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利用mtCOIPCR-RFLP技术鉴定中国境内九个烟粉虱隐种 被引量：19
1
作者 秦丽 王佳 +1 位作者 邴孝利 刘树生 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期186-194,共9页
烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)是一个物种复合体,包括31个以上形态上无法区分的隐种,其中少数隐种是世界性入侵害虫。目前,在中国境内分布有2个入侵隐种和13个土著隐种。快速、高效的鉴别方法对掌握烟粉虱田间发生规律及制定相关防... 烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)是一个物种复合体,包括31个以上形态上无法区分的隐种,其中少数隐种是世界性入侵害虫。目前,在中国境内分布有2个入侵隐种和13个土著隐种。快速、高效的鉴别方法对掌握烟粉虱田间发生规律及制定相关防控策略具有重要意义。然而到目前为止,除了mtCOI基因测序比对外,尚未有一种简便的方法可以有效地区分多个烟粉虱隐种。本研究采用mtCOI PCR-RFLP技术,单独或组合使用TaqI,VspI,Van91I,NcoI和FokI这5种限制性内切酶,酶切烟粉虱mtCOI的PCR扩增片段,鉴别分布在中国境内的9个烟粉虱隐种。结果表明,单独使用TaqI酶切,可鉴别出MEAM1和China1两个隐种,使用TaqI+NcoI分步酶切可鉴定出MED和Asia1两个隐种,使用TaqI+Van91I分步酶切可鉴定出Asia II3和Asia II9两个隐种,使用TaqI+VspI+FokI分步酶切可鉴定出Asia II1,Asia II6和Asia II73个隐种。本研究为高效鉴别中国境内的多个烟粉虱隐种提供了方法。 展开更多
关键词 烟粉虱 隐种 分子鉴定 限制性内切酶 MTCOI PCR—RFLP
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MSRE-qPCR技术分析多基因DNA甲基化对肝细胞癌的诊断价值 被引量：18
2
作者 邱东民 余坚 黄朝晖 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期615-620,共6页
背景与目的:DNA甲基化是潜在的肿瘤标志物。本研究运用自行建立的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法检测肝细胞癌(hepatocellutar carcinoma,HCC)组... 背景与目的:DNA甲基化是潜在的肿瘤标志物。本研究运用自行建立的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法检测肝细胞癌(hepatocellutar carcinoma,HCC)组织中多个基因的DNA甲基化状态,筛选可用于HCC诊断的DNA甲基化标志物组合。方法:以47对HCC患者癌组织和癌旁组织、8例正常人肝组织为材料,运用MSRE-qPCR方法检测这102例肝组织中APC、GSTP1、RASSF1A、p16、SFRP1、RUNX3、Hint1、SOCS1和HIC-1基因的启动子甲基化状态。结果:APC、GSTP1、RASSF1A、p16、SFRP1、RUNX3基因在肿瘤组织中的甲基化率分别为70.2%、70.2%、63.8%、29.8%、44.7%和36.2%,均显著高于对应癌旁组织(P均<0.05);而Hint1、SOCS1和HIC-1基因甲基化水平在HCC肿瘤和癌旁组织间无显著差异。联合检测APC、GSTP1、RASSF1A和SFRP1 4个靶点,可检出所有HCC病例。这些基因的甲基化水平与患者肿瘤大小、分化、包膜及HBV感染等临床病理参数均无显著相关性。结论:联合检测APC、GSTP1、RASSF1A和SFRP1的DNA甲基化状态对于HCC风险评估和分子诊断具有重要价值。 展开更多
关键词 DNA甲基化 限制性内切酶 肝细胞癌 诊断
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鳙鱼线粒体DNA的限制性内切酶图谱 被引量：11
3
作者 樊连春 崔建勋 余其兴 《武汉大学学报（自然科学版）》 CSCD 1994年第1期121-125,共5页
