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多耐鲍曼不动杆菌分子流行病学分析 被引量：6
1
作者 谭红丽 程雪琴 +3 位作者 王勇 黄艳梅 刘炜 张丽娟 《疾病监测》 CAS 2015年第1期8-13,共6页
目的分析云南省第三人民医院鲍曼不动杆菌分离株耐药表型及耐药基因分子流行病学特征。方法2013年6-9月,分离该院不同重症监护室(ICU)院内感染患者鲍曼不动杆菌28株,全自动微生物分析仪分类鉴定及耐药分析。PCR扩增及测序β-内酰胺酶、... 目的分析云南省第三人民医院鲍曼不动杆菌分离株耐药表型及耐药基因分子流行病学特征。方法2013年6-9月,分离该院不同重症监护室(ICU)院内感染患者鲍曼不动杆菌28株,全自动微生物分析仪分类鉴定及耐药分析。PCR扩增及测序β-内酰胺酶、氟喹诺酮类及氨基糖苷类等抗性基因及IS插入元件及整合子等。结果 78.6%菌株为多药耐药菌,14.3%菌株为广泛耐药菌,7.1%的菌株为泛耐药菌。100%菌株不仅对一代/二代头孢类抗生素耐药,且对三代/四代抗生素CRO、CAZ、FEP及单环β-内酰胺类(ATM)、氟喹诺酮类(CIP、LEV)、氨基糖苷类(AN)及磺胺类(FD)耐药。特别是92.9%菌株对碳青霉烯类抗生素耐药。质粒介导的D类β-内酰胺类抗性基因blaOXA、氟喹诺酮类[aac(6’)-Ib-cr、qnr A及qnr D]及氨基糖苷类(aac A4、aad A1及aac C2)为主要基因型。100%菌株复合携带blaOXA、aac(6’)-Ib-cr及aac A4等抗性基因及整合酶int 1基因。85.7%菌株携带ISCR1。全部菌株为同一脉冲场凝胶电泳(PFGE)克隆群,且多位点序列分型(MLST)优势基因型为ST2。结论云南昆明第三人民医院ICU病房可能存在ST2多耐产碳青霉烯酶A.baumanni院内感染流行,有必要进行进一步流行病学及临床深入调查。防控措施及合理使用抗生素是当地医院当务之急。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 多重耐药 耐药基因 分子流行病学
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基于BSR-Seq分析筛选Y1499条锈病抗性相关基因
2
作者 蒋雯婷 王光浩 +3 位作者 郭欢 黄晨曦 张宏 吉万全 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期577-584,共8页
条锈病是危害小麦生产安全的重要病害之一,而携带不同抗病基因小麦品种的利用与合理布局是降低病害威胁最经济可靠的途径。为挖掘和丰富小麦条锈病抗性相关基因资源,本研究以筛选到的抗条锈病硬粒小麦种质Y1499和感病材料Gaza为亲本构... 条锈病是危害小麦生产安全的重要病害之一,而携带不同抗病基因小麦品种的利用与合理布局是降低病害威胁最经济可靠的途径。为挖掘和丰富小麦条锈病抗性相关基因资源,本研究以筛选到的抗条锈病硬粒小麦种质Y1499和感病材料Gaza为亲本构建遗传群体,在室内对其进行苗期抗性鉴定和统计分析;利用衍生后代中选择的F 3∶4群体构建混池,进行RNA测序,对测序数据进行相关分析。结果表明,Y1499对CYR32的抗性由两个主效基因互补遗传控制。利用BSR-Seq关联分析在鉴定到3个小麦材料Y1499中条锈病抗性基因候选区间。GO富集结果显示,F 3∶4抗感池间差异表达基因涉及多个过氧化物酶等抗氧化反应相关基因。KEGG富集结果表明,显著差异表达基因主要富集于谷胱甘肽代谢和苯丙烷类生物合成等代谢通路。 展开更多
关键词 硬粒小麦 条锈病 BSR-Seq 抗病相关基因
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牛TLR4基因生物信息学分析 被引量：4
3
作者 米小梅 李子元 李耀东 《中国奶牛》 2021年第4期1-5,共5页
为了更加深入地了解牛TLR4基因的功能、结构及与该基因有关联的疾病识别及其致病机理,利用牛TLR4基因的氨基酸序列对其编码蛋白的基本理化性质、蛋白质译后的磷酸化位点和糖基化位点以及跨膜结构域和蛋白质结构进行预测。结果显示,牛TLR... 为了更加深入地了解牛TLR4基因的功能、结构及与该基因有关联的疾病识别及其致病机理,利用牛TLR4基因的氨基酸序列对其编码蛋白的基本理化性质、蛋白质译后的磷酸化位点和糖基化位点以及跨膜结构域和蛋白质结构进行预测。结果显示,牛TLR4基因一共编码841个氨基酸,负电荷残基总和(Asp+Glu)为84,正电荷残基总和(Arg+Lys)为76,不稳定指数小于40,表明该基因编码产物稳定性较好。在该基因整个编码产物中,亲水氨基酸占比较多,平均分值为-0.011,由此得知TLR4基因编码的蛋白质是一种易溶蛋白。有9个潜在的N-糖基化位点;78个磷酸化位点以及存在一个跨膜蛋白和存在信号肽,其切割位点在第25和第26个氨基酸之间。蛋白质的二、三级结构预测结果显示,二级结构和三级结构均由α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲组成,其在生物合成、基因表达与调控等方面有重要作用。本研究结果可为牛TLR4基因深入研究提供理论基础。 展开更多
