(P<0.05),与病理组织学类型无相关性(P>0.05);8例早期胃癌病人中2例CK20mRNA阳性。结论:扩增CK20mRNA的nest RT-PCR方法是检测胃癌病人中心静脉血微转移敏感而特异的方法。 展开更多
关键词 胃癌 血行转移 细胞角蛋白 反转录聚合酶链反应 微转移
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滋补肝肾方激活小鼠B-16黑色素瘤细胞线粒体ATP合成酶-6的基因表达 被引量：5
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作者 郁卫东 杨立新 +8 位作者 刘桂生 李文雍 陈清轩 王莒生 王辉 王平 蔡念宁 陶毅 张广中 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第S1期225-228,共4页
目的研究滋补肝肾方复方及单方对小鼠 B-16黑色素瘤细胞酪氨酸酶 mRNA 表达的影响及滋补肝肾方的分子作用机制。方法定量逆转录 PCR 法(quantitative reverse transcriptional polymerase chain reac-tion,QRT-PCR)研究滋补肝肾方复方... 目的研究滋补肝肾方复方及单方对小鼠 B-16黑色素瘤细胞酪氨酸酶 mRNA 表达的影响及滋补肝肾方的分子作用机制。方法定量逆转录 PCR 法(quantitative reverse transcriptional polymerase chain reac-tion,QRT-PCR)研究滋补肝肾方复方及单方对小鼠黑色素瘤酪氨酸酶 mRNA 表达的作用;mRNA 差别显示(mRNA differential display reverse transcriptional polymerase chain reaction,DDRT-PCR)法研究用滋补肝肾方复方及单方处理 B-16黑色素瘤细胞前后基因的差别表达。结果滋补肝肾方复方及各个单方并非都能够增加酪氨酸酶 mRNA 的表达量;但是滋补肝肾方复方和某些单方却能够激活小鼠黑色素瘤 B-16细胞线粒体 ATP合成酶-6(ATPase-6)基因的特异性表达。结论 QRT-PCR 结果表明不能将滋补肝肾方的治疗作用单纯解释为是酪氨酸酶表达提高的结果,而可能存在其他的作用机制,DDRT-PCR 结果表明 ATPase-6基因表达的激活可能是滋补肝肾方作用的关键环节。 展开更多
关键词 滋补肝肾方 白癜风 小鼠黑色素瘤细胞 酪氨酸酶 定量逆转录 PCR 法 mRNA 差别显示 ATP 合成酶-6
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喉鳞癌颈淋巴结隐匿性微转移的检测 被引量：1
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作者 李柯楠 陶磊 +2 位作者 周梁 李诗敏 朱莉 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2010年第3期157-159,I0003,共4页
目的探讨建立基于实时定量反转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcriptional polymerase chain reaction,real-time qRT-PCR)技术的喉鳞癌淋巴结微转移检测方法 ,寻找具有特异性和敏感性的肿瘤标记物。方法选择21例... 目的探讨建立基于实时定量反转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcriptional polymerase chain reaction,real-time qRT-PCR)技术的喉鳞癌淋巴结微转移检测方法 ,寻找具有特异性和敏感性的肿瘤标记物。方法选择21例喉鳞癌患者经选择性颈清扫术后77个淋巴结区域中563个淋巴结标本,采用real-time qRT-PCR技术定量检测各区域淋巴结中细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)、鳞状细胞癌相关抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCCA)和寻常天疱疮抗原(pemphigus vulgaris antigen,PVA)的表达,并与苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测的结果进行对照分析。结果 IHC与HE染色检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。3种肿瘤转移标记物在全部淋巴结标本中的阳性检出率均明显高于HE染色(P<0.01);HE染色阳性的淋巴结标本中3种肿瘤转移标记物的表达量明显高于HE染色阴性标本的表达量(P<0.01)。结论 IHC与HE染色具有相似的微转移检出率。应用real-time qRT-PCR技术检测喉鳞癌患者颈部淋巴结标本中的CK19、SCCA和PVA3种肿瘤转移标记物是提高检测喉鳞癌颈淋巴结隐匿性微转移敏感性和特异性的可行方法 。 展开更多
关键词 喉鳞癌 细胞角蛋白19 鳞状细胞癌相关抗原 寻常天疱疮抗原 实时定量逆转录聚合酶链反应 微转移
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