用１１种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＢｃｏＲⅠ、ＨｐａⅠ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ、ＸｈｏⅠ、ＸｂａⅠ）分析鳙鱼的线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ，简称ｍｔＤＮＡ），构建... 用１１种限制性内切酶（ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＢｃｏＲⅠ、ＨｐａⅠ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ、ＸｈｏⅠ、ＸｂａⅠ）分析鳙鱼的线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ，简称ｍｔＤＮＡ），构建了全部１１种酶２２个切点的物理图谱．鳙鱼线粒体ＤＮＡ的分子大小约为１６．４４ｋｂ．酶切位点的分布是非随机的． 展开更多
关键词 鳙鱼 线粒体 DNA 限制性内切酶
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应用PCR-RFLP进行申克孢子丝菌的分子生物学鉴定 被引量：3
4
作者 孔祥明 林俊萍 +1 位作者 王雅坤 陈洪铎 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2004年第12期705-707,共3页
目的　探索一种简单、快速的申克孢子丝菌的鉴定方法。方法　应用真菌通用引物ITS1和ITS4对来源于不同地区及不同临床型别孢子丝菌病的 2 8株申克孢子丝菌以及 9种其他临床上重要的真菌进行PCR扩增 ,利用限制性内切酶HaeⅢ对PCR产物进... 目的　探索一种简单、快速的申克孢子丝菌的鉴定方法。方法　应用真菌通用引物ITS1和ITS4对来源于不同地区及不同临床型别孢子丝菌病的 2 8株申克孢子丝菌以及 9种其他临床上重要的真菌进行PCR扩增 ,利用限制性内切酶HaeⅢ对PCR产物进行酶切分析鉴定。结果　所有 2 8株申克孢子丝菌和其他 9种真菌均扩增出一条约 3 5 0bp的片段 ,其中 2 8株申克孢子丝菌RFLP带型一致 ,与 9种其他临床上重要的真菌RFLP带型差异较明显。 结论　PCR RFLP可以为建立一种简单、快速鉴定申克孢子丝菌的方法提供依据。 展开更多
关键词 申克孢子丝菌 真菌通用引物 限制性内切酶
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限制性酶解大豆蛋白-磷脂乳液特性分析 被引量：8
5
作者 江连洲 王欢 +4 位作者 韩天翔 齐宝坤 王中江 张巧智 李杨 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第3期269-277,共9页
以大豆蛋白(SPI)、卵磷脂为研究对象,采用碱性蛋白酶作为水解大豆蛋白的酶制剂,对大豆蛋白进行酶解试验。用水解得到的低酶解度的大豆蛋白水解物与磷脂制备复合乳液,测定复合乳液的乳化活性、乳化稳定性、ζ-电位、粒径(D43)的变化和光... 以大豆蛋白(SPI)、卵磷脂为研究对象,采用碱性蛋白酶作为水解大豆蛋白的酶制剂,对大豆蛋白进行酶解试验。用水解得到的低酶解度的大豆蛋白水解物与磷脂制备复合乳液,测定复合乳液的乳化活性、乳化稳定性、ζ-电位、粒径(D43)的变化和光学显微镜观察,结果表明:限制性水解后的大豆蛋白-磷脂复合乳液的乳化活性和乳化稳定性明显增强,ζ-电位值增大,乳液乳滴直径减小,其中SPI水解度为3.04%时的样品乳化稳定性最好。过度水解时,复合乳液出现絮凝现象,乳化稳定性较差。 展开更多
关键词 限制性酶解 大豆分离蛋白 卵磷脂 乳化稳定性 ζ-电位
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基于限制性内切酶简化基因组测序的两种主要技术 被引量：7
6
作者 张羽 周婉莹 孙旺 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期3562-3570,共9页
随着二代测序技术的发展,其在基因分型、连锁图谱构建、QTLs定位、系统进化、生物多样性、全基因组关联等生物研究领域中的应用越来越广泛。为了降低测序成本,采用一套简化测序的数据已经能满足大多数生物学研究。本研究主要从基于限制... 随着二代测序技术的发展,其在基因分型、连锁图谱构建、QTLs定位、系统进化、生物多样性、全基因组关联等生物研究领域中的应用越来越广泛。为了降低测序成本,采用一套简化测序的数据已经能满足大多数生物学研究。本研究主要从基于限制性内切酶简化基因组测序的2种主要技术(RAD-seq和GBS)进行介绍,从其原理、测序群体选择、限制性内切酶筛选、测序后数据分析等方面予以阐述。目前,GBS技术以其过程简单且使用甲基化敏感酶回避了基因组重复区域成为了简化测序的主要技术,尤其适合大样本量的研究,可快速鉴定出高密度的变异,加快生物研究的进程。 展开更多
