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临床分离的结核分枝杆菌的耐药性分析 被引量:2
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作者 周庆 方中飞 +2 位作者 沈小英 宋冰 方孝美 《浙江检验医学》 2006年第4期9-11,共3页
目的了解海盐县分离自肺结核病人的结核分枝杆菌耐药基因突变率及耐药情况,以利抗结核治疗中抗菌药物的合理选用。方法对痰涂片阳性的新发初治和复治肺结核病人进行痰结核分枝杆菌培养,阳性菌株采用高、低两种药物浓度,四种抗结核药物... 目的了解海盐县分离自肺结核病人的结核分枝杆菌耐药基因突变率及耐药情况,以利抗结核治疗中抗菌药物的合理选用。方法对痰涂片阳性的新发初治和复治肺结核病人进行痰结核分枝杆菌培养,阳性菌株采用高、低两种药物浓度,四种抗结核药物耐药性测试,同时用实时PCR法对结核分枝杆菌的耐药基因rpoB和katG突变进行检测。结果131例痰培养阳性菌株总耐药率为14.5%,其中初治耐药率7.8%,复治耐药率38.2%,对四种抗结核药物的耐药率依次为异烟肼9.2%,利福平4.6%,链霉素4.6%,乙胺丁醇0.8%。耐药基因检测结果,在初治组中rpoB和katG的突变率为12.7%(13/102)和10.8%(11/102)。复治组中rpoB和katG的突变率为31.0%(9/29)和20.7%(6/29)。结论本地区分离自结核病人的结核分枝杆菌在初始治疗时已存在耐药性,而药物治疗有可能使其耐药性增加。结果表明抗结核治疗前及在治疗过程中对结核分枝杆菌进行耐药性及耐药基因检测很有意义。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐药 耐药基因 实时PCR
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抗同翅目昆虫的相关基因及其转基因抗虫植物研究进展
2
作者 纠敏 刘树生 《中国生物防治》 CSCD 北大核心 2004年第4期228-233,共6页
植物抗虫基因工程为控制害虫的危害提供了新的途径。目前,对同翅目害虫具抗虫活性的基因有三种来源,(1)植物:如植物凝集素基因、番茄抗线虫基因Mi等;(2)微生物:如异戊烯转移酶抗性基因;(3)动物:如来自一些昆虫的蛋白酶抑制素基因。其中... 植物抗虫基因工程为控制害虫的危害提供了新的途径。目前,对同翅目害虫具抗虫活性的基因有三种来源,(1)植物:如植物凝集素基因、番茄抗线虫基因Mi等;(2)微生物:如异戊烯转移酶抗性基因;(3)动物:如来自一些昆虫的蛋白酶抑制素基因。其中一些基因已被成功地转入植物体内,并且获得的转基因抗虫植物对同翅目害虫的生长、发育、繁殖能力等方面都具有一定的抑制作用,表现出这些抗虫基因在防治这类害虫中的应用潜力。雪花莲凝集素可通过人工饲料或转基因作物进入昆虫体内,并通过营养级传递于天敌,进而对天敌造成直接或间接的影响。 展开更多
关键词 同翅目昆虫 抗性基因 转基因植物
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利用抑制差减杂交技术分离马铃薯晚疫病抗性相关基因(英文) 被引量:22
3
作者 田振东 柳俊 谢从华 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第7期597-605,共9页
以晚疫病病原菌混合小种接种处理 4 8h的马铃薯水平抗性材料 (R gene free)叶片为目的材料 ,以未处理材料作为对照 ,用抑制差减杂交技术构建了一个富集晚疫病抗性相关基因的差减文库。应用反向Northern技术对84 0个克隆进行斑点杂交筛... 以晚疫病病原菌混合小种接种处理 4 8h的马铃薯水平抗性材料 (R gene free)叶片为目的材料 ,以未处理材料作为对照 ,用抑制差减杂交技术构建了一个富集晚疫病抗性相关基因的差减文库。应用反向Northern技术对84 0个克隆进行斑点杂交筛选 ,筛选出 15 0个病原诱导后信号明显增强的克隆。 2 6个片段测序结果表明 :部分片段基因功能与抗病性明显相关。 7个差异表达片段与GenBankEST数据库中已有晚疫病原诱导马铃薯叶片得到的EST有很高同源性 (达 95 %~ 10 0 % ) ;部分片段核苷酸或氨基酸序列分别与番茄、烟草、拟南芥等的EST序列或氨基酸序列有较高同源性 ;另有 4个基因片段在GenBankEST数据库中未找到明显的同源序列 ,可能为新发现的基因片段。 展开更多
关键词 马铃薯 晚疫病 抗病相关基因 抑制差减杂交(SSH) 反向Northern斑点杂交
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基于基因特异性标记分析Pm21在中国冬小麦品种(系)中的分布 被引量:14
4
作者 江峥 王琪琳 +5 位作者 吴建辉 薛文波 曾庆东 黄丽丽 康振生 韩德俊 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2078-2087,共10页
