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染料木黄酮、拟雌内酯及槲皮素对孕烷X受体介导的CYP3A4转录的调节作用 被引量：13
1
作者 孙剑寒 郑一凡 +1 位作者 祝慧娟 朱心强 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期219-223,共5页
目的　研究植物雌激素中的染料木黄酮(GST)、拟雌内酯 (COM)及槲皮素 (QU)能否通过活化人孕烷X受体 (PXR)诱导CYP3A4的转录表达。方法用PXR依赖的瞬时转染报告基因试验检测 3种植物雌激素的诱导作用。结果　GST ,COM和QU均能通过活化PX... 目的　研究植物雌激素中的染料木黄酮(GST)、拟雌内酯 (COM)及槲皮素 (QU)能否通过活化人孕烷X受体 (PXR)诱导CYP3A4的转录表达。方法用PXR依赖的瞬时转染报告基因试验检测 3种植物雌激素的诱导作用。结果　GST ,COM和QU均能通过活化PXR诱导HepG2 细胞CYP3A4基因的转录表达 ,最大诱导倍数 (相对于用浓度为 0 .1%的DMSO处理的细胞 )在本实验中分别为 11.97(P <0 .0 1) ,2 .98(P <0 .0 1)和 3.2 8(P <0 .0 1)。结论　GST ,COM和QU均能诱导CYP3A4的转录表达 ,其作用机制通过活化PXR。GST ,COM和QU的摄入可能影响其他CYP3A4底物尤其是药物在体内的代谢。 展开更多
关键词 受体 孕烷X 细胞色素P450 报告基因试验 染料木黄酮 拟雌内酯 槲皮素
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联苯菊酯的抗雄激素作用及其机制 被引量：13
2
作者 朱威 郑一凡 +1 位作者 祝慧娟 朱心强 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期305-307,共3页
目的探讨联苯菊酯的抗雄激素作用及其可能机制。方法体外雄激素受体(AR)依赖转录活化试验中,在96孔板上接种稳定表达荧光素酶报告基因的MDA-kb2细胞,加入联苯菊酯或已知抗雄激素,同时加一定剂量的双氢睾酮(DHT)以诱导荧光素酶基因的表达... 目的探讨联苯菊酯的抗雄激素作用及其可能机制。方法体外雄激素受体(AR)依赖转录活化试验中,在96孔板上接种稳定表达荧光素酶报告基因的MDA-kb2细胞,加入联苯菊酯或已知抗雄激素,同时加一定剂量的双氢睾酮(DHT)以诱导荧光素酶基因的表达,裂解细胞后测定荧光素酶活力值,以溶剂对照组的倍数比值作为标化荧光强度单位,此值高低表示抗雄激素作用的大小。体内Hershberger试验中,将去势的30只雄性大鼠随机分为联苯菊酯低、中、高剂量,阳性对照、溶剂对照和睾酮缺乏共6组,每组5只。除睾酮缺乏组外每天皮下注射丙酸睾酮(TP)100μg,连续7 d;给药组、阳性对照组、溶剂对照和睾酮缺乏组分别同时灌胃给予联苯菊酯1.5、4.5和13.5 mg/kg、氟他胺50 mg/kg、以及同体积花生油。7 d后处死大鼠并称重雄激素依赖组织。结果Hershberger试验中联苯菊酯13.5 mg/kg剂量组大鼠的精囊腺、腹侧前列腺等主要雄激素依赖组织重量与溶剂对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但未出现明显的一般毒性反应。报告基因试验中,联苯菊酯1.0×10-8、1.0×10-7、1.0×10-6、1.0×10-5mol/L能拮抗DHT的荧光素酶诱导作用(P<0.05),呈剂量-效应关系。结论证实联苯菊酯是一种环境抗雄激素,其作用可发生在一般毒性之前,AR拮抗可能是其作用机制之一。 展开更多
关键词 环境抗雄激素 联苯菊酯 Hershberger试验 报告基因试验
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报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白生物学活性 被引量：11
3
作者 于雷 范文红 +3 位作者 王兰 周长明 王军志 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期426-431,共6页