关键词 限制性内切酶 简化基因组 二代测序 数据分析
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三种CRISPR/Cas9基因敲除变异检测方法的比较分析 被引量：6
7
作者 唐国盘 黄安群 +3 位作者 孙志鹏 匡友谊 王胜杰 王大伟 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2019年第2期20-26,共7页
比较三种常用的CRISPR/Cas9基因敲除检测变异方法,从准确性、耗时、成本和应用限制等方面进行评估。采用T7核酸内切酶I、限制性内切酶和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分别对利用CRISPR/Cas9方法敲除的fibinb和ngs基因的50尾斑马鱼(Danio r... 比较三种常用的CRISPR/Cas9基因敲除检测变异方法,从准确性、耗时、成本和应用限制等方面进行评估。采用T7核酸内切酶I、限制性内切酶和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分别对利用CRISPR/Cas9方法敲除的fibinb和ngs基因的50尾斑马鱼(Danio rerio)突变纯合个体和突变杂合个体进行检测,用野生型个体作对照;同时用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对CRISPR/Cas9方法敲除的ogn和ddb1基因的突变杂合个体进行了检测。结果表明:三种方法均能够区分突变杂合个体,其中T7核酸内切酶I检测法耗时最短,但该方法不能用于鉴定突变纯合个体;限制性内切酶检测法能够用于鉴定纯合个体,但需要有特异性的识别位点;非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法能够区分纯合和杂合个体,对序列无依赖性,能够检测出序列中存在的所有变异。成本上,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法最经济;限制性内切酶的价格存在较大的差异,因此检测成本依赖于酶的价格。三种检测方法各有优缺点,在应用实践中可根据试验需要选择合适的方法。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 T7核酸内切酶Ⅰ 限制性内切酶 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 检测
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血浆GSTP1和SFRP1基因甲基化分析在肝细胞癌早期诊断中的价值 被引量：6
8
作者 王丰 华东 +6 位作者 吴玉玉 程之红 胡瑜 谢其根 王琼瑶 杜祥 黄朝晖 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期12-16,共5页
背景与目的:DNA甲基化是一种新的肿瘤诊断及预后判断的标志物。本研究运用自行建立的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法检测血浆GSTP1和SFRP1基因的... 背景与目的:DNA甲基化是一种新的肿瘤诊断及预后判断的标志物。本研究运用自行建立的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法检测血浆GSTP1和SFRP1基因的DNA甲基化状态,探讨其在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)早期诊断中的价值。方法:收集150例血浆标本,包括72例HCC,37例肝良性病变和41名健康对照者。用MSRE-qPCR法检测血浆GSTP1和SFRP1基因DNA甲基化水平。结果:HCC患者血浆GSTP1和SFRP1甲基化阳性率分别为54.2%和27.8%,显著高于健康对照组(9.8%和2.4%,P<0.001)和肝良性病变组(10.8%和5.4%,P<0.001);同时检测血浆GSTP1和SFRP1可检出63.9%的HCC;而联合血清AFP分析可进一步将HCC诊断率提高至73.6%。结论:联合检测血浆GSTP1和SFRP1基因DNA甲基化对于HCC早期非侵入性诊断具有重要价值。 展开更多