关键词 牛 抗性 TLR4基因 生物信息学
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肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因的克隆与鉴定 被引量：11
4
作者 陈杰 钱桂生 +2 位作者 黄桂君 熊玮 李靖 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期348-353,共6页
目的：克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因。方法：将肺腺癌多药耐药细胞（ SPC- A- 1/CDDP）作为实验方，肺腺癌细胞（ SPC- A- 1）作为对照方，应用抑制消减杂交技术，构建实验方特异表达 cDNA消减文库；用斑点杂交法初步筛选 ... 目的：克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因。方法：将肺腺癌多药耐药细胞（ SPC- A- 1/CDDP）作为实验方，肺腺癌细胞（ SPC- A- 1）作为对照方，应用抑制消减杂交技术，构建实验方特异表达 cDNA消减文库；用斑点杂交法初步筛选 cDNA消减文库后，将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析（ Genbank），对新的 cDNA序列进行 Northern blot杂交验证。结果：建立了一个肺腺癌多药耐药细胞（ SPC- A- 1/CDDP）特异表达 cDNA消减文库，斑点杂交法初步筛选显示 23个克隆中有 SPC- A- 1/CDDP特异表达 cDNA片断，测序和同源性分析表明 2个 cDNA片断为新序列，其余 cDNA片断与已知基因有 93％～ 100％的同源性， Northern blot杂交结果表明 2个新的 cDNA片断来自 SPC- A- 1/CDDP细胞。结论： 2个新的 cDNA序列可能为未知肺腺癌多药耐药相关基因序列；抑制消减杂交法是克隆特异表达基因的有效方法。 展开更多
关键词 人肺腺癌细胞 多药耐药相关基因 抑制消减杂交 克隆
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应用抑制消减杂交(SSH)克隆肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因 被引量：8
5
作者 陈杰 钱桂生 +3 位作者 黄桂君 熊玮 李靖 LI Jing 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期131-134,共4页
目的　克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因。方法　将肺腺癌多药耐药细胞 (SPC A 1/CDDP)作为实验组 ,肺腺癌细胞 (SPC A 1)作为对照组 ,应用抑制消减杂交技术 ,构建实验组特异表达cDNA消减文库 ;用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库... 目的　克隆和筛选肺腺癌多药耐药细胞特异表达基因。方法　将肺腺癌多药耐药细胞 (SPC A 1/CDDP)作为实验组 ,肺腺癌细胞 (SPC A 1)作为对照组 ,应用抑制消减杂交技术 ,构建实验组特异表达cDNA消减文库 ;用斑点杂交初步筛选cDNA消减文库后 ,将获得的阳性克隆进行测序和同源性分析 (Genebank)。结果　建立了一个肺腺癌多药耐药细胞 (SPC A 1/CDDP)特异表达cDNA消减文库 ,斑点杂交初步筛选显示 2 3个克隆中有SPC A 1/CDDP特异表达cDNA片断 ,测序和同源性分析表明 2个cDNA片断为新序列 ,其余cDNA片断与已知基因有 96%～ 10 0 %的同源性。结论　 2个新的cDNA序列可能为未知肺腺癌多药耐药相关基因序列 ;抑制消减杂交是克隆特异表达基因的有效方法。 展开更多
关键词 人肺腺癌细胞 多药耐药相关基因 抑制消减杂交 SSH
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低温胁迫下鹅掌楸抗寒性相关基因的差异表达分析 被引量：8
6
