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自身免疫病患者外周血中B细胞激活因子基因表达水平的测定 被引量:6
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作者 周琳 许臻 +5 位作者 范列英 屠小卿 朱烨 谭龙益 孔宪涛 仲人前 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2003年第12期713-717,共5页
目的 建立测定B细胞激活因子 (B lymphocytestimulator ,BlyS)mRNA含量的荧光定量反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法 ,并用来检测自身免疫病 [系统性红斑狼疮 (SLE)、类风湿关节炎 (RA) ]患者外周血单个核细胞 (PBMCs)中BlyS的基因表达... 目的 建立测定B细胞激活因子 (B lymphocytestimulator ,BlyS)mRNA含量的荧光定量反转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法 ,并用来检测自身免疫病 [系统性红斑狼疮 (SLE)、类风湿关节炎 (RA) ]患者外周血单个核细胞 (PBMCs)中BlyS的基因表达水平 ,探讨BlyS基因表达水平与自身免疫性疾病发病机制的关系。方法 构建克隆载体 pMD18 T BlyS作为定量模板 ,基于TaqMan荧光探针技术 ,建立实时荧光RT PCR方法在GeneAmp 5 70 0型检测仪上定量检测 19例自身免疫病(SLE、RA)确诊病人、2 0例亚临床病人 (主要是抗核抗体阳性 )、8例其他对照性疾病患者 (自身抗体阴性 ,免疫球蛋白升高 )、2 0名正常健康献血者的外周血BlySmRNA表达含量。结果  19例自身免疫病确诊病人的PBMCs中均有BlySmRNA的表达 ,范围从 9 7× 10 5~ 3 2× 10 8拷贝 /μgRNA ,均值为 (8 4± 7 9)× 10 7拷贝 /μgRNA ;2 0例亚临床病人的强度为 8 6× 10 4~ 3 8× 10 6拷贝 /μgRNA ,均值为 (1 3± 1 2 )× 10 6拷贝 /μgRNA ;2 0名正常健康人的强度为 5 5× 10 4~ 4 9× 10 5拷贝 /μgRNA ,均值为 (1 7± 1 4 )× 10 5拷贝 /μgRNA ;8例自身抗体阴性而免疫球蛋白升高的其他疾病患者的强度为 5 8× 10 5~ 3 5× 10 7拷贝 /μgRNA ,均值为 (1 展开更多
关键词 自身免疫病 外周血 B细胞激活因子 基因表达 测定
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B细胞激活因子与系统性红斑狼疮的相关性研究 被引量:2
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作者 周琳 屠小卿 +2 位作者 王皓 孔宪涛 仲人前 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期42-45,共4页
目的从核酸(mRNA)和血清蛋白水平初步探讨B细胞激活因子(BlyS)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用机制。方法用自行建立的酶联免疫吸附测定法(ELISA)和荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQRTPCR),对59例相对稳定期SLE患者和40名健康人血清Bly... 目的从核酸(mRNA)和血清蛋白水平初步探讨B细胞激活因子(BlyS)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用机制。方法用自行建立的酶联免疫吸附测定法(ELISA)和荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQRTPCR),对59例相对稳定期SLE患者和40名健康人血清BlyS含量、外周血单个核细胞(PBMC)中BlySmRNA含量进行检测;并比较SLE患者血清BlyS含量与外周血BlyS基因表达水平、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度和抗双链DNA(dsDNA)抗体滴度的相关性。结果59例相对稳定期SLE患者血清BlyS含量[(8.42±1.55)μg/L]明显高于健康对照组[(3.19±0.88)μg/L,P<0.001],并与IgG浓度、抗dsDNA抗体的滴度呈正相关性(分别r=0.442,r=0.850,均P<0.001)。与健康对照组相比,59例SLE患者中39例(66%)外周血BlyS基因水平明显升高(P<0.001),与血清BlyS含量呈明显正相关(r=0.652,P<0.001)。结论主要由BlyS基因异常表达所引发的高浓度BlyS血清蛋白是一明显的SLE免疫病理特征;BlyS作为SLE发病的重要调控因子,可能在自身反应性B细胞的活化和促进特异性自身抗体的产生中均发挥着重要作用。 展开更多
关键词 红斑狼疮 系统性 淋巴细胞激活因子 酶联免疫吸附测定 逆转录聚合酶链 反应 B细胞激活因子 系统性红斑狼疮 荧光定量逆转录聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定法
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锌指转录因子GKLF在子宫内膜癌中的表达及其与手术病理分期的相关性 被引量:1