关键词 DNA甲基化 限制性内切酶 肝细胞癌 血浆 诊断
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^(60)Co-γ射线辐照玉米种子对基因组DNA分子的影响 被引量：2
9
作者 徐明照 郭宁 +1 位作者 张永凤 刘新元 《激光生物学报》 CAS CSCD 2007年第3期276-278,共3页
以不同剂量的60Co-γ射线辐照玉米种子,对各处理组分单株,采用CTAB抽提法提取幼叶组织基因组DNA,并对基因组DNA进行酶切,研究辐照对基因组DNA分子的损伤效应。结果表明:辐照剂量不同,得到的基因组DNA分子在各处理组间存在差异,当辐照剂... 以不同剂量的60Co-γ射线辐照玉米种子,对各处理组分单株,采用CTAB抽提法提取幼叶组织基因组DNA,并对基因组DNA进行酶切,研究辐照对基因组DNA分子的损伤效应。结果表明:辐照剂量不同,得到的基因组DNA分子在各处理组间存在差异,当辐照剂量>200 Gy时,差异更为明显;辐照不仅能引起DNA分子链的断裂,还能改变核苷酸链上的碱基位置和顺序,使酶切位点发生改变。实验还对同一辐照剂量处理下的不同单株幼叶基因组DNA进行了重复实验,结果是一致的。 展开更多
关键词 ^60Co-γ射线 玉米种子 基因组DNA 限制性酶
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一种野生蘑菇的鉴定 被引量：6
10
作者 王波 郭勇 鲜灵 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期672-675,共4页
采自四川的一种蘑菇(AGCDH111),幼时为灰白色,成熟后浅棕色,担子上着生1个和2个孢子;ITS-PCR、ITS-RFLP、ITS4和ITS5序列分析,结果表明,野生蘑菇的ITS-PCR和ITS-RFLP指纹图谱与双孢蘑菇As2796相同,与双孢蘑菇AS2796的ITS4&5序列同... 采自四川的一种蘑菇(AGCDH111),幼时为灰白色,成熟后浅棕色,担子上着生1个和2个孢子;ITS-PCR、ITS-RFLP、ITS4和ITS5序列分析,结果表明,野生蘑菇的ITS-PCR和ITS-RFLP指纹图谱与双孢蘑菇As2796相同,与双孢蘑菇AS2796的ITS4&5序列同源性为99.09%,鉴定该蘑菇为双孢蘑菇。 展开更多
关键词 野生双孢蘑菇 形态特征 限制性内切酶 DNA序列
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孕妇及新生儿巨细胞病毒感染的聚合酶链反应及限制酶分析 被引量：5
11
作者 俞锡林 尚世强 +2 位作者 洪文澜 余钟声 潘存梅 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期250-252,共3页
目的　建立套式 聚合酶链反应 (Nested PCR)加限制性酶切分析方法检测人巨细胞病毒 (HCMV)。方法　在HCMV直接早期蛋白EcoRIJDNA片段内 ,自行设计两对引物 ,建立Nested PCR检测HCMVDNA ,同时结合病毒分离检测临床标本。结果　 2 3例新... 目的　建立套式 聚合酶链反应 (Nested PCR)加限制性酶切分析方法检测人巨细胞病毒 (HCMV)。方法　在HCMV直接早期蛋白EcoRIJDNA片段内 ,自行设计两对引物 ,建立Nested PCR检测HCMVDNA ,同时结合病毒分离检测临床标本。结果　 2 3例新生儿肝炎综合征患儿中 ,10例病毒分离及Nested PCR均阳性 ;1例病毒分离阴性 ,但Nested PCR阳性。对 5 8例妊娠早期孕妇血标本进行检测 ,Nested PCR阳性率为 9% ,病毒分离阳性率则为 7%。结论　Nested 展开更多
关键词 巨细胞病毒 感染 限制酶 PCR 孕妇 新生儿
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一种新的广适性大白菜杂交种纯度分子鉴定方法的研究 被引量：1
12
作者 魏小春 原玉香 +7 位作者 赵艳艳 王志勇 杨双娟 苏贺楠 董晓冰 李林 姚春玲 张晓伟 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2023年第2期19-28,共10页