作者 陆畅 李斌 郑勇奇 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期25-31,共7页
对4℃和-30℃低温条件下引种自安徽大别山的1株鹅掌楸〔Liriodendron chinense（Hemsl.）Sarg.〕植株顶芽总RNA进行了数字基因表达谱构建和差异表达基因筛选,并对筛选出的抗寒性相关基因进行了实时荧光定量PCR分析。结果表明：获得的总... 对4℃和-30℃低温条件下引种自安徽大别山的1株鹅掌楸〔Liriodendron chinense（Hemsl.）Sarg.〕植株顶芽总RNA进行了数字基因表达谱构建和差异表达基因筛选,并对筛选出的抗寒性相关基因进行了实时荧光定量PCR分析。结果表明：获得的总RNA样品质量符合实验要求。数字基因表达谱分析结果表明：每个样品的质量控制后序列的总长度均在0.5 Gbp以上,碱基错误率为0.01%,Q20值超过99%,Q30值为96.99%~97.23%,GC含量为44.97%~47.06%,并且每个样品比对成功的序列条数占质量控制后序列总数的百分率均在90%以上。差异表达基因筛选结果显示：共发现9个与鹅掌楸抗寒性有关的差异表达基因,分别为HSP、MYB、NAC、AP2、Zinc finger、WRKY、FAD、Phospholipase和β-amylase基因。实时荧光定量PCR分析结果表明这9个基因共有3种表达模式,其中,HSP和FAD基因的相对表达量均随着温度的降低而减少,表现为基因下调表达;AP2、NAC和Zinc finger基因的相对表达量随着温度的降低而增多,表现为基因上调表达;而β-amylase、WRKY、Phospholipase和MYB基因的相对表达量则表现为4℃时增加、-30℃时减少。从基因的相对表达量来看,最大相对表达量超过5的基因有NAC和WRKY,介于2~5之间的基因有AP2、Zinc finger、β-amylase和MYB,低于2的基因有Phospholipase、HSP和FAD。结果显示NAC和WRKY基因可能在鹅掌楸的抗寒过程中起主要作用。 展开更多
关键词 鹅掌楸 低温胁迫 抗寒性相关基因 数字基因表达谱 差异表达基因 相对表达量
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中华蜜蜂重要生物学特性相关功能基因研究进展 被引量：6
7
作者 孟飞 胥保华 郭兴启 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期1338-1344,共7页
中华蜜蜂Apis cerana cerana Fabricisus是一种重要的经济动物,具有嗅觉敏锐,抗寒耐热,抗螨及采集能力强等特点。目前人们采用分子生物学的方法,对中华蜜蜂的基因组成、基因表达调控及基因功能分析等方面开展研究,揭示其特征行为的分子... 中华蜜蜂Apis cerana cerana Fabricisus是一种重要的经济动物,具有嗅觉敏锐,抗寒耐热,抗螨及采集能力强等特点。目前人们采用分子生物学的方法,对中华蜜蜂的基因组成、基因表达调控及基因功能分析等方面开展研究,揭示其特征行为的分子机理已成为该领域的研究热点之一。近年来,中华蜜蜂重要生物学特征功能相关基因(即蜂王浆蛋白相关基因、化学通讯相关蛋白基因和抗逆相关基因)在基因克隆、表达特性及功能研究等方面取得了重大进展。本文重点对此进行综述。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 重要生物学特征功能基因 蜂王浆蛋白相关基因 化学通讯相关蛋白基因 抗逆相关基因
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发菜RNA-seq转录组分析及耐旱相关基因筛选 被引量：7
8
作者 梁文裕 杨佳 +3 位作者 王玲霞 王淑萍 刘阳 吴诗杰 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期3783-3794,共12页
发菜是一种陆生耐旱固氮蓝藻,具有重要的生态和资源价值,但目前发菜的基因组和转录组信息还比较缺乏。本研究采用Illumina Hi Seq TM 2500高通量测序平台对充分吸水和失水后的发菜藻体进行转录组分析,经过拼接组装共获得30 013 560条cle... 发菜是一种陆生耐旱固氮蓝藻,具有重要的生态和资源价值,但目前发菜的基因组和转录组信息还比较缺乏。本研究采用Illumina Hi Seq TM 2500高通量测序平台对充分吸水和失水后的发菜藻体进行转录组分析,经过拼接组装共获得30 013 560条clean reads,3 100个Unigene,序列平均长度854 nt。将Unigene序列与NR、NT、Swiss-Port、PFAM、GO、COG、KEGG(E-value<1.0E^(-5))等数据库进行比对,共有2 874个Unigene获得了注释。通过GO功能分类,917个Unigene映射到GO不同功能节点上;通过Unigene与COG数据库的比对,可将有COG功能的514个Unigene分为20类;通过KEGG pathway分析,有1 220个编码基因参与了135条已知的代谢通路。提示谷胱甘肽、类胡萝卜素、淀粉和蔗糖、ABC转运体等代谢途径的部分基因在失水藻体上调表达,说明这些通路与发菜耐旱性关系密切。因此这些注释信息为今后发菜耐旱基因的挖掘提供了重要依据,同时也为发菜分子生物学的进一步研究提供了试验基础。 展开更多