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作者 刘红 崔竹梅 +1 位作者 齐卫红 刘芝华 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2007年第2期118-120,123,共4页
目的:探讨锌指转录因子GKLF/KLF4 mRNA在子宫内膜癌组织及良性子宫内膜组织中的表达,分析其表达的变化与手术病理分期的相关性。方法:采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测37例子宫内膜癌组织(研究组)和26例良性子宫内膜组... 目的:探讨锌指转录因子GKLF/KLF4 mRNA在子宫内膜癌组织及良性子宫内膜组织中的表达,分析其表达的变化与手术病理分期的相关性。方法:采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测37例子宫内膜癌组织(研究组)和26例良性子宫内膜组织(对照组)中GKLF mRNA表达强度的变化。结果:(1)每份实验标本中均检测到GKLF mRNA表达,子宫内膜癌中的相对表达强度为0.38±0.19,良性内膜组织中的表达强度则为0.72±0.16,与良性内膜组织相比较,内膜癌组织中GKLF mRNA的表达强度降低。经统计学分析差异有统计学意义(P<0.01);(2)子宫内膜癌组织GKLF mRNA的表达强度依次为Ⅰ期内膜癌0.56±0.12,Ⅱ期内膜癌0.35±0.09,Ⅲ期内膜癌0.17±0.08,子宫内膜癌的手术病理分期愈晚,GKLF mRNA的表达强度愈低,差异有统计学意义(P<0.01);(3)随着病理分级的增高,GKLF mRNA的表达强度逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:在子宫内膜癌组织中,GKLF表达下调,而且GKLF mRNA的表达水平与子宫内膜癌的临床分期和病理分级呈负相关,提示GKLF可能参与了子宫内膜癌的发生和进展过程。 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤 锌指转录因子GKLF/KLF4 RNA 信使 逆转录聚合酶链反应
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MMP-2、TIMP-2在子宫内膜异位症组织中的表达及其意义 被引量:2
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作者 刘维琴 刘永红 李婧 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2006年第8期589-591,共3页
目的研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制因子-2(TIMP-2)mRNA在子宫内膜异位症异位和在位内膜组织中的表达及临床意义。方法分别选取子宫内膜异位症异位内膜组织50例、在位内膜组织26例和对照组正常子宫内膜组织22例为研究对象,应用半... 目的研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制因子-2(TIMP-2)mRNA在子宫内膜异位症异位和在位内膜组织中的表达及临床意义。方法分别选取子宫内膜异位症异位内膜组织50例、在位内膜组织26例和对照组正常子宫内膜组织22例为研究对象,应用半定量逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测MMP-2、TIMP-2mRNA的表达。结果(1)MMP-2mRNA在异位症异位内膜组织中相对表达量明显高于正常子宫内膜组织和在位内膜,差异均有显著性(P<0.01,P<0.01);TIMP-2mRNA在子宫内膜异位症异位内膜和在位内膜组织中均低表达,其相对表达量分别明显低于正常子宫内膜,差异均有显著性(P<0.01;P<0.01);(2)异位症异位内膜组织中MMP-2mRNA、TIMP-2的表达与r-AFS临床分期无关,差异无显著性(P>0.05)。结论异位和在位内膜组织中MMP-2高表达,TIMP-2低表达,使MMP-2与TIMP-2平衡失调,异位内膜组织侵袭降解ECM的能力增强,从而在子宫内膜异位症中的发生发展中起了重要作用。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶抑制因子-2 在位内膜 异位内膜 半定量逆转录聚合酶链反应
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基质金属蛋白酶2及其组织抑制因子1在子宫内膜异位症中的表达及其意义 被引量:2
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作者 奚庆华 张玉泉 +1 位作者 徐云钊 叶青 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2008年第3期444-445,458,共3页