【目的】来自小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系的抗病基因Pm21对小麦白粉病具有持久和广谱抗性,开发该基因的特异性标记,分析其在全国冬麦区中的应用情况,为Pm21的合理布局及分子标记辅助选择育种提供理论依据和技术支撑。【方法】根据已克隆的... 【目的】来自小麦-簇毛麦6VS/6AL易位系的抗病基因Pm21对小麦白粉病具有持久和广谱抗性,开发该基因的特异性标记,分析其在全国冬麦区中的应用情况,为Pm21的合理布局及分子标记辅助选择育种提供理论依据和技术支撑。【方法】根据已克隆的与Pm21抗性途径紧密相关的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因Stpk-V的序列(GenBank登录号为HQ864471.1),提取其蛋白序列并利用Pfam软件分析其保守结构域起止位点,在其保守结构域外设计开发特异序列标记WS-1;构建Pm21载体品种92R137和感病品种Avcoet S(AvS)的F2群体,以小麦白粉病菌E09对该群体每个单株进行苗期抗白粉病表型鉴定,同时利用WS-1对F2群体进行分子检测,分析检测表型与抗病表型,以验证WS-1标记的准确性;利用WS-1标记对来自中国不同冬麦区的662份小麦品种(系)进行分子标记检测,分析Pm21在不同麦区小麦品种(系)的分布情况,并将检测到含有Pm21的品种(系)在田间进行抗白粉病鉴定;选取WS-1已检测到及没有检测到Pm21的品种(系)各50份,利用曹爱忠等开发的标记NAU/xibao15902进行PCR扩增,进一步证明WS-1的准确性。【结果】(1)开发的Pm21特异标记WS-1为显性标记,含Pm21的小麦材料在8%非变性聚丙烯酰胺凝胶中扩增出一条大小为949 bp的片段,而不含该基因的小麦材料中无该片段。(2)在包含377个株系的F2群体中,286个单株为抗病,91个单株为感病,抗感比符合3﹕1的分离比例,表明在该群体中Pm21表现为显性单基因,WS-1对F2群体的每个株系的检测结果与抗/感表型完全一致。(3)供试的662份小麦材料中,49份携带Pm21,平均分布频率为7.4%,其中,西南冬麦区中检测到33份,占该区参鉴品种(系)数的34.4%,而北部冬麦区、黄淮冬麦区和长江中下游冬麦区,分别检测到4份、9份和3份,各占该区参鉴品种(系)数的5.3%、3.1%和1.5%。【结论】开发的Pm21特异性标记WS-1可以作为� 展开更多
关键词 小麦 白粉病 PM21 基因特异性标记 抗病基因持久性
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多药耐药相关蛋白及肺耐药蛋白在人直肠癌组织中的表达及临床意义 被引量:7
5
作者 彭向红 冯奉仪 +2 位作者 张伟 赵东兵 吴炳富 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期193-195,共3页
目的 检测多药耐药相关蛋白(MRP) 及肺耐药蛋白(LRP) 在人直肠癌组织中的表达,探讨其与临床分期、分化程度及预后的关系。方法 采用免疫组织化学技术法检测57 例人直肠癌组织中MRP及LRP的表达。结果 57 例人直... 目的 检测多药耐药相关蛋白(MRP) 及肺耐药蛋白(LRP) 在人直肠癌组织中的表达,探讨其与临床分期、分化程度及预后的关系。方法 采用免疫组织化学技术法检测57 例人直肠癌组织中MRP及LRP的表达。结果 57 例人直肠癌组织中可检测到MRP表达者28 例,占49.1 % ;LRP表达者24 例,占42.1 % ;二者同时表达者10 例,占17 .5% ;有MRP或LRP表达者42 例,占73 .7 % ;两蛋白表达阳性率与肿瘤分期、分化程度无显著相关( P> 0 .05) 。MRP表达阳性者术后生存期明显低于该蛋白阴性者( P< 0.05) ,而LRP的表达则与预后无显著相关;两蛋白表达无明显相关性( P> 0.05) 。结论 MRP可能是判断人直肠癌预后的指标之一,对直肠癌患者综合治疗的实施具有指导意义。 展开更多
关键词 直肠肿瘤 MRP 肺耐药蛋白 MDR基因 免疫组织化学
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苏州市食品中单增李斯特菌污染状况及分子特征分析 被引量:6
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作者 朱莉勤 王波 +2 位作者 张宁 邹文燕 王小龙 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第3期972-977,共6页
