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题名结核分枝杆菌复活促进因子E的原核表达及纯化
被引量：1
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作者
徐蕾
何永林
李娜
王瑜伟
朱道银
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机构
重庆医科大学微生物学与免疫学教研室
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出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2007年第4期252-255,共4页
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文摘
目的构建结核分枝杆菌复活促进因子E(RpfE)的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化。方法采用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfE基因,双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32a(+)载体连接,转化大肠杆菌Top10。阳性克隆经酶切和DNA测序鉴定正确后,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由T7启动子调控表达RpfE蛋白,并对表达蛋白进行鉴定和纯化。结果双酶切鉴定所切下的片段大小与预期相符,测序结果与文献报道一致。经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,在相对分子质量41000处均可见特异性蛋白条带。经Ni2+-NTA金属螯合层析后,重组蛋白纯度可达90%以上。结论已成功地克隆并构建了RpfE基因的重组表达质粒pET32a(+)-RpfEv,并获得了高纯度的重组蛋白,为以后的深入研究奠定了基础。
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关键词
结核分枝杆菌
复活促进因子E
原核表达
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Keywords
Mycobacterium tuberculosis
resnscitation-promoting factor（rpf）
Prokaryotic expression
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
R378.911
[医药卫生—病原生物学]
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