目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其组织抑制因子1(TIMP-1)mRNA在子宫内膜异位症异位内膜和在位内膜中的表达及其意义。方法分别选取子宫内膜异位症患者异位内膜组织40例、在位内膜组织18例和对照组正常内膜组织20例作为研究对象,应用... 目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其组织抑制因子1(TIMP-1)mRNA在子宫内膜异位症异位内膜和在位内膜中的表达及其意义。方法分别选取子宫内膜异位症患者异位内膜组织40例、在位内膜组织18例和对照组正常内膜组织20例作为研究对象,应用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术检测MMP-2、TIMP-1 mRNA的表达。结果MMP-2 mRNA在异位内膜的表达强度为0.58±0.11,明显高于在位内膜的0.47±0.09和正常内膜的0.45±0.08,差异均有统计学意义(P﹤0.05和﹤0.01);TIMP-1 mRNA在异位内膜的表达强度(1.57±0.70)明显低于在位内膜(2.21±0.95)和对照组内膜(2.38±0.78),差异均有统计学意义(均P﹤0.01)。结论子宫内膜异位症患者异位内膜组织中MMP-2 mRNA表达增强可能促进异位内膜的种植,TIMP-1 mRNA表达减弱可能促进内膜异位病变的发展。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 基质金属蛋白酶2 基质金属蛋白酶抑制因子1 半定量逆转录聚合酶链式反应
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约氏疟原虫孢子增殖特异18S核糖体DNA部分序列及其检测应用 被引量:1
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作者 徐晓春 瞿逢伊 宋关鸿 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期149-152,共4页
目的 测定约氏疟原虫 By2 6 5株 S型 18S r DNA序列 ,并用于蚊体内疟原虫的分子检测。 方法 根据伯氏疟原虫 S型 18S r DNA序列 ,合成一对保守区引物 ,从感染约氏疟原虫 7d后的斯氏按蚊中肠组织逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)扩增... 目的 测定约氏疟原虫 By2 6 5株 S型 18S r DNA序列 ,并用于蚊体内疟原虫的分子检测。 方法 根据伯氏疟原虫 S型 18S r DNA序列 ,合成一对保守区引物 ,从感染约氏疟原虫 7d后的斯氏按蚊中肠组织逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)扩增约氏疟原虫 S型 18S r RNA片段并测序 ,据此序列合成约氏疟原虫 S型 18S r D-NA种型特异引物 ,与保守的逆转录引物配伍 ,对感染后 1~ 7d蚊体内约氏疟原虫 S型 18S r RNA表达量进行RT- PCR检测。 结果 扩增的约氏疟原虫 S型 18S r DNA片段长度为 92 0 bp,与伯氏疟原虫 S型和约氏疟原虫A型的同源性分别为 95 .3%和 94.0 %。 RT- PCR检测结果显示卵囊密度与扩增带强度明显一致 ,且敏感性高于解剖镜检方法。感染后 3d即可检出蚊体内疟原虫 ,而此时卵囊在光镜下尚难识别。 结论 测定了约氏疟原虫S型 18S r DNA的部分序列 ,将其作为分子指标 ,可早期、敏感、特异和半定量检测蚊体内感染的疟原虫。 展开更多
关键词 约氏疟原虫 18S核糖体DNA检测 逆转录-聚合酶链反应
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基质金属蛋白酶-2 mRNA在子宫内膜异位症中的表达及意义 被引量:1
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作者 李全香 郭新华 高静 《滨州医学院学报》 2007年第6期420-422,共3页
目的研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA在子宫内膜异位症异位内膜和在位内膜组织中的表达,探讨MMP-2在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法分别选取子宫内膜异位症异位内膜组织50例、在位内膜组织22例和对照组正常子宫内膜组织20例为... 目的研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA在子宫内膜异位症异位内膜和在位内膜组织中的表达,探讨MMP-2在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法分别选取子宫内膜异位症异位内膜组织50例、在位内膜组织22例和对照组正常子宫内膜组织20例为研究对象,应用半定量逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测MMP-2 mRNA的表达。结果①MMP-2 mRNA在异位症异位内膜组织中均有表达,其相对表达量为(0.6210±0.0870),明显高于正常子宫内膜组织(0.5170±0.0760)和在位内膜(0.5360±0.0840),差异均有显著性(P<0.05)。而在异位症在位内膜与正常子宫内膜之间差异无显著性(P>0.05);②在子宫内膜异位症患者在位内膜中,MMP-2 mRNA的表达与正常内膜相比,差异无显著性(P>0.05)。而且受月经周期的影响,呈现周期性变化。③异位症异位内膜组织中MMP-2 mRNA的表达与r-AFS临床分期没有相关性,差异没有显著性(P>0.05)。