目的研究2016—2020年苏州市各类食品中单增李斯特菌的污染状况及分子特征。方法将采样食品按WS/T464—2015《食物成分数据表达规范》进行分类,计算各类食品污染率,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和凝胶电泳对毒力... 目的研究2016—2020年苏州市各类食品中单增李斯特菌的污染状况及分子特征。方法将采样食品按WS/T464—2015《食物成分数据表达规范》进行分类,计算各类食品污染率,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和凝胶电泳对毒力基因(inlA、inlB)和耐药相关基因(virR、dltA、dltB、dltC、dltD、mprF)进行检测,通过脉冲场凝胶电泳进行分子分型。结果683件食品中共检出44件阳性样品,总体检出率6.4%。各类食品中以肉类食品的检出率最高(17.2%),肉类食品中以预制肉制品检出率最高(37.2%)。分离的44株单增李斯特菌毒力基因inlA携带率为100.0%,inlB携带率为97.7%,耐药相关基因virR、dltA、dltB、dltC、dltD、mprF的携带率分别为90.9%、100.0%、90.9%、100.0%、95.5%、97.7%。分离株的PFGE型别可分为11个基因型簇,相似度为53.3%~100.0%,有11组100.0%相似度的带型,其中有3组为同一时间,同一地点采集样品所分离菌株。结论苏州市肉类食品特别是预制肉制品单增李斯特菌污染较为严重,而且污染菌株毒力基因和耐药相关基因总体携带率高。PFGE的11种带型中B和E为优势带型,占比40.9%。零售环节存在样品交叉污染单增李斯特菌的风险。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 毒力基因 耐药相关基因 脉冲场凝胶电泳
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低温胁迫下漯麦163的生理生化变化及抗寒基因表达分析 被引量:3
7
作者 曹燕燕 葛昌斌 +5 位作者 廖平安 崔江宽 黄杰 郭春强 王君 卢雯瑩 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1298-1303,共6页
为明确拔节期低温对小麦新品种漯麦163的生理生化以及抗寒基因表达特性的影响,以漯麦163及其母本漯麦6010为材料,于拔节期在人工智能低温室进行低温胁迫,分析低温胁迫对两品种叶片叶绿素含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脯氨酸含量的影... 为明确拔节期低温对小麦新品种漯麦163的生理生化以及抗寒基因表达特性的影响,以漯麦163及其母本漯麦6010为材料,于拔节期在人工智能低温室进行低温胁迫,分析低温胁迫对两品种叶片叶绿素含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脯氨酸含量的影响,并对抗寒相关基因(SOD、WCS120、LEA和P5CS)的表达模式进行分析。结果表明,持续低温胁迫下,两个品种的叶绿素含量均显著下降,SOD活性和脯氨酸含量均呈现先升后降的变化趋势。对抗寒相关基因的表达模式进行分析,发现与对照(低温处理0 d)相比,低温胁迫下,SOD和WCS120基因的表达量在两品种中于处理后不同时间点均显著下降;LEA基因的表达量在漯麦6010中于处理后不同时间点显著下降,而在漯麦163中于低温处理1 d后显著提高;P5CS基因的表达量在漯麦163于低温处理3 d后以及在漯麦6010于低温处理2 d和3 d后均显著提高。结合大田观察,发现漯麦163和漯麦6010均具有较强的耐倒春寒能力,可作为抗寒性亲本种质资源。 展开更多
关键词 小麦 拔节期 抗寒性 生理生化 抗寒基因
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镰刀菌诱导的泸定百合SSH文库构建及抗病相关基因筛选 被引量:7
8
作者 杨嫦丽 王有国 +6 位作者 王祥宁 张艺萍 崔光芬 段青 贾文杰 杜文文 马璐琳 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期2170-2175,共6页
该研究以泸定百合(Lilium sargentiae Wilson)为材料,构建其组培苗经百合尖孢镰刀菌侵染后的叶片SSH文库,从中筛选镰刀菌枯萎病抗病相关基因。从正向SSH文库中随机挑取300个单克隆测序后得到280条ESTs,进行功能比对分析后,除去未知功能... 该研究以泸定百合(Lilium sargentiae Wilson)为材料,构建其组培苗经百合尖孢镰刀菌侵染后的叶片SSH文库,从中筛选镰刀菌枯萎病抗病相关基因。从正向SSH文库中随机挑取300个单克隆测序后得到280条ESTs,进行功能比对分析后,除去未知功能、沉冗蛋白以及无同源序列,得到有功能的ESTs共168条,其功能涉及信号传导、蛋白质合成与代谢、抗病与防御、物质与能量代谢、转录相关等多种途径,其中有31条ESTs与抗病防御相关。从抗病防御相关基因中选取8条ESTs:过氧化氢酶、ATP结合盒转运蛋白(ABC transporter)、Kunitz型胰蛋白酶抑制剂4(Kunitz trypsin inhibitor 4)、丝氨酸乙醛酸氨基转移酶、多聚泛素、脂氧合酶I(Lipoxygenase I)、丝氨酸/苏安酸蛋白激酶(Serine/Threonine-protein kinase)、抗坏血酸过氧化物酶(Arabidopsis thaliana),通过RTPCR对其表达情况进行分析,发现经镰刀菌诱导后均为上调表达,推测它们可能参与了泸定百合镰刀菌枯萎病的抗病反应途径。 展开更多