目的:建立报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA,Byetalog)生物学活性。方法:将胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-likepeptide 1 receptor,GLP-1R)表达载体和c AMP反应元件(c AMP response element,CRE)报告基因载体共转染... 目的:建立报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA,Byetalog)生物学活性。方法:将胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-likepeptide 1 receptor,GLP-1R)表达载体和c AMP反应元件(c AMP response element,CRE)报告基因载体共转染CHO-K1细胞,经加压筛选和单克隆分离培养获得稳定的单克隆细胞株;使用药物反应强的单克隆细胞株建立报告基因方法;对新建方法进行条件优化,并用优化的方法对促胰岛素分泌肽融合蛋白原液和成品进行生物学活性测定。结果:经加压筛选和单克隆分离培养后获得对Byetalog强反应性的细胞株CHOglpar/crec14;新建方法剂量反应曲线符合四参数方程,R^2大于0.99;对促胰岛素分泌肽融合蛋白的原液和成品分别测定3次,RSD值均低于5.0%,回收率在70%~130%之间。结论:报告基因法操作简便,重复性和准确性都较高,有望作为替代方法应用于促胰岛素分泌肽融合蛋白的生物学活性测定。 展开更多
关键词 促胰岛素分泌肽融合蛋白 转基因细胞 报告基因法 CRE GLP-1R 生物学活性测定
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黄芩素激活核转录因子Nrf2拮抗肝毒性的研究 被引量：9
4
作者 庞纯 蒋萍 季莉莉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期546-549,共4页
目的研究黄芩素(Baicalein,BAI)对核转录因子Nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)的转录激活,以及对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)、乙醇(ethanol)和对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的人正常肝L-02细胞毒... 目的研究黄芩素(Baicalein,BAI)对核转录因子Nuclear factor erythroid 2-related factor 2(Nrf2)的转录激活,以及对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)、乙醇(ethanol)和对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的人正常肝L-02细胞毒性的拮抗作用。方法在肝L-02细胞中,采用瞬时转染报告基因实验检测不同浓度黄芩素对Nrf2转录激活的影响。在L-02细胞上分别用APAP(10 mmol·L-1)、CCl4(10 mmol·L-1)、Ethanol(100 mmol·L-1)诱导肝细胞毒性。黄芩素1、10、25、50、100μmol·L-1分别与细胞预孵15 min后,加入上述肝毒性物质,48 h后采用MTT法检测细胞存活率。结果与对照组比较,黄芩素(25、50μmol·L-1)能明显提高Nrf2的转录激活(P<0.01,P<0.05)。与对照组比较,3种肝毒性物质均能明显降低细胞存活率(P<0.01),而黄芩素能剂量依赖性地提高给予APAP、CCl4和Ethanol后降低的L-02细胞存活率(P<0.01)。结论黄芩素可以诱导重要的抗氧化核转录因子Nrf2的转录激活,这可能是黄芩素拮抗外源性肝毒性物质APAP、CCl4和Ethanol诱导的L-02肝细胞毒性的机制之一。 展开更多
关键词 黄芩素 人正常肝L-02细胞 NRF2 肝毒性 报告基因 L-02 NRF2
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单磷酰脂A佐剂的热原控制方法研究 被引量：8
5
作者 裴宇盛 蔡彤 +1 位作者 陈晨 高华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1174-1177,共4页
目的研究建立单磷酰脂A佐剂的热原控制方法。方法对2批不同来源的单磷酰脂A分别采用细菌内毒素检查法、TLR2高表达HEK细胞和TLR4高表达HEK细胞报告基因法进行了线性与范围、专属性、检测限、耐用度、回收率等方法学研究。结果2批样品使... 目的研究建立单磷酰脂A佐剂的热原控制方法。方法对2批不同来源的单磷酰脂A分别采用细菌内毒素检查法、TLR2高表达HEK细胞和TLR4高表达HEK细胞报告基因法进行了线性与范围、专属性、检测限、耐用度、回收率等方法学研究。结果2批样品使用3种方法的线性与范围、检测限、耐用度、回收率等方法学研究结果均符合规定。专属性方面的研究显示,细菌内毒素检查法、TLR4高表达HEK细胞报告基因法不能区分细菌内毒素和单磷酰脂A。结论细菌内毒素检查法、TLR4高表达HEK细胞报告基因法检测专属性均无法满足质量控制要求。TLR2高表达HEK细胞报告基因法可作为单磷酰脂A佐剂的热原控制方法。 展开更多