④正常子宫内膜与异位症在位内膜组织中MMP-2 mRNA的表达均受月经周期的影响而呈现周期性变化,分泌期的表达明显高于增生期(P<0.05);而在异位症异位内膜组织中,二者的表达则失去其在在位内膜组织中的周期性变化,增生期与分泌期无显著差别(P>0.05)。结论①异位内膜组织不仅具有分泌MMP-2的能力,而且表达强度明显高于正常内膜,使异位内膜组织具有侵袭腹膜及周围组织的能力,并且在盆腔、腹膜内不断种植生长,在子宫内膜异位症的发生发展中发挥重要的作用。②MMP-2在异位内膜组织中呈高表达,但不随r-AFS临床分期的增高而增高,因此认为子宫内膜异位组织各期均有侵袭性,这是异位症病情进行性加重的原因之一。③MMP-2在异位内膜组织中的表达失去其在正常子宫内膜组织中的月经周期性变化,这可能是临床上应用激素治疗异位症失败的原因之一。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 基质金属蛋白酶-2 在位内膜 异位内膜 逆转录聚合酶链反应
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人肌肉组织褪黑素受体mRNA的表达
8
作者 李雷 《标记免疫分析与临床》 CAS 2004年第4期212-214,共3页
为证实褪黑素受体 (melatoninreceptor ,MR)存在于人肌肉组织内 ,取人脊柱两侧肌肉组织抽提总RNA ,应用RT -PCR检测MRmRNA并测序。结果表明人脊柱两侧肌肉组织内有褪黑素受体mt1及MT2 表达 ,测序结果与人类褪黑素受体cDNA相吻合。证明... 为证实褪黑素受体 (melatoninreceptor ,MR)存在于人肌肉组织内 ,取人脊柱两侧肌肉组织抽提总RNA ,应用RT -PCR检测MRmRNA并测序。结果表明人脊柱两侧肌肉组织内有褪黑素受体mt1及MT2 表达 ,测序结果与人类褪黑素受体cDNA相吻合。证明肌肉组织是褪黑素作用的靶器官 ,褪黑素可能通过存在于肌肉组织中的mt1及MT2 受体 ,来调节脊柱两侧肌肉组织的生长发育。 展开更多
关键词 褪黑素 受体 逆转录-聚合酶链反应 肌肉组织
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细胞色素芳香化酶基因及环氧合酶-2基因mRNA在子宫内膜异位症异位与在位内膜的表达
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作者 徐颖 郑志群 马炎辉 《福建医科大学学报》 2006年第1期22-25,共4页
目的探讨细胞色素芳香化酶(P450arom)基因、环氧合酶-2(COX-2)基因mRNA在子宫内膜异位症(内异症)患者异位、在位子宫内膜组织中的表达及其意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内异症患者在位及异位子宫内膜及正常子宫内膜中P4... 目的探讨细胞色素芳香化酶(P450arom)基因、环氧合酶-2(COX-2)基因mRNA在子宫内膜异位症(内异症)患者异位、在位子宫内膜组织中的表达及其意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内异症患者在位及异位子宫内膜及正常子宫内膜中P450arom mRNA、COX-2 mRNA的表达情况。结果P450arom mRNA在内异症患者异位及在位子宫内膜均有强表达,正常子宫内膜无表达,分泌期、增殖期无差别;COX-2 mRNA在内异症患者异位及在位子宫内膜均有强表达,正常子宫内膜弱表达(P<0.05),且内异症患者在位子宫内膜及正常子宫内膜COX-2 mRNA表达分泌期均略强于增殖期,但差别均无统计学意义(P>0.05),异位内膜分泌期、增殖期无差别。不同rAFS分期内异症子宫内膜P450arom mRNA、COX-2 mRNA的表达无差别。结论子宫内膜P450arom mRNA、COX-2 mRNA的高表达与内异症的发生、发展可能密切相关。 展开更多
关键词 细胞色素p-450芳香酶 环氧合酶-2 基因 子宫内膜异位症 逆转录聚合酶链反应
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实时荧光定量PCR检测结直肠腺癌患者组织中广泛型线粒体肌酸激酶基因的表达 被引量:4
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作者 钱琤 于嘉屏 +3 位作者 王爱华 顾鹏飞 邓安梅 仲人前 《现代检验医学杂志》 CAS 2008年第2期6-8,共3页
目的建立检测人广泛型线粒体肌酸激酶(ubiquitous mitochondrial creatine kinase,uMtCk)mRNA荧光定量的方法,并检测了结直肠腺癌病人肿瘤组织和癌旁组织中uMtCk基因表达的水平。方法基于TaqMan荧光探针技术,以GAPDH作为内参,建... 目的建立检测人广泛型线粒体肌酸激酶(ubiquitous mitochondrial creatine kinase,uMtCk)mRNA荧光定量的方法,并检测了结直肠腺癌病人肿瘤组织和癌旁组织中uMtCk基因表达的水平。方法基于TaqMan荧光探针技术,以GAPDH作为内参,建立实时荧光定量RT-PCR方法,并检测了30名结直肠腺癌病人肿瘤组织和癌旁组织uMtCk mRNA的表达。结果30倒结直肠肿瘤患者肿瘤组织中有uMtCk mRNA的表达,范围为7.4×10^5-5.3×10^8拷见/μg RNA,均值为(9.4±5.7)×10^6拷贝/μg RNA;30例癌旁组织uMtCk表达为4.5×10^3-6.9×10^5拷贝/μg RNA,均值为(8.6±3.4)×10^4拷贝/μg RNA。结论成功地建立了人uMtCk基因表达含量的荧光定量检测方法,检测结果可用绝对拷贝数表示,定量准确可靠。且结直肠腺癌病人肿瘤组织uMtCk mRNA的含量是升高的,提示uMtCk mRNA含量的检测有助于结直肠腺癌病人临床诊断。 展开更多