关键词 泸定百合 镰刀菌枯萎病 SSH文库 抗病基因
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霜霉病菌侵染的黄瓜叶片cDNA文库的构建及抗病相关基因筛选 被引量:6
9
作者 王丽娟 牛德 +1 位作者 孙彩玉 秦智伟 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1775-1782,共8页
以接种黄瓜霜霉病菌的抗病黄瓜品种‘649’的叶片为材料,使用改良SDS法提取总RNA,构建黄瓜叶片全长cDNA文库,得到的原始文库滴度为5.5×106pfu·mL-1,扩增后的文库滴度达6.5×109pfu·mL-1,重组率约为99%,插入片段在0.5... 以接种黄瓜霜霉病菌的抗病黄瓜品种‘649’的叶片为材料,使用改良SDS法提取总RNA,构建黄瓜叶片全长cDNA文库,得到的原始文库滴度为5.5×106pfu·mL-1,扩增后的文库滴度达6.5×109pfu·mL-1,重组率约为99%,插入片段在0.5~2.0kb之间,大多在1.0kb左右。随机选取3360个克隆进行测序,共拼接出2507个unigenes,其中包括211个重叠群(Contigs)和2296个单拷贝EST(Singlets)。生物信息学分析显示:这些unigenes中存在427条与植物防御/抗病相关的基因,其中包括两类抗病基因和细胞程序性死亡相关基因,这些基因的发现为下一步研究黄瓜抗病机理,克隆抗霜霉病相关基因提供了重要的参考。 展开更多
关键词 黄瓜 霜霉菌 RNA提取 cDNA文库 抗病相关基因
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南瓜白粉病研究进展 被引量:5
10
作者 黎豪 龚诗琦 +3 位作者 宋慧娟 楚箫 孙小武 蔡雁平 《中国瓜菜》 CAS 北大核心 2021年第2期8-11,共4页
南瓜白粉病是南瓜作物生产上最主要的病害之一,严重影响南瓜的产量和品质,制约产业的经济效益和瓜农生产积极性。目前,国内外对南瓜白粉病菌研究较少,对南瓜白粉病的防治手段较为单一。笔者过对国内外南瓜白粉病的发病规律、抗白粉病种... 南瓜白粉病是南瓜作物生产上最主要的病害之一,严重影响南瓜的产量和品质,制约产业的经济效益和瓜农生产积极性。目前,国内外对南瓜白粉病菌研究较少,对南瓜白粉病的防治手段较为单一。笔者过对国内外南瓜白粉病的发病规律、抗白粉病种质资源现状、分子生物学研究现状、白粉病防治等方面的研究结果进行综述,以期为南瓜生产和白粉病防治相关研究提供参考。 展开更多
关键词 南瓜 白粉病 抗性相关基因
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正向选择的生物安全标记基因 被引量:3
11
作者 钱方 安利佳 李宪臻 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期115-119,共5页
标记基因的产生方便了植物的转化,随着转基因植物的迅速发展及商品化,人类更关注抗性标记基因的安全性。目前解决的有效途径是发展正向选择系统,使用非抗性的生物安全标记基因,主要包括糖类代谢酶基因(pmi和xylA)、干扰氨基酸代谢酶基因... 标记基因的产生方便了植物的转化,随着转基因植物的迅速发展及商品化,人类更关注抗性标记基因的安全性。目前解决的有效途径是发展正向选择系统,使用非抗性的生物安全标记基因,主要包括糖类代谢酶基因(pmi和xylA)、干扰氨基酸代谢酶基因(ak和dapA)、绿色荧光蛋白基因(gfp)、β-葡萄糖苷酸酶基因(gus)、核糖醇操纵子(rtl)和叶绿素生物合成基因(hemL)等。 展开更多
关键词 转基因植物 抗性标记基因 生物安全 标记基因 正向选择
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水稻抗病相关基因的分离克隆和功能鉴定 被引量:4
12
作者 丁新华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期121-123,共3页