以往进行大白菜杂交种分子纯度鉴定,需要基于亲本开发相应的分子标记,有基因型依赖性。笔者以大白菜杂交种基因组DNA为模板,分别基于自交不亲和S单元型多态性开发的BrCⅠ引物、BrCⅡ引物进行PCR扩增,根据扩增产物的电泳结果确定该大白... 以往进行大白菜杂交种分子纯度鉴定,需要基于亲本开发相应的分子标记,有基因型依赖性。笔者以大白菜杂交种基因组DNA为模板,分别基于自交不亲和S单元型多态性开发的BrCⅠ引物、BrCⅡ引物进行PCR扩增,根据扩增产物的电泳结果确定该大白菜商品杂交种纯度;当杂交种亲本分别为Ⅰ类S单元型和Ⅱ类S单元型时,筛选以BrCⅠ和BrCⅡ引物分别扩增后的产物中只有一个出现条带的材料即为假杂种;当亲本同时为Ⅰ类S单元型或Ⅱ类S单元型时,用限制性内切酶Hinf I或Alu I对PCR产物进行酶切,筛选酶切产物中电泳条带的带型显著不一致的材料为假杂种。该方法为一种新的广适性大白菜杂交种纯度分子鉴定方法,利用该方法进行纯度鉴定,整个周期只需2~3 d,快速精准。 展开更多
关键词 大白菜 S单元型 广适性 分子标记 纯度鉴定 酶切
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线粒体脑肌病患者线粒体DNA突变分析 被引量：5
13
作者 张炳峰 王震 牛琦 《医学研究生学报》 CAS 2005年第11期989-991,998,i0009,共5页
目的:分析线粒体脑肌病患者骨骼肌细胞线粒体DNA的突变情况,为疾病诊断提供依据。方法:用常规苏木精-伊红(H-E)、酶组织化学染色和电镜检查等方法对线粒体脑肌病进行诊断,用聚合酶链反应(PCR)/限制性内切酶酶切方法对线粒体脑肌病伴高... 目的:分析线粒体脑肌病患者骨骼肌细胞线粒体DNA的突变情况,为疾病诊断提供依据。方法:用常规苏木精-伊红(H-E)、酶组织化学染色和电镜检查等方法对线粒体脑肌病进行诊断,用聚合酶链反应(PCR)/限制性内切酶酶切方法对线粒体脑肌病伴高乳酸血症和卒中样发作综合征(MELAS)和肌阵挛性癫痫伴肌红纤维断裂综合征(MERRF)的患者进行线粒体基因分析。结果:3例患者均被确诊为线粒体脑肌病,其中例1和例2tRNAleu基因发生A3243G杂合突变,例3发生A8344G杂合突变。结论:线粒体DNA中的tRNA基因突变,是线粒体脑肌病的重要病因之一。 展开更多
关键词 线粒体脑肌病 线粒体DNA 突变分析 限制性内切酶
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血浆Ras相关区域家族蛋白1A基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值 被引量：5
14
作者 费伯健 黄朝晖 +3 位作者 华东 胡瑜 程之红 余坚 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期742-747,共6页
目的:建立一种可检测微量DNA标本中DNA甲基化的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并运用该技术探讨血浆Ras相关区域家族蛋白1A(Ras association dom... 目的:建立一种可检测微量DNA标本中DNA甲基化的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并运用该技术探讨血浆Ras相关区域家族蛋白1A(Ras association domain family1A,RASSF1A)基因甲基化检测在肝细胞癌(hepatocellutar carcinoma,HCC)非侵入性诊断中的价值。方法:用MSRE HhaⅠ消化DNA样品,再用qPCR技术分析酶切结果,建立检测RASSF1A基因甲基化的MSRE-qPCR方法。以45例肝组织(20对HCC患者手术切除肿瘤标本及匹配非癌组织和5例正常肝)为材料,测试该方法的应用价值;运用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulf ite sequencing PCR,BSP)技术进行进一步验证,并与甲基化特异性PCR(methylation specif ic PCR,MSP)方法相比较。再运用该技术检测150例血浆标本(包括72例HCC患者、37例肝硬化或慢性肝炎等良性病变患者和41例健康对照)的RASSF1A基因甲基化状态,并分析其与HCC患者临床病理参数的关系。结果:MSRE-qPCR法可定量检测低至1%以下的RASSF1A甲基化片段。20例HCC组织中有14例(70%)发生RASSF1A高甲基化,对应非癌组织中RASSF1A甲基化阳性率为25%,而5例正常肝组织均为阴性。MSRE-qPCR结果经BSP验证无误,且与MSP检测结果具有较好的一致性。HCC患者血浆RASSF1A甲基化阳性率(47/72,65.3%)显著高于健康对照(1/41,2.4%)和肝良性病变组(3/37,8.1%),差异均有统计学意义(P<0.0001)。联合检测血浆RASSF1A甲基化与血清AFP可显著提高HCC诊断效率。结论:建立的MSRE-qPCR方法要求样本少、操作简便、成本低廉,可定量检测RASSF1A基因甲基化水平。血浆RASSF1A甲基化分析对于HCC的非侵入性诊断具有重要价值。 展开更多