关键词 广泛型线粒体肌酸激酶 荧光定量反转录 聚合酶链反应 结直肠腺癌
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Aberrant Expression of TNF-α and TGF-β_1 mRNA in Spontaneous Abortion
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作者 Ji-fen HU Hong-chu BAO +1 位作者 Feng-chuan ZHU Cai-ling YOU 《Journal of Reproduction and Contraception》 CAS 2004年第3期163-170,共8页
Objective To investigate the aberrant expressions of TNF-α and TGF-β1 in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and placental tissues in patients with early spontaneous abortion Methods Using the technique of ... Objective To investigate the aberrant expressions of TNF-α and TGF-β1 in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and placental tissues in patients with early spontaneous abortion Methods Using the technique of semi-quantitative reverse transcript-polymerase chain reaction (RT-PCR), TNF-α mRNA and TGF-β1 mRNA in PBMCs were measured in spontaneous abortion group (30 cases), normal pregnancy group (25 cases) and nonpregnant group (25 cases). The expressive intension of TNF-α protein and TGF-β1 protein in placental tissues was also identified by immunohistochemistry. Results Both levels of TNF-α mRNA and TGF-β1 mRNA expressed in PBMCs were significantly different between the three groups respectively (P〈0.05). Levels of TNF-α in syncytiotrophoblastic and cytotrophoblastic cells of the two aborted groups were substantially higher than those of the nonregnant group (P〈0.01), but the levels of TGF-β1 in syncytiotrophoblastic cells of the two aborted groups were markedly lower than those of the non-pregnant group (P〈0.01). Conclusion There is potential relation between TGF-β at the fetomaternal interface and spontaneous abortion. TGF-β1 may contribute to the maintenance of pregnancy, and low-level expression of TGF-β1 may be associated with pregnancy failure. 展开更多
关键词 spontaneous abortion tumor necrosis factor (TNF) transforming growth factor (TGF) reverse transcript-polymerase chain reaction (RT-PCR) IMMUNOHISTOCHEMISTRY
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实时荧光定量RT—PCR检测肺癌中PUMA mRNA的表达
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作者 陈韵如 李娅 +2 位作者 马薇 向莉 王玉明 《现代检验医学杂志》 CAS 2009年第1期30-33,共4页