水稻白叶枯病和稻瘟病分别是由白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)引起,是世界水稻生产中的两大重要病害,造成的损失巨大。通过改良水稻自身防御体系来控制病害,是一种既经济又绿色的... 水稻白叶枯病和稻瘟病分别是由白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)引起,是世界水稻生产中的两大重要病害,造成的损失巨大。通过改良水稻自身防御体系来控制病害,是一种既经济又绿色的方法。鉴定水稻抗病相关基因,研究水稻抗病机理对改良水稻有着重要的理论意义和应用前景。植物激素生长素诱导的信号通常被认为能调节植物的生长和发育。本研究报道的水稻基因GH3-8是1个生长素反应基因,在依赖于生长素的发育中发挥功能,同时也调节不依赖于水杨酸和茉莉酸的信号路径的抗病反应。白叶枯病菌诱导水稻至少在被侵染部位合成生长素,而生长素继而诱导水稻大量合成松弛细胞壁的蛋白质——伸展蛋白(α-和β-expansins),破坏细胞壁对病原菌的先天屏障作用,以利病原菌在水稻中生长繁殖。在携带有抗病基因Xa21或Xa26抗病水稻品种中,病原菌引起的水稻感染部位生长素的合成可诱导水稻快速合成IAA酰胺合成酶GH3-8。GH3-8通过催化IAA-氨基酸的合成抑制生长素的作用,从而阻止细胞壁的松弛,增强植物对病原菌的自身免疫功能。超量表达GH3-8基因增强水稻对白叶枯菌的抗性,同时也延缓了植株的生长和发育,至少部分抑制了生长素信号,从而抑制了α-和β-expansins的合成。本研究结果揭示了病原菌利用生长素作为毒性因子侵染水稻的机理以及水稻应对这一毒性因子的调控途径,同时也从一个方面解释了植物在抗病反应中通常要付出生长被抑制的代价的原因。超量表达GH3-8导致植株不育。通过正反交试验显示GH3-8超量表达植株是雄性和雌性都不育。通过形态学观察发现,GH3-8超量表达植株的雌蕊柱头发育不正常;通过激光共聚焦显微镜对雌蕊胚囊观察发现,GH3-超量表达植株的成熟胚囊发育不� 展开更多
关键词 水稻 白叶枯病 稻瘟病 抗病相关基因 生长素 水杨酸 茉莉酸 基础抗性 伸展蛋白 GH3—8 维生系B1 类病斑突变体 凋亡
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渭河杨凌段水系中头孢曲松耐药菌和耐药基因 被引量:4
13
作者 刘浩宇 朱瑜 +2 位作者 王惠芝 盛焕精 杨保伟 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第7期3087-3096,共10页
调研了杨凌抗生素使用和过期抗生素处理情况,研究了渭河杨凌段及其在杨凌境内主要支流中耐药菌(主要为耐头孢曲松细菌)及常见耐药基因的分布特征.杨凌区β-内酰胺类药物占抗生素总用量的55.0%,64.0%的过期抗生素被合理处理;水样中耐头... 调研了杨凌抗生素使用和过期抗生素处理情况,研究了渭河杨凌段及其在杨凌境内主要支流中耐药菌(主要为耐头孢曲松细菌)及常见耐药基因的分布特征.杨凌区β-内酰胺类药物占抗生素总用量的55.0%,64.0%的过期抗生素被合理处理;水样中耐头孢曲松细菌平均浓度均大于500CFU/mL,分离到5种气单胞菌(n=44)和1株大肠杆菌;45株(100.0%)菌全部耐受氨苄西林,阿莫西林/克拉维酸和头孢曲松,多重耐药率为95.6%;水样总DNA中ampC,sul1,sul2,sul3,tetB,tetC,tetM,aadA,cmlA,catA,blaTEM,blaNDM,aph(2’)-Id和aac(6’)-Ib检出率均为100.0%,15株耐头孢曲松代表菌中ampC与blaTEM检出率均为100.0%.渭河杨凌段及其主要支流中多重耐药细菌检出率较高,耐药基因多样化.研究可为杨凌区水体中耐药菌污染治理提供参考. 展开更多
关键词 渭河 耐药菌 耐药基因 分布特征
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奶牛乳房炎抗性候选基因的研究进展 被引量:4
14
作者 张婧敏 陈宏 +3 位作者 张春雷 杜毓 石秀英 房兴堂 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期43-46,共4页
乳房炎是奶业生产中的一种常见病,发病率很高,每年给世界各国奶牛饲养者造成严重的经济损失。乳房炎的影响因素很多,但遗传因素对其起着重要作用。综述了乳铁蛋白基因、MHC/BoLA基因、ToLL样受体家族基因、趋化性细胞因子受体基因、牛... 乳房炎是奶业生产中的一种常见病,发病率很高,每年给世界各国奶牛饲养者造成严重的经济损失。乳房炎的影响因素很多,但遗传因素对其起着重要作用。综述了乳铁蛋白基因、MHC/BoLA基因、ToLL样受体家族基因、趋化性细胞因子受体基因、牛锌指蛋白313基因、β-防御素基因和热休克蛋白70基因等奶牛乳房炎抗性候选基因的研究现状。 展开更多
关键词 奶牛 乳房炎 抗性 候选基因
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利用差异显示技术克隆小麦抗白粉病相关基因的研究 被引量:2
15
作者 孔凡晶 陈孝 +1 位作者 马有志 辛志勇 《麦类作物学报》 CAS CSCD 2004年第1期11-14,共4页