关键词 癌 肝细胞 DNA甲基化 血浆 分子诊断技术 聚合酶链反应 限制性内切酶 Ras相关区域家族蛋白1A
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应用PCR—限制性内切酶技术快速检测副结核分枝杆菌 被引量：4
15
作者 巩红霞 任永宏 巩强 《畜牧兽医杂志》 2006年第4期25-26,28,共3页
根据副结核分枝杆菌的IS900序列,设计相应的引物,建立检测副结核分枝杆菌的PCR技术。利用该方法,可从副结核分枝杆菌中扩增出PCR产物,扩增产物具有高度特异性,长度为388bp,经限制性内切酶Saμ3AI酶切,证实该扩增产物为副结核分枝杆菌的... 根据副结核分枝杆菌的IS900序列,设计相应的引物,建立检测副结核分枝杆菌的PCR技术。利用该方法,可从副结核分枝杆菌中扩增出PCR产物,扩增产物具有高度特异性,长度为388bp,经限制性内切酶Saμ3AI酶切,证实该扩增产物为副结核分枝杆菌的片段。表明此项技术具有快速、敏感和特异性强等特点,通过PCR扩增IS900基因(副结核分枝杆菌独有的基因),可快速的应用于诊断反刍动物的副结核病和乳及乳制品中副结核分枝杆菌的鉴定。 展开更多
关键词 副结核分枝杆菌 聚合酶链反应 限制性内切酶
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人免疫缺陷病毒基因的亚克隆 被引量：4
16
作者 吉昌华 杨立宏 +1 位作者 毛积芳 苏成芝 《第四军医大学学报》 1992年第4期264-267,共4页
艾滋病相关病毒(ARV-2)是目前应用最广的艾滋病毒分离株之一.其基因组大小为9737碱基.为便于研究工作,作者对其进行了亚克隆.用Kpn I消化pARV-2/7A产生4个DNA片段,其中含有env基因和pUC19序列的大片段自身环化,得到亚克隆质粒pJE332.其... 艾滋病相关病毒(ARV-2)是目前应用最广的艾滋病毒分离株之一.其基因组大小为9737碱基.为便于研究工作,作者对其进行了亚克隆.用Kpn I消化pARV-2/7A产生4个DNA片段,其中含有env基因和pUC19序列的大片段自身环化,得到亚克隆质粒pJE332.其余3个片段分别与pUC19连接,得到另3个亚克隆质粒pJG423,pJP 032和pJP163.其中pJG423含有LTR序列、gag基因和部分pol基因,pJp032和pJP163均插入了部分pol基因.这些亚克隆质粒已被用于各项艾滋病研究. 展开更多
关键词 免疫缺陷病毒 基因 亚克隆 质粒
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五例遗传性凝血因子Ⅴ缺陷症的基因分析 被引量：4
17
作者 曹丽娟 王兆钺 +6 位作者 苏燕华 杨海燕 赵小娟 张威 余自强 白霞 阮长耿 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期145-148,共4页
目的分别对5例遗传性凝血因子Ⅴ（FⅤ）缺陷患者进行基因分析和家系调查，鉴定导致FⅤ缺陷症的基因突变。方法采用一期法检测血浆FⅤ活性，ELISA法检测血浆FⅤ的抗原含量，PCR法扩增FⅤ基因的25个外显子及其侧翼序列，DNA测序并与基因... 目的分别对5例遗传性凝血因子Ⅴ（FⅤ）缺陷患者进行基因分析和家系调查，鉴定导致FⅤ缺陷症的基因突变。方法采用一期法检测血浆FⅤ活性，ELISA法检测血浆FⅤ的抗原含量，PCR法扩增FⅤ基因的25个外显子及其侧翼序列，DNA测序并与基因文库比对以确定基因异常，限制性内切酶酶切分析或直接测序患者直系家属及正常人相应的等位基因排除多态性影响。结果5例患者血浆FⅤ活性和抗原含量均明显降低，基因分析共发现6个致病突变，分别为G69969T（G2079V）、C45533T（R712Ter）、C46796T（R1133Ter）、G45366A（C656Y）、C46253T（R952C）及G16088C（068H），后3个是新的突变位点，其中C46253T（R952C）是国际上首次发现的位于B区的错义突变。通过对直系亲属和正常人相应的等位基因进行扩增测序或酶切分析证实了3个新的突变不是基因多态性所致。结论鉴定了5例Ⅰ型遗传性FV缺陷症的基因突变，其中包括2种无义突变和4种错义突变；错义突变导致FⅤ蛋白稳定性降低，引起血浆中FⅤ的含量减少。 展开更多