目的建立检测肺癌PUMA mRNA的实时荧光定量RT—PCR方法,初步探讨PUMA mRNA表达水平与肺癌发生发展的关系。方法以GAPDH作为内参照基N,应用实时荧光定量RT—PCR,检测PUMA mRNA在肺癌组织中的表达水平。结果建立了应用实时荧光定量RT—... 目的建立检测肺癌PUMA mRNA的实时荧光定量RT—PCR方法,初步探讨PUMA mRNA表达水平与肺癌发生发展的关系。方法以GAPDH作为内参照基N,应用实时荧光定量RT—PCR,检测PUMA mRNA在肺癌组织中的表达水平。结果建立了应用实时荧光定量RT—PCR检测肺癌PUMA mRNA的方法。熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证实了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,40例肺癌患者的肿瘤组织、对应的癌旁组织、远癌组织和10例肺良性病变组织中均有PUMA mRNA的表达,表达水平在肺癌与肺良性病变之间、肺癌各病理类型之间差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论应用SYBR Green I实时荧光定量RT—PCR可以特异、准确、快速地分析不同肺组织中PUMA mRNA的表达差异。非小细胞肺癌的发生发展与PUMA mRNA的表达无明显相关性。 展开更多
关键词 PUMA 实时荧光定量RT—PCR 肺癌 SYBR Green I
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3个肾上腺脑白质营养不良家系的基因突变分析 被引量:14
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作者 黄梁浒 曾健 +3 位作者 杨渤生 黄惠娟 吴玉水 兰风华 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期193-197,共5页
目的 对 3个肾上腺脑白质营养不良 ( adrenoleukodystrophy,AL D) ( MIM# 30 0 10 0 )家系进行基因突变分析。方法 从 3个 AL D患儿及其主要家系成员的外周血白细胞 ,提取总 RNA和基因组 DNA。应用逆转录聚合酶链反应技术 ,对 3个家系... 目的 对 3个肾上腺脑白质营养不良 ( adrenoleukodystrophy,AL D) ( MIM# 30 0 10 0 )家系进行基因突变分析。方法 从 3个 AL D患儿及其主要家系成员的外周血白细胞 ,提取总 RNA和基因组 DNA。应用逆转录聚合酶链反应技术 ,对 3个家系的 ABCD1基因编码区 ,分 4个片段进行 PCR扩增并对 PCR产物直接测序。同时应用 PCR-限制性酶切或扩增阻滞突变系统分析相应的基因组 DNA,进一步确证ABCD1基因的突变位点。结果  3名患儿的 ABCD1基因上均存在错义突变 ,其中患儿 1的 ABCD1基因第 5 34位密码子发生 CCC→ CGC改变 ,使脯氨酸被精氨酸取代 ( P5 34R) ;患儿 2的 ABCD1基因第 2 6 6位密码子发生 GGG→AGG改变 ,使甘氨酸被精氨酸取代 ( G2 6 6 R) ;患儿 3母亲的 ABCD1上一个等位基因第 6 17位密码子发生 CGC→ GGC改变 ,使精氨酸被甘氨酸取代 ( R6 17G) ,另一个等位基因未发生突变。结论 在中国人 AL D患者中发现 1个新的 ABCD1基因突变 ( P5 34R) ,并首次在中国人 AL D患者中检测到G2 6 6 R、R6 展开更多
关键词 肾上腺脑白质营养不良 ABCDl基因 基因突变 扩增阻滞突变系统 逆转录聚合酶链反应
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Graves眼病Th_1/Th_2相关细胞因子群谱的特征 被引量:11
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作者 汪新宇 李全忠 +2 位作者 文世林 王桂兰 田志刚 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期150-152,共3页
目的 探讨Graves眼病 (Graves’ophthalmopathy ,GO)发生的免疫机制 ,明确GO的Th1/Th2 相关细胞因子群谱的特征。方法 用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测IFN γ、TNF α、IL 2、IL 4、IL 6、IL 10等 6种细胞因子的mRNA转录。结果 ... 目的 探讨Graves眼病 (Graves’ophthalmopathy ,GO)发生的免疫机制 ,明确GO的Th1/Th2 相关细胞因子群谱的特征。方法 用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测IFN γ、TNF α、IL 2、IL 4、IL 6、IL 10等 6种细胞因子的mRNA转录。结果 与正常对照组相比 ,Graves病恶性突眼组与非突眼组细胞因子的基因转录检出率明显增高 (P <0 .0 1) ;Graves病非突眼组Th2 类细胞因子IL 4和IL 6的基因转录检出率明显高于Th1类细胞因子IFN γ ,TNF α和IL 2的基因转录检出率 (P <0 .0 1) ;而恶性突眼组Th1和Th2 之间细胞因子的基因转录检出率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 Graves病恶性突眼者细胞因子的基因转录模式呈典型的Th0 ,细胞免疫和体液免疫共同参与了突眼的发生 ,而非突眼者细胞因子表达向Th2 方向漂移 ,以体液免疫应答为主。 展开更多
关键词 GRAVES眼病 RT-PCR TH1/TH2相关细胞因子