对小麦—簇毛麦抗病易位系进行差异显示分析,以期获得小麦抗白粉病基因的分子克隆。根据已克隆植物抗病基因的保守域,设计了简并引物,与锚定引物组合,对抗病诱导的小麦抗白粉病易位系进行了差异显示分析,共获得10个差异片段,其中两个片... 对小麦—簇毛麦抗病易位系进行差异显示分析,以期获得小麦抗白粉病基因的分子克隆。根据已克隆植物抗病基因的保守域,设计了简并引物,与锚定引物组合,对抗病诱导的小麦抗白粉病易位系进行了差异显示分析,共获得10个差异片段,其中两个片段R3-1和8C1.3-6Northern杂交为阳性。将这两个片段克隆后进行了测序,序列分析结果为两个新序列,GenBank登录号分别为AF498271和AF498272。R3-1没有发现同源性较高的植物基因序列,发现8C1.3-6与Sphenostylisstenocarpa 类几丁质酶基因有同源性。 展开更多
关键词 小麦 白粉病 抗病基因 差异显示技术 分子克隆 简并引物
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DNA Markers for Selection of Late Blight Resistant Potato Breeding Lines 被引量:1
16
作者 Shaohua Chen Tudor Borza +4 位作者 Bohyun Byun Robert Coffin Joyce Coffin Rick Peters Gefu Wang-Pruski 《American Journal of Plant Sciences》 2017年第6期1197-1209,共13页
Potato late blight, caused by the oomycete Phytophthora infestans, is one of the most devastating diseases in the agricultural sector around the world. Many genes (R genes) conferring resistance to late blight have be... Potato late blight, caused by the oomycete Phytophthora infestans, is one of the most devastating diseases in the agricultural sector around the world. Many genes (R genes) conferring resistance to late blight have been identified in various potato species and most of these R genes have been used in potato breeding. The aim of this study was to develop and validate PCR-based assays for the R genes Rpi-blb1, Rpi-blb2, Rpi-blb3 and Rpi-bt1, to distinguish between late blight resistant and late blight susceptible potato progeny in the given breeding background. A total of 100 breeding progeny were screened for the presence of these R genes and tested for resistance against P. infestans mating type A2, genotype US-8 strain, using detached leaf and tuber rot assays. PCR products for the Rpi-blb1 and Rpi-bt1 resistance genes were identified in the resistant progeny but were absent in the susceptible ones;therefore these PCR assays could differentiate between late blight resistant and susceptible plants. Genotypic data from the DNA markers derived from the Rpi-blb1 and Rpi-bt1 genes was found to correlate with the phenotypic data for foliar late blight but not with data for tuber rot. Our results demonstrate that markers derived from these two R genes could be useful for marker-assisted selection (MAS) for foliar late blight resistance in potato breeding programs. 展开更多