关键词 因子Ⅴ 出血 聚合酶链反应 限制性内切酶 基因突变
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建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术 被引量：2
18
作者 吕凌 黄仰甦 +2 位作者 姚集鲁 郑锡澄 彭文伟 《中山医科大学学报》 CSCD 1992年第3期44-47,共4页
建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克... 建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克隆HBV DNA模板最小加量为10 fg时,产物作琼脂糖凝胶电泳经溴化乙锭染色在紫外线下观察仍可见428 bp位置的阳性荧光带。阳性产物经BgⅠⅡ酶切后分为125 bp和303 bp的两个特异片段。同一条件下的阴性对照则出现阴性结果。这一技术用以检测经常规DNA提取的127例HBsAg阳性血清,结果HBV DNA检出率达88％,其中HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为97％,抗HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为82％。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 乙型肝炎病毒 DNA
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限制性内切酶分析法对病毒感染性疾病诊断的意义 被引量：2
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作者 张淑芹 王国珍 +2 位作者 刘志屹 孙非 张福明 《中国实验诊断学》 2008年第11期1367-1369,共3页
目的探讨限制性内切酶分析法在病毒感染性疾病诊断中的作用。方法通过对同批次疑似柯萨奇B组病毒感染的病毒性心肌炎及麻疹样发疹的患者血清分别采用RT-PCR法、限制性内切酶分析法进行检测,然后将其结果进行比较分析。结果限制性内切酶... 目的探讨限制性内切酶分析法在病毒感染性疾病诊断中的作用。方法通过对同批次疑似柯萨奇B组病毒感染的病毒性心肌炎及麻疹样发疹的患者血清分别采用RT-PCR法、限制性内切酶分析法进行检测,然后将其结果进行比较分析。结果限制性内切酶分析法的三次检测结果完全一致,较RT-PCR法的检测结果更精确。结论限制性内切酶分析法敏感性高,特异性强,是早期诊断柯萨奇B组病毒性疾病的最为精准的检测方法,并且为其它病毒感染性疾病的诊断提供了理论和实验依据。 展开更多
关键词 限制性内切酶 RT-PCR 病毒性疾病 柯萨奇B组病毒
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应用TD-PCR技术和限制性内切酶技术鉴定猴B病毒
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作者 刘忠华 黄韧 钟翎 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第A19期235-237,共3页
从DNA水平上鉴定猴B病毒,并区别人单纯疱疹病毒(HSV-1);用PCR技术对猴B病毒和HSV-1进行扩增,并用限制性内切酶技术对扩增产物进行酶切,对PCR扩增产物和酶切产物进行电泳;电泳结果显示猴B病毒和HSV-1的PCR扩增产物为128bp,酶切后,B病毒... 从DNA水平上鉴定猴B病毒,并区别人单纯疱疹病毒(HSV-1);用PCR技术对猴B病毒和HSV-1进行扩增,并用限制性内切酶技术对扩增产物进行酶切,对PCR扩增产物和酶切产物进行电泳;电泳结果显示猴B病毒和HSV-1的PCR扩增产物为128bp,酶切后,B病毒能产生72bp和56bp片段,而HSV-1不能产生酶切产物;该方法能较好地鉴定猴B病毒,同时也将有密切抗原关系的HSV-1区分开来。 展开更多
关键词 B病毒 单纯疱疹病毒 聚合酶链反应(PCR) 限制性内切酶技术 降落PCR
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