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用RT-PCR方法动态分析博莱霉素致肺纤维化大鼠TGF-β_1的基因表达 被引量:8
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作者 郑悦 康健 侯显明 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期94-95,100,共3页
目的 :探讨转化生长因子 β1(TGF β1)在肺纤维化中的作用。方法 :采用博莱霉素 (BLM)致肺纤维化大鼠模型 ,分离纯化肺泡巨噬细胞 (alveolarmacrophage ,AM) ,用RT PCR及图像分析方法 ,对不同时期AM以及肺组织释放的TGF β1进行动态观... 目的 :探讨转化生长因子 β1(TGF β1)在肺纤维化中的作用。方法 :采用博莱霉素 (BLM)致肺纤维化大鼠模型 ,分离纯化肺泡巨噬细胞 (alveolarmacrophage ,AM) ,用RT PCR及图像分析方法 ,对不同时期AM以及肺组织释放的TGF β1进行动态观察。结果 :BLM组AM和肺组织中TGF β1mRNA第 3天即明显增加 (P <0 .0 5和P>0 .0 5 ) ,第 7天达到高峰 (P<0 .0 1) ,第 142 8天逐渐下降 ,但仍高于对照组 (P>0 .0 5 )。结论 :TGF β1mRNA在正常大鼠及肺纤维化大鼠中均有表达 ,后者表达明显高于前者 ;肺纤维化大鼠肺内TGF β1mRNA可能主要来源于AM。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 逆转录聚合酶链反应 肺纤维化 博莱霉素基因表达
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儿童病毒性脑膜炎、脑炎中肠道病毒感染的分子生物学分型检测及临床研究 被引量:10
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作者 郭华 丁惠 +1 位作者 李慧娟 颜卫红 《实用临床医药杂志》 CAS 2016年第1期35-38,共4页
目的探讨儿童病毒性脑膜炎、脑炎中肠道病毒感染的分子生物学分型。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及简并引物扩增并测序,利用Genbank核对分型,检测东营地区2008年1月-2012年2月63例临床诊断为病毒性脑膜炎、脑炎患儿脑脊液中的肠... 目的探讨儿童病毒性脑膜炎、脑炎中肠道病毒感染的分子生物学分型。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及简并引物扩增并测序,利用Genbank核对分型,检测东营地区2008年1月-2012年2月63例临床诊断为病毒性脑膜炎、脑炎患儿脑脊液中的肠道病毒(EV)RNA,并结合临床特点进行分析。结果 63例病毒性脑膜炎、脑炎患儿的脑脊液经RT-PCR检测,EV感染阳性率为74.6%(47/63)。利用通用引物筛选出的阳性标本,并采用简并引物经两次PCR共获得阳性结果 31例(66.0%)。随机抽取23条阳性片段进行克隆测序,测序结果与Gen Bank标准EV毒株进行同源性对比分析,相关序列同源性均在97%以上。肠道病毒引起中枢神经系统感染的临床特征在各个年龄组有所不同,33例急性期EV患儿脑脊液中白细胞数不同程度增高(均数76×106/L)。结论 EV是儿童无菌性脑膜炎、脑炎的最主要的病原体。采用RT-PCR可以快速准确的检测出中枢神经系统感染的肠道病毒;采用分型引物扩增并测序,将EV的VP1部分序列与GENBANK中的EV标准毒株进行对比,根据基因序列的同源性进行EV型别鉴定是一种切实可行的方案。EV引起的病毒性脑膜炎临床症状一般较轻、无特异性,多数患儿CSF中白细胞高于正常范围。 展开更多
关键词 肠道病毒 病毒性脑膜炎、脑炎 逆转录聚合酶链反应
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人胚胎甲状腺褪黑素受体mRNA的检测 被引量:7
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作者 孙中安 刘志民 黄超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期1062-1064,共3页
目的 :检测胚胎甲状腺中是否表达褪黑素受体。 方法 :取人胚胎甲状腺 ,抽提总 RNA并用 RT- PCR方法检测其 m R-NA,阳性产物用自动测序仪测序。 结果 :人胚胎甲状腺总 RNA以 MT1及 MT2两种引物进行的 RT- PCR产物电泳呈现阳性条带 ,测序... 目的 :检测胚胎甲状腺中是否表达褪黑素受体。 方法 :取人胚胎甲状腺 ,抽提总 RNA并用 RT- PCR方法检测其 m R-NA,阳性产物用自动测序仪测序。 结果 :人胚胎甲状腺总 RNA以 MT1及 MT2两种引物进行的 RT- PCR产物电泳呈现阳性条带 ,测序结果显示扩增产物与人类褪黑素受体 c DNA相吻合。结论 :人胚胎甲状腺组织中存在有褪黑素 MT1,MT2两种受体的 m RNA,表明该组织中有褪黑素 MT1。 展开更多
关键词 受体 褪黑素 逆转录聚合酶链反应 甲状腺 MRNA
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IL-6下调血管内皮细胞组织因子抑制物表达 被引量:6
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作者 唐小龙 江振友 +3 位作者 蔡淑玉 董军 肖瑞 卢燕茹 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期147-150,共4页
