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基于CRISPR/Cas12a系统的人副流感病毒1-4型核酸等温检测方法的建立
1
作者
张政涛
游丽斌
翁育伟
《中华实验和临床病毒学杂志》
CAS
CSCD
2023年第5期524-529,共6页
目的建立一种基于反转录重组酶介导的等温扩增(reverse transcription recombinase-aid amplification,RT-RAA)联合CRISPR/Cas12a反应的人副流感病毒(human parainfluenza virus,HPIV)核酸检测方法。方法根据HPIV核衣壳蛋白(nucleocapsi...
目的建立一种基于反转录重组酶介导的等温扩增(reverse transcription recombinase-aid amplification,RT-RAA)联合CRISPR/Cas12a反应的人副流感病毒(human parainfluenza virus,HPIV)核酸检测方法。方法根据HPIV核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)基因保守区序列,设计RT-RAA所需型特异性引物及crRNA(CRISPR RNA,crRNA),应用Cas12a切割荧光标记探针产生的荧光强度筛选高敏感性HPIV1-4型特异性crRNA并优化crRNA、Cas12a和探针浓度。利用体外转录RNA及临床样本,评价RT-RAA联合CRISPR/Cas12a检测方法的检测下限及特异性。结果从设计的crRNA中筛选出高敏感性的HPIV1-4型特异性crRNA,并建立基于荧光强度测量的RT-RAA联合CRISPR/Cas12a的HPIV核酸检测方法,该方法对各型HPIV的检测下限均可达到10拷贝/反应。采用该方法检测8种其他呼吸道病毒感染的临床样本,均未显示有交叉反应。结论建立的HPIV 1-4型荧光法CRISPR核酸检测方法快速、特异,且可无需专业核酸检测设备。
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关键词
人副流感病毒
反转录重组酶介导的等温扩增
CRISPR
Cas12a
原文传递
题名
基于CRISPR/Cas12a系统的人副流感病毒1-4型核酸等温检测方法的建立
1
作者
张政涛
游丽斌
翁育伟
机构
福建医科大学公共卫生学院
福建省疾病预防控制中心福建省人兽共患病研究重点实验室
出处
《中华实验和临床病毒学杂志》
CAS
CSCD
2023年第5期524-529,共6页
基金
福建省卫生健康中青年科研重大项目(2021ZQNZD006)
福建省科技创新平台建设项目(2019Y2001)。
文摘
目的建立一种基于反转录重组酶介导的等温扩增(reverse transcription recombinase-aid amplification,RT-RAA)联合CRISPR/Cas12a反应的人副流感病毒(human parainfluenza virus,HPIV)核酸检测方法。方法根据HPIV核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)基因保守区序列,设计RT-RAA所需型特异性引物及crRNA(CRISPR RNA,crRNA),应用Cas12a切割荧光标记探针产生的荧光强度筛选高敏感性HPIV1-4型特异性crRNA并优化crRNA、Cas12a和探针浓度。利用体外转录RNA及临床样本,评价RT-RAA联合CRISPR/Cas12a检测方法的检测下限及特异性。结果从设计的crRNA中筛选出高敏感性的HPIV1-4型特异性crRNA,并建立基于荧光强度测量的RT-RAA联合CRISPR/Cas12a的HPIV核酸检测方法,该方法对各型HPIV的检测下限均可达到10拷贝/反应。采用该方法检测8种其他呼吸道病毒感染的临床样本,均未显示有交叉反应。结论建立的HPIV 1-4型荧光法CRISPR核酸检测方法快速、特异,且可无需专业核酸检测设备。
关键词
人副流感病毒
反转录重组酶介导的等温扩增
CRISPR
Cas12a
Keywords
Human
parainfluenza
viruses
reverse transcription
recombinase
-
aid
amplification
CRISPR
Cas12a
分类号
R373.13 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于CRISPR/Cas12a系统的人副流感病毒1-4型核酸等温检测方法的建立
张政涛
游丽斌
翁育伟
《中华实验和临床病毒学杂志》
CAS
CSCD
2023
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