关键词 单磷酰脂A 佐剂 细菌内毒素检查法 报告基因法 热原检查 质量控制
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KLF15基因突变导致心房颤动的机制 被引量：7
6
作者 乔祺 杨晨曦 +3 位作者 顾佳宁 柯尊平 杨奕清 徐迎佳 《国际心血管病杂志》 2021年第1期53-57,共5页
目的:探讨KLF15基因突变导致心房颤动(房颤)的机制。方法:收集152例特发性房颤患者和206名健康对照者的临床数据和血标本,提取基因组DNA。测序分析KLF15基因以寻找致房颤突变。克隆KLF15基因,构建其野生型和突变型表达质粒,转染培养的H... 目的:探讨KLF15基因突变导致心房颤动(房颤)的机制。方法:收集152例特发性房颤患者和206名健康对照者的临床数据和血标本,提取基因组DNA。测序分析KLF15基因以寻找致房颤突变。克隆KLF15基因,构建其野生型和突变型表达质粒,转染培养的HeLa细胞,应用双荧光报告基因分析系统研究突变体的功能特点。结果:在1例特发性房颤患者中发现KLF15基因新突变c.946G>T (p.Glu316X),该突变不存在于206名对照者中。功能分析表明该突变型KLF15蛋白对靶基因的转录激活作用丧失。结论:首次揭示KLF15基因功能丧失性突变是部分房颤的分子病因,对房颤患者的遗传咨询及预后风险评估具有潜在意义。 展开更多
关键词 心房颤动 遗传学 转录因子 KLF15 报告基因分析
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沿海三市饮用水源水内分泌干扰毒性研究 被引量：7
7
作者 张凤仙 胡冠九 +3 位作者 郝英群 刘红玲 王心如 于红霞 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2011年第3期241-246,共6页
近十多年来,江苏沿海化工产业发展迅速,化工废水的长期排放对水生生态系统及人群健康构成潜在威胁。采用非洲猴肾细胞(CV-1)核受体介导的体外转录激活试验方法,对中国东部沿海A、B、C三市的6个水源地进行了拟雌激素活性调查研究。结果表... 近十多年来,江苏沿海化工产业发展迅速,化工废水的长期排放对水生生态系统及人群健康构成潜在威胁。采用非洲猴肾细胞(CV-1)核受体介导的体外转录激活试验方法,对中国东部沿海A、B、C三市的6个水源地进行了拟雌激素活性调查研究。结果表明:C市2处水源水的有机提取物在枯水期、平水期和丰水期均无拟雌激素活性检出,水质较好;A市的水源水提取物在枯水期具有明显的拟雌激素活性;B市的3处水源水有机提取物在3个季节均表现出显著的拟雌激素活性;雌激素活性当量计算结果表明,点位B-3在枯水期的当量浓度高于毒性限值,对水生生物的内分泌系统易造成威胁,应引起有关部门关注。另外,研究结果显示,CV-1细胞受体转录激活试验是一种筛选和分析环境样品的具有拟雌激素活性的快速和有效的方法,值得进一步推广和应用。 展开更多
关键词 沿海化工园 饮用水源水 内分泌干扰 受体报告基因
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报告基因法在生物技术药物活性检测中的应用 被引量：6
8
作者 牛安娜 苏昕 张晓鹏 《生物技术通讯》 CAS 2019年第2期296-300,共5页
随着生物技术药物研发数量的增多,对建立相应生物活性分析方法的需求不断上升。报告基因法作为一种研究基因转录活性和表达水平的工具,由于其快速、灵敏、稳定的特性,越来越多地应用于药物活性检测,包括细胞因子、抗体、激素等各类生物... 随着生物技术药物研发数量的增多,对建立相应生物活性分析方法的需求不断上升。报告基因法作为一种研究基因转录活性和表达水平的工具,由于其快速、灵敏、稳定的特性,越来越多地应用于药物活性检测,包括细胞因子、抗体、激素等各类生物制品。我们就报告基因法在生物技术药物活性测定及药物研发进程中的应用做简要综述。 展开更多
关键词 报告基因法 生物技术药物 生物学活性 活性检测
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人SCF基因5′旁侧-1190～- 853 AT富集区功能研究 被引量：4
9
作者 聂怡玲 谭文斌 +5 位作者 朱敏 罗赛群 郭小珊 成光杰 胡维新 彭兴华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期315-318,共4页