目的:观察IL-6对脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达组织因子途径抑制物(TFPI)的影响.方法:应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用生长良好的第2、3代细胞进行试验.同时应用CCK-8测定不同浓度的IL-6(0.125~2.0 ng/ml,实验组)刺激后细胞活性变化... 目的:观察IL-6对脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达组织因子途径抑制物(TFPI)的影响.方法:应用胰酶消化HUVECs并进行传代培养,用生长良好的第2、3代细胞进行试验.同时应用CCK-8测定不同浓度的IL-6(0.125~2.0 ng/ml,实验组)刺激后细胞活性变化,对照组给予培养液;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞内TFPI mRNA水平.结果:与对照组相比,IL-6(0.125~0.5 ng/ml)对细胞活性没有显著影响(P>0.05);IL-6增加到1 ng/ml后,作用12 h后细胞活力开始下降.IL-6(0.5 ng/ml)作用6~24 h显著下调细胞TFPI mRNA表达(P<0.05),6 h时抑制效果最强(TFPI mRNA/GAPDH mRNA均值仅为0.191),以后抑制效应渐减弱,48 h达到正常水平(TFPI mRNA/GAPDH mRNA均值为0.399).结论:提示IL-6(0.5 ng/ml)对HUVECs的活性不造成直接的影响,同时IL-6(0.5 ng/ml)在6~24 h内可抑制HUVECs的TFPI mRNA表达而诱发凝血系统失衡,这可能与急性炎性反应时相的血液凝固和血栓形成有关. 展开更多
关键词 白细胞介素6 组织因子抑制物 脐静脉 内皮细胞 逆转录聚合酶链反应
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应用RTPCR和RFLP分析肾型鸡传染性支气管炎病毒基因型 被引量:7
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作者 何永强 周继勇 +1 位作者 于涟 杜青云 《浙江农业学报》 CSCD 2000年第3期117-120,共4页
对来自浙江省 3个不同地区的肾型鸡传染性支气管炎病毒 (IBV JD ,DQ ,HY)和参考株H12 0 ,通过蛋白酶K SDS处理、酚 氯仿法抽提基因组RNA ,经RT PCR扩增得到了预期为 1.72kb的S1蛋白基因cDNA ,用限制性内切酶HaeIII,PstI,Ksp632I对S1基... 对来自浙江省 3个不同地区的肾型鸡传染性支气管炎病毒 (IBV JD ,DQ ,HY)和参考株H12 0 ,通过蛋白酶K SDS处理、酚 氯仿法抽提基因组RNA ,经RT PCR扩增得到了预期为 1.72kb的S1蛋白基因cDNA ,用限制性内切酶HaeIII,PstI,Ksp632I对S1基因cDNA进行RFLP分析。结果表明JD ,DQ ,HY毒株的RFLP带型相同 ,但与经典的肾型IBV代表株 (即T株、Gray株、Holte株 )以及呼吸型H12 0 均不相同 ,与国内已报道的肾型DL毒株也不同 ,表明浙江省流行的肾型IBV很可能是新的变异株。 展开更多
关键词 RT-PCR RFLP 肾型鸡传染性支气管炎病毒 基因型
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大鼠重度烫伤后早期心肌组织内缺氧诱导因子-1α表达的变化 被引量:5
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作者 党永明 黄跃生 陈丽峰 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 2003年第5期263-266,共4页
目的 观察烫伤大鼠伤后早期心肌组织中缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)mRNA和蛋白的表达变化 ,探讨其意义。 方法 制作 4 0 %TBSAⅢ度烫伤大鼠模型 ,设正常对照组及伤后不同时相组。取心脏解剖左、右心室 ,采用逆转录聚合酶链式反应 (RT P... 目的 观察烫伤大鼠伤后早期心肌组织中缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)mRNA和蛋白的表达变化 ,探讨其意义。 方法 制作 4 0 %TBSAⅢ度烫伤大鼠模型 ,设正常对照组及伤后不同时相组。取心脏解剖左、右心室 ,采用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)法检测HIF 1αmRNA的表达 ,采用蛋白免疫印迹法测定其蛋白水平的变化。 结果 正常大鼠左、右心室肌HIF 1αmRNA、蛋白表达结果有所不同。大鼠烫伤后 ,心肌组织内HIF 1αmRNA水平、蛋白表达量明显升高 (P <0.0 1)。结论 正常状态下 ,大鼠左心室肌对缺血缺氧耐受能力较右心室肌强。严重烫伤可以诱导大鼠心肌细胞HIF 1α表达增加 。 展开更多
关键词 大鼠 重度烫伤 早期 心肌组织 缺氧诱导因子-1Α MRNA表达 蛋白表达
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