关键词 发菜 转录组 RNA-SEQ 基因注释 耐旱基因筛选
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覆雪对不同秋眠型紫花苜蓿生理特性及抗寒基因表达的影响 被引量：7
9
作者 苏力合 张凡凡 +5 位作者 王旭哲 宋磊 齐江姣 俞雪 贺婷婷 马春晖 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2021年第5期18-26,共9页
为明确田间覆雪对不同秋眠型紫花苜蓿生理特性及抗寒基因表达的影响,选择秋眠型紫花苜蓿肇东(1级)、半秋眠型紫花苜蓿Archer(5级)及非秋眠型紫花苜蓿WL903(9级),测定越冬期间苜蓿的越冬率、根部渗透调节物质(可溶性糖、脯氨酸)含量、抗... 为明确田间覆雪对不同秋眠型紫花苜蓿生理特性及抗寒基因表达的影响,选择秋眠型紫花苜蓿肇东(1级)、半秋眠型紫花苜蓿Archer(5级)及非秋眠型紫花苜蓿WL903(9级),测定越冬期间苜蓿的越冬率、根部渗透调节物质(可溶性糖、脯氨酸)含量、抗氧化物酶(超氧化物歧化酶、过氧化物酶)活性以及抗寒相关基因(CAS 15A、DREB1、NAC3)表达。结果表明:冬季积雪可提高不同秋眠级紫花苜蓿的越冬率。覆雪状态下紫花苜蓿主根可溶性糖和脯氨酸含量、以及超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性均高于不覆雪状态;紫花苜蓿DREB1基因的表达量在秋眠型苜蓿(肇东)中最高,CAS15A和NAC3基因的表达量在半秋眠型苜蓿(Archer)中最高。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 秋眠级 抗寒基因
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多药耐药基因和多药耐药相关蛋白基因在食管、贲门癌中的表达 被引量：3
10
作者 王延明 王爱民 +4 位作者 王艳军 李险波 陈洁 臧玉林 张国平 《中国胸心血管外科临床杂志》 CAS 2000年第1期38-40,共3页
目的　探讨多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)在食管癌、贲门癌中表达的临床意义。　方法　采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR),对29例食管癌、贲门癌癌组织及癌旁组织中MDR1和MRP的表达进行检测。　结果　癌组织中MDR1阳性... 目的　探讨多药耐药基因(MDR1)和多药耐药相关蛋白基因(MRP)在食管癌、贲门癌中表达的临床意义。　方法　采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR),对29例食管癌、贲门癌癌组织及癌旁组织中MDR1和MRP的表达进行检测。　结果　癌组织中MDR1阳性率为65.5%,高于癌旁组织中MDR1的阳性率,为37.9%(P<0.05),癌组织MDR1信使核糖核酸(mRNA)表达水平也显著高于癌旁组织(P<0.01);癌组织的MRP阳性率为48.3%,高于癌旁组织(27.6%),但无差异(P>0.05),而癌组织MRPmRNA表达水平与癌旁组织比较则有差异(P<0.05);中、低分化肿瘤的MDR1和MRP表达阳性率增高,两基因的mRNA表达水平显著高于高分化肿瘤(P<0.05)。　结论食管、贲门癌具有内源性多药耐药性;MDR1和MRP表达与食管、贲门癌的组织学类型及TNM分期无关。 展开更多
关键词 食管癌 贲让癌 多药耐药基因 MRP 表达
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人类抗砷相关基因hARRG全长cDNA的克隆和在E.coli中表达 被引量：2
11
作者 潘泽民 杨磊 +6 位作者 黄瑾 袁红玲 刘建平 郑青 顾永清 应康 谢毅 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期623-627,共5页