关键词 LATE Blight PHYTOPHTHORA INFESTANS resistance R genes DNA MARKERS
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淡色库蚊抗药性相关基因NYD-Ch和NYD-Tr的表达与初步鉴定 被引量:1
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作者 李秀兰 杨明夏 +4 位作者 胡莺 沈波 马磊 公茂庆 朱昌亮 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2003年第6期325-328,共4页
目的 淡色库蚊抗药性相关基因NYD Ch(糜蛋白酶 )和NYD Tr(胰蛋白酶 )表达与鉴定。 方法 以淡色库蚊抗性品系全长cDNA文库为模板 ,采用PCR方法扩增出抗性品系中高表达的NYD Ch和NYD Tr基因 ,经T/A克隆测序鉴定 ,将扩增产物用NotI、Ec... 目的 淡色库蚊抗药性相关基因NYD Ch(糜蛋白酶 )和NYD Tr(胰蛋白酶 )表达与鉴定。 方法 以淡色库蚊抗性品系全长cDNA文库为模板 ,采用PCR方法扩增出抗性品系中高表达的NYD Ch和NYD Tr基因 ,经T/A克隆测序鉴定 ,将扩增产物用NotI、EcoRI双酶切后作为插入片段 ,与具有相同粘性末端的融合表达质粒 pET 2 8a(+ )连接 ,转化入表达菌株E .coliBL2 1中 ,取含重组表达质粒的重组菌株以IPTG进行诱导表达 ,表达产物以SDS PAGE电泳和小鼠抗NYD Ch和NYD Tr抗血清进行Westernblot分析鉴定。 结果 NYD Ch和NYD Tr基因开读框大小分别为816bp和 786bp ,预计可分别编码 2 72个和 2 62个氨基酸。对应分子质量大小分别为 2 9.4ku和 2 8ku ,加上pET 2 8a(+ )载体融合部分氨基酸 ,表达产物条带应在 3 3ku附近 ,与SDS PAGE蛋白电泳胶上蛋白条带一致。Westernblot分析确认诱导后的 pET 2 8a(+ ) /NYD Ch和 pET 2 8a(+ ) /NYD Tr在分子质量约 3 3ku处出现 1条与小鼠抗NYD Ch和NYD Tr抗血清特异反应的条带。 结论 NYD Ch和NYD Tr基因在大肠杆菌中获得表达 ,Westernblot分析表明该蛋白为目的蛋白。 展开更多
关键词 淡色库蚊 抗药性 基因表达 NYD-Ch NYD-Tr 克隆 WESTERN BLOT 公共卫生
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泸定百合镰刀菌枯萎病抗性相关基因的筛选与克隆 被引量:1
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作者 马璐琳 张艺萍 +4 位作者 崔光芬 段青 贾文杰 杜文文 王祥宁 《农业科技与信息(现代园林)》 2015年第4期276-277,共2页
本研究以泸定百合(Lilium Sargentiae Wilson)为材料,构建其组培苗经百合尖孢镰刀菌侵染后的叶片SSH文库,从中筛选镰刀菌枯萎病抗病相关基因。从正向SSH文库中随机挑取300个单克隆测序后得到280条ESTs,进行功能比对分析后,除去未知功能... 本研究以泸定百合(Lilium Sargentiae Wilson)为材料,构建其组培苗经百合尖孢镰刀菌侵染后的叶片SSH文库,从中筛选镰刀菌枯萎病抗病相关基因。从正向SSH文库中随机挑取300个单克隆测序后得到280条ESTs,进行功能比对分析后,除去未知功能、沉冗蛋白以及无同源序列,得到有功能的ESTs共168条,其功能涉及信号传导、蛋白质合成与代谢、抗病与防御、物质与能量代谢、转录相关等多种途径,其中有31条ESTs与抗病防御相关。从抗病防御相关基因中选取8条ESTs:过氧化氢酶(Catalase)、ATP 结合盒转运蛋白(ABC transporter)、Kunitz型胰蛋白酶抑制剂4(Kunitz trypsin inhibitor 4)、丝氨酸乙醛酸氨基转移酶(Serine-glyoxylate aminotransferase)、多聚泛素(Polyubiquitin)、脂氧合酶I(Lipoxygenase I)、丝氨酸/苏安酸蛋白激酶(Serine/Threonine-protein kinase )、抗坏血酸过氧化物酶(Arabidopsis thaliana),通过RT-PCR对其表达情况进行分析,发现经镰刀菌诱导后均为上调表达,推测它们可能参与了泸定百合镰刀菌枯萎病的抗病反应途径。