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基于CRISPR/Cas12a系统的人副流感病毒1-4型核酸等温检测方法的建立
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作者 张政涛 游丽斌 翁育伟 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2023年第5期524-529,共6页
目的建立一种基于反转录重组酶介导的等温扩增(reverse transcription recombinase-aid amplification,RT-RAA)联合CRISPR/Cas12a反应的人副流感病毒(human parainfluenza virus,HPIV)核酸检测方法。方法根据HPIV核衣壳蛋白(nucleocapsi... 目的建立一种基于反转录重组酶介导的等温扩增(reverse transcription recombinase-aid amplification,RT-RAA)联合CRISPR/Cas12a反应的人副流感病毒(human parainfluenza virus,HPIV)核酸检测方法。方法根据HPIV核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)基因保守区序列,设计RT-RAA所需型特异性引物及crRNA(CRISPR RNA,crRNA),应用Cas12a切割荧光标记探针产生的荧光强度筛选高敏感性HPIV1-4型特异性crRNA并优化crRNA、Cas12a和探针浓度。利用体外转录RNA及临床样本,评价RT-RAA联合CRISPR/Cas12a检测方法的检测下限及特异性。结果从设计的crRNA中筛选出高敏感性的HPIV1-4型特异性crRNA,并建立基于荧光强度测量的RT-RAA联合CRISPR/Cas12a的HPIV核酸检测方法,该方法对各型HPIV的检测下限均可达到10拷贝/反应。采用该方法检测8种其他呼吸道病毒感染的临床样本,均未显示有交叉反应。结论建立的HPIV 1-4型荧光法CRISPR核酸检测方法快速、特异,且可无需专业核酸检测设备。 展开更多
关键词 人副流感病毒 反转录重组酶介导的等温扩增 CRISPR Cas12a
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