通过对构建的人胎脑cDNA文库进行大规模测序 ,发现一条人类新基因 ,序列与仓鼠asr2序列高度同源 ,达 88% ,命名为人类抗砷相关基因 (humanarsenicresistancerelatedgene ,hARRG) .hARRG与抗砷基因相关序列ARS2 (AF0 82 871)几乎完全同... 通过对构建的人胎脑cDNA文库进行大规模测序 ,发现一条人类新基因 ,序列与仓鼠asr2序列高度同源 ,达 88% ,命名为人类抗砷相关基因 (humanarsenicresistancerelatedgene ,hARRG) .hARRG与抗砷基因相关序列ARS2 (AF0 82 871)几乎完全同源 ,仅比它短 2 5 3bp .hARRG并不是全长基因而仅是一个cDNA片段 .为了获得hARRG全长cDNA ,运用Northernblot ,电子RACE和 5′ SMART RACE的方法克隆了一条 2 999bp的hARRG全长cDNA ,通过Unigene染色体定位于 7q2 1.3,经过生物信息学分析发现 ,该cDNA有完整的读码框 ,编码一个 788个氨基酸的蛋白质 .预计分子质量为 89 2ku ,并在大肠杆菌中获得了成功表达 . 展开更多
关键词 抗砷相关基因 克隆 表达 人类 hARRA 人胎脑CDNA文库
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柑橘溃疡病菌抗铜相关基因copA和copB的克隆及原核表达 被引量：3
12
作者 王君 叶刚 +2 位作者 马燕侠 王国平 洪霓 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期247-252,共6页
以柑橘溃疡病菌DNA为模板,对抗铜相关基因copA和copB进行了PCR扩增和克隆,获得了大小分别为1 782 bp和1 095 bp的目标片段。构建了这2个基因的原核表达载体(pET-copA和pET-copB),并在大肠杆菌[Escherichia coliBL21(DE3)]中成功诱导表... 以柑橘溃疡病菌DNA为模板,对抗铜相关基因copA和copB进行了PCR扩增和克隆,获得了大小分别为1 782 bp和1 095 bp的目标片段。构建了这2个基因的原核表达载体(pET-copA和pET-copB),并在大肠杆菌[Escherichia coliBL21(DE3)]中成功诱导表达。利用原核表达的融合蛋白免疫大耳白兔,制备了抗copA和copB原核表达蛋白的多克隆抗体。用间接ELISA法测定了所制备的多克隆抗体的效价均为1∶6 400。用所制备的抗体分别对copA和copB的原核表达产物进行Western blot分析的结果显示,在相应位置产生了较强的免疫反应条带,表明所制备抗体能特异性地与相应的抗原发生免疫反应。 展开更多
关键词 抗铜基因 PCR 原核表达 WESTERN BLOT 柑橘溃疡病菌
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克隆肺腺癌亲代细胞A_(549)与耐顺铂细胞A_(549)^(DDP)耐药相关基因的差异表达片段 被引量：1
13
作者 王洁 刘叙仪 +3 位作者 李振甫 张宏 梁莉 蒋薇 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期107-110,共4页
目的　克隆肺腺癌耐药相关基因。方法　以mRNA差异显示技术检测耐顺铂肺腺癌细胞A54 9DDP及其亲代细胞A54 9基因表达的差异。差异表达基因片段被克隆并经Northernblot证实。结果获得 4个基因表达的差异cDNA片段 ,经测序、同源性分析 ,其... 目的　克隆肺腺癌耐药相关基因。方法　以mRNA差异显示技术检测耐顺铂肺腺癌细胞A54 9DDP及其亲代细胞A54 9基因表达的差异。差异表达基因片段被克隆并经Northernblot证实。结果获得 4个基因表达的差异cDNA片段 ,经测序、同源性分析 ,其中 2个片段 (A1、D1)在GeneBank中未发现同源序列 ,一个片段 (A2 )与白介素 1β转化酶 (Interleukin 1βconvertingenzyme ,ICE) 89%同源性 ,一个片段 (D2 )与MM45srRNA(Mousemusculus 45spre rRNA)基因 10 0 %同源。A1、A2 cDNA片段仅表达于A54 9细胞 ,D1、D2 cDNA片段仅表达于A54 9DDP细胞。结论　应用mRNA差异显示技术获得 4个肺腺癌A54 9与A54 9DDP间的基因差异表达片段。 2个新的差异表达片段以及与ICE、MM45sRNA高度同源的基因片段是否与耐药相关尚需进一步研究。 展开更多
关键词 肺肿瘤 耐药相关基因 MRNA差异显示法 肺腺癌 顺铂
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紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX基因表达谱的变化 被引量：2