根据半定量结果,选择过氧化氢酶(CAT)基因,通过RT-PCR结合RACE技术对其进行克隆,最终得到了一条长为1743bp的CAT基因全长c DNA序列,命名为Ls-Cat。序列比对分析发现该基因具有CAT基因家族的序列特征,其酶活性位点在54位氨基酸,包含过氧化氢酶近血红素配体区,C端具有Ser-Arg-Leu序列(SRL)和较保守的三肽序列(QKL),这些序列特征可能与过氧化氢酶基因的抗性作用相关;该基因与多种植物的CAT基因具有高度的同源性,与荷花和陆地棉的同源性达91%,与贯叶连翘的同源性为90%,与彩椒和人参的同源性为89%,与马蹄莲和烟草的同源性分别是88%和87%,与红掌和银杏的同源性分别为77%和73%。Ls-Cat基因在23个对镰刀菌表现不同抗感的百合品种中进行 PCR扩增结果发现:该基因扩增特异性条带在不同抗感品种中存在一定� 展开更多
关键词 泸定百合 镰刀菌枯萎病 SSH文库 抗病基因 CAT基因
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杭州库蚊复组抗性相关酯酶Est-β1~1、Est-β2基因序列测定与分析 被引量:1
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作者 于新芬 潘劲草 +3 位作者 叶榕 寇宇 催峰 乔传令 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1001-1003,共3页
目的了解杭州市库蚊复组抗性相关酯酶Est-β11和Est-β2基因序列,及其与标准抗性系序列的差异及变化情况。方法采集杭州市区库蚊,提取单个蚊虫基因组DNA,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测酯酶等位基因。然后分... 目的了解杭州市库蚊复组抗性相关酯酶Est-β11和Est-β2基因序列,及其与标准抗性系序列的差异及变化情况。方法采集杭州市区库蚊,提取单个蚊虫基因组DNA,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测酯酶等位基因。然后分别对相应酶型的PCR产物进行纯化、克隆、序列测定及分析。结果PCR扩增出860bp目的条带。用限制性内切酶酶切确定酯酶酶型(Est-β11、Est-β2)。测序结果与标准系之间各自一致性分别为100%和97.8%以上。结论杭州市库蚊复组抗性酯酶Es-β11、Est-β2测序和同源性分析表明它们与标准抗性系比对具有较高的同源性,提示这些酯酶Est-β基因序列高度保守,不易发生变异,有共同的起源。 展开更多
关键词 库蚊 抗性基因 酯酶Est-β1^1和Est-β2 序列分析
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喉癌耐药细胞株Hep-2/5-Fu的建立及其差异表达基因的筛选 被引量:1
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作者 陈婕 王家东 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第24期1130-1133,共4页
目的:建立喉癌细胞耐药模型Hep-2/5-Fu并初步筛选可能的耐药相关基因。方法:采用5-Fu大剂量浓度逐渐递增间歇给药的方法建立人喉癌耐药细胞Hep-2/5-Fu,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线:用MTT法鉴定其耐药性并计算耐药指数(RI);用基因... 目的:建立喉癌细胞耐药模型Hep-2/5-Fu并初步筛选可能的耐药相关基因。方法:采用5-Fu大剂量浓度逐渐递增间歇给药的方法建立人喉癌耐药细胞Hep-2/5-Fu,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线:用MTT法鉴定其耐药性并计算耐药指数(RI);用基因芯片技术检测耐药细胞株Hep-2/5-Fu与其亲本细胞株Hep-2中的差异表达基因,从中筛选出可能的耐药相关基因;用半定量RT-PCR法进行验证。结果:Hep-2/5-Fu细胞与Hep-2细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大,并对顺铂及长春新碱有不同程度的交叉耐药性。通过基因芯片筛选出差异表达基因1210个,可能的耐药相关基因包括Cyclin D、IGF-BP3、CASP9、CDK4/6,其中Cyclin D在Hep-2/5-Fu中的表达是亲本细胞的6.599 7倍。结论:Hep-2/5-Fu细胞株耐药性稳定,耐药机制可能与Cyclin D等耐药相关基因有关。 展开更多
关键词 喉肿瘤 耐药相关基因 5-氟尿嘧啶 HEP-2 5-Fu细胞株 MTT法 基因芯片 逆转录-聚合酶链反应
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