14
作者 张文晶 董晓琳 李红霞 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第26期3-4,共2页
目的比较紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX及敏感细胞SKOV3基因表达谱的差异,筛查获得性紫杉醇卵巢癌耐药的相关基因。方法取对数生长期SKOV3、SKOV3/TAX细胞,抽提细胞总RNA,合成双链cDNA,生物素标记,用高通量Affymetrix人类基因组U133A... 目的比较紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX及敏感细胞SKOV3基因表达谱的差异,筛查获得性紫杉醇卵巢癌耐药的相关基因。方法取对数生长期SKOV3、SKOV3/TAX细胞,抽提细胞总RNA,合成双链cDNA,生物素标记,用高通量Affymetrix人类基因组U133A基因芯片检测其基因谱。结果与SKOV3相比,SKOV3/TAX有111条基因表达发生变化(45条基因表达上调,66条基因表达下调)。结论SKOV3/TAX的部分基因表达发生变化,与卵巢癌化疗耐药有关。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 卵巢癌 紫杉醇 耐药相关基因
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两步扩增法在玉米抗大斑病相关基因片段分离中的应用
15
作者 谷守芹 王海祥 +2 位作者 范永山 韩建民 董金皋 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期53-55,68,共4页
对一步扩增法和两步扩增法在DDRT-PCR中的扩增效率进行了比较,结果发现,两种方法得到的片段大小都在150～1500bp之间,但条带数量和清晰度不同.一步扩增法得到扩增条带为30～45条,条带较模糊,两步扩增法得到的扩增条带为40～60条,条带清... 对一步扩增法和两步扩增法在DDRT-PCR中的扩增效率进行了比较,结果发现,两种方法得到的片段大小都在150～1500bp之间,但条带数量和清晰度不同.一步扩增法得到扩增条带为30～45条,条带较模糊,两步扩增法得到的扩增条带为40～60条,条带清晰.一步扩增法获得10条玉米抗大斑病差异表达条带,只有55条带中的cDNA能够成功回收并产生有效扩增,差异条带回收率53.9%,而两步扩增法获得了148条差异条带,其中138条带都能得到有效回收和扩增,回收率达93.2%.因此,步扩增法更有利于差异条带的回收和二次扩增. 展开更多
关键词 玉米 两步扩增法 玉米大斑病 抗病相关基因
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利用慢病毒载体构建过表达人TCRP1基因的慢性髓系白血病K562细胞系及其生物学功能检测 被引量：1
16
作者 刘孝荣 何悦 +4 位作者 陈妍 辛泽锋 邓栩文 钟惠锋 陈运生 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第19期2456-2460,2468,共6页
目的利用慢病毒载体构建过表达人舌癌耐药相关基因(TCRP1)的慢性髓系白血病(CML)K562细胞系并检测其生物学功能。方法将TCRP1的重组质粒与包装质粒共转染293T细胞,收集病毒液测定滴度后感染K562细胞,使用嘌呤霉素筛选TCRP1过表达的细胞... 目的利用慢病毒载体构建过表达人舌癌耐药相关基因(TCRP1)的慢性髓系白血病(CML)K562细胞系并检测其生物学功能。方法将TCRP1的重组质粒与包装质粒共转染293T细胞,收集病毒液测定滴度后感染K562细胞,使用嘌呤霉素筛选TCRP1过表达的细胞株K562/TCRP1,荧光定量PCR和Western blot方法检测TCRP1的表达,采用连续细胞计数法和CCK-8法分别对K562/TCRP1及其对照细胞株的增殖情况进行检测,并分析2个细胞株对不同浓度的伊马替尼(IM)的药物敏感性。结果TCRP1慢病毒表达载体成功转染进入K562细胞,荧光定量PCR和Western blot结果显示K562/TCRP1细胞株的TCRP1表达在mRNA水平和蛋白水平均显著高于对照组,连续细胞计数法和CCK-8法结果表明K562/TCRP1细胞的增殖能力和细胞活力增强,IM处理K562/TCRP1细胞的IC50值显著高于其对照细胞(P<0.05)。结论利用慢病毒载体成功构建了TCRP1过表达的K562细胞株,并且发现TCRP1的过表达可能增强K562细胞的增殖能力和IM耐药能力,为进一步探讨TCRP1在慢性髓系白血病发病机制中的可能作用提供基础。 展开更多
关键词 TCRP1 过表达 K562细胞 慢性髓系白血病
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二氢杨梅素对K562/A02细胞阿霉素耐药性的逆转作用 被引量：1
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作者 李碧蓉 王乐 +2 位作者 韩维娜 夏琳钦 唐姝 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1369-1374,共6页
目的:探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02细胞对阿霉素(adriamycia,ADM)耐药的逆转作用及可能机制。方法:用DMY(5、10、20、40、60、80和100 mg/L)和ADM((0.05-100 mg/L)处理K562和K562/A02细... 目的:探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对人慢性粒细胞白血病耐药细胞株K562/A02细胞对阿霉素(adriamycia,ADM)耐药的逆转作用及可能机制。方法:用DMY(5、10、20、40、60、80和100 mg/L)和ADM((0.05-100 mg/L)处理K562和K562/A02细胞48 h,采用MTT法检测细胞活力及DMY对K562/A02细胞ADM耐药的逆转效应,流式细胞术检测细胞内阿霉素的相对浓度,Western blot检测耐药相关基因的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance related protein 1,MRP1)、谷胱甘肽转移酶π(glutathione transferaseπ,GSTπ)和BCL-2蛋白表达。结果:DM Y能抑制K562和K562/A02细胞的增殖且呈剂量依赖效应(r1=0.37,r2=0.38),IC_(50)分别为71.23±6.51和72.88±5.49 mg/L。5、10和20 mg/L为DMY的低细胞毒性剂量。DMY(5、10和20 mg/L)增敏K562细胞和K562/A02细胞对ADM耐药性且呈剂量依赖效应(r1=-0.62,r2=-0.71),耐药逆转倍数介于1.38-28.59之间。DM Y(5,10和20 mg/L)增加K562/A02细胞内ADM的浓度也呈剂量依赖效应(r=0.34)。与对照组比较,DMY(5,10和20 mg/L)均显著降低了K562/A02细胞中Pgp、M RP1、GSTπ和BCL-2蛋白表达,呈剂量依赖性(r1=-0.41,r2=-0.37,r3=-0.58,r4=-0.46)。与ADM组比较,DM Y(5,10和20 mg/L)+ADM组P-gp、M RP1、GSTπ和BCL-2蛋白表达均显著降低(r1=-0.55,r2=-0.41,r3=-0.38,r4=-0.44)。结论:DM Y可以逆转K562/A02细胞对ADM的耐药性,其作用机制可能与下调耐药相关基因P-gp、MRP1、GSTπ和BCL-2的表达有关。 展开更多
关键词 二氢杨梅素 K562/A02细胞 阿霉素耐药 耐药相关基因
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以多药耐药基因为靶标的siRNA对耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡的影响 被引量：1
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作者 胡海燕 郭坤元 +3 位作者 刘革修 马秀君 姜铧 马文丽 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期550-553,共4页
目的:研究应用以多药耐药相关蛋白(MRP)基因为靶标的siRNA(small interference RNA)抑制相应蛋白表达后,耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率的改变。方法:通过脂质体将以MRP基因为靶标的siRNA(100μmol/L)转入柔红霉素(DNR)0.8、1.6、3.2、... 目的:研究应用以多药耐药相关蛋白(MRP)基因为靶标的siRNA(small interference RNA)抑制相应蛋白表达后,耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率的改变。方法:通过脂质体将以MRP基因为靶标的siRNA(100μmol/L)转入柔红霉素(DNR)0.8、1.6、3.2、6.4、12.8μg/mL处理的肺癌耐药细胞株SW1573/R20;阿霉素(ADM)1.6、3.2、6.4、12.8、25.6μg/mL处理的白血病耐药细胞株K562/ADM;顺铂(DDP)0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0μmol/mL处理的鼻咽癌耐药细胞株CNE2/DDP;以单纯化疗处理组和未处理组为对照。于转染后24、48、72h,用MTT法检测各组细胞生长抑制率,算出各细胞IC50。转染siRNA联合IC50剂量化疗处理6 h后流式细胞仪检测各细胞凋亡率和死亡率,24 h后RT-PCR检测相应基因mRNA表达水平,48 h后检测MRP蛋白表达率。结果:以MRP为靶标的siRNA明显抑制各肿瘤细胞靶基因蛋白和mRNA的表达,与未处理组相比均有统计学差异(P<0.05);转染以MRP为靶标的siRNA后,耐药肿瘤细胞对化疗药物敏感性明显增强,IC50明显降低,细胞凋亡率明显增加,与单纯化疗组相比有统计学差异(P<0.05)。结论:以MRP基因为靶标的siRNA,通过降低靶基因mRNA和蛋白表达,明显增加耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率。 展开更多
关键词 BCL-2基因 SIRNA 多药耐药相关蛋白基因
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结核分枝杆菌酸抗性基因及其调控网络 被引量：1
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作者 张沥元 黄芙静 +2 位作者 许峻旗 龚真 谢建平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期552-566,共15页
病原菌在宿主细胞内的持留分子机理是目前研究的热点和难点。病原菌的抗酸能力与此密切相关。结核分枝杆菌感染导致的结核病仍然是全球公共卫生的重大威胁,这与结核分枝杆菌抗酸并在宿主巨噬细胞内持留有关。结核分枝杆菌抗酸主要通过... 病原菌在宿主细胞内的持留分子机理是目前研究的热点和难点。病原菌的抗酸能力与此密切相关。结核分枝杆菌感染导致的结核病仍然是全球公共卫生的重大威胁,这与结核分枝杆菌抗酸并在宿主巨噬细胞内持留有关。结核分枝杆菌抗酸主要通过调控质子进出、代谢调控胞内酸碱平衡和双组份信号系统调控。本文综述了结核分枝杆菌在酸胁迫下的整体调控网络,阐述了在酸性环境中结核分枝杆菌的具体调控机理,旨在为持留结核分枝杆菌的治疗提供新的全局性思路,寻找新的结核病防控靶标。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 酸抗性基因 持留 调控网络
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喉癌耐药细胞株Hep-2/5-Fu的建立及其差异表达基因的筛选 被引量：1
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作者 陈婕 王家东 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第24期1130-1133,共4页
目的:建立喉癌细胞耐药模型Hep-2/5-Fu并初步筛选可能的耐药相关基因。方法:采用5-Fu大剂量浓度逐渐递增间歇给药的方法建立人喉癌耐药细胞Hep-2/5-Fu,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线:用MTT法鉴定其耐药性并计算耐药指数(RI);用基因... 目的:建立喉癌细胞耐药模型Hep-2/5-Fu并初步筛选可能的耐药相关基因。方法:采用5-Fu大剂量浓度逐渐递增间歇给药的方法建立人喉癌耐药细胞Hep-2/5-Fu,观察其生长规律并绘制细胞生长曲线:用MTT法鉴定其耐药性并计算耐药指数(RI);用基因芯片技术检测耐药细胞株Hep-2/5-Fu与其亲本细胞株Hep-2中的差异表达基因,从中筛选出可能的耐药相关基因;用半定量RT-PCR法进行验证。结果:Hep-2/5-Fu细胞与Hep-2细胞相比,生长缓慢,细胞体积增大,并对顺铂及长春新碱有不同程度的交叉耐药性。通过基因芯片筛选出差异表达基因1210个,可能的耐药相关基因包括Cyclin D、IGF-BP3、CASP9、CDK4/6,其中Cyclin D在Hep-2/5-Fu中的表达是亲本细胞的6.599 7倍。结论:Hep-2/5-Fu细胞株耐药性稳定,耐药机制可能与Cyclin D等耐药相关基因有关。 展开更多
关键词 喉肿瘤 耐药相关基因 5-氟尿嘧啶 HEP-2 5-Fu细胞株 MTT法 基因芯片 逆转录-聚合酶链反应
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