已有的报告基因和EMSA实验研究表明 ,人干细胞生长因子 (SCF)基因 5′旁侧AT富集区- 1 1 90～ - 853在HeLa和MCF 7细胞中均能增强下游基因转录 ,可能为一个核基质结合区(MAR) ,对人SCF基因的转录发挥调控作用 .为进一步研究该AT富集区... 已有的报告基因和EMSA实验研究表明 ,人干细胞生长因子 (SCF)基因 5′旁侧AT富集区- 1 1 90～ - 853在HeLa和MCF 7细胞中均能增强下游基因转录 ,可能为一个核基质结合区(MAR) ,对人SCF基因的转录发挥调控作用 .为进一步研究该AT富集区的功能 ,将人SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853AT富集区分别克隆入SV40或CMV启动子前后紧接着CAT报告基因 ,瞬时转染Jurkat,HepG2和 3T3细胞 ,检测CAT报告基因的瞬时表达活性 .结果表明 :人SCF基因 5′旁侧- 1 1 90～ - 853AT富集区在Jurkat和HepG2细胞中 ,对分别由SV40和CMV启动子引导的CAT基因表达均有抑制作用 ;但在 3T3细胞中对SV40启动子的转录活性表现出增强作用 ,对CMV启动子的转录活性无明显影响 .这些结果提示 ,人SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853AT富集区转录调控具有组织细胞特异性 。 展开更多
关键词 人干细胞因子基因 调控元件 启动子 报告基因检测 SCF
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散发性扩张型心肌病相关HAND1基因新突变 被引量：5
10
作者 徐迎佳 仇兴标 +3 位作者 李若谷 刘华 曲新凯 杨奕清 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第43期3371-3375,共5页
目的研究散发性扩张型心肌病（DCM）相关HANDl基因新突变。方法自2013年2月至2017年2月在复旦大学附属第五人民医院和上海交通大学附属胸科医院采集120例散发性DCM患者和200名健康对照者的临床资料和外周静脉血标本，提取基因组DNA。通... 目的研究散发性扩张型心肌病（DCM）相关HANDl基因新突变。方法自2013年2月至2017年2月在复旦大学附属第五人民医院和上海交通大学附属胸科医院采集120例散发性DCM患者和200名健康对照者的临床资料和外周静脉血标本，提取基因组DNA。通过聚合酶链反应扩增HANDl基因编码外显子并进行测序分析以发现HANDl基因新突变。分别应用在线软件MUSCLE和MutationTaster分析突变氨基酸在进化上的保守性和突变的致病性。克隆野生型HANDl基因，通过定位诱变获得其突变体，转染HeLa细胞，应用双荧光素酶报告基因分析试剂盒分析突变型HANDl的功能特点。结果在1例散发性DCM患者发现1种新的杂合性HANDl基因突变c．346G〉T，即P．E116X突变。该无义突变不存在于200名健康对照者，多物种HANDl蛋白序列比对显示第116位的谷氨酸在进化上高度保守，致病性预测表明所识别的HANDl基因突变具有致病性。生化分析证实突变型HANDl对靶基因的转录激活功能丧失。结论HANDl基因功能缺失性突变可能是散发性DCM的少见病因。 展开更多
关键词 扩张型心肌病 分子遗传学 转录因子 HANDl 报告基因分析
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HL60-pNL3.2报告基因热原检查法测定疫苗热原的适用性研究 被引量：1
11
作者 王灿 刘荔桢 +1 位作者 陈钢 邵泓 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期354-358,共5页
目的探讨HL60-pNL3.2报告基因热原检查法在水痘减毒活疫苗、流感病毒裂解疫苗、冻干甲型肝炎减毒活疫苗热原测定中的应用。方法参照中国药典“体外热原检查法(报告基因法)”公示稿,计算3种疫苗最大有效稀释倍数(maximum valid dilution,... 目的探讨HL60-pNL3.2报告基因热原检查法在水痘减毒活疫苗、流感病毒裂解疫苗、冻干甲型肝炎减毒活疫苗热原测定中的应用。方法参照中国药典“体外热原检查法(报告基因法)”公示稿,计算3种疫苗最大有效稀释倍数(maximum valid dilution,MVD),干扰实验探讨3种疫苗对该方法测定热原是否存在干扰。参照中国药典2020年版通则9101对该方法测定3种疫苗热原进行方法学验证,用经验证的方法测定3种疫苗热原含量。结果水痘减毒活疫苗、流感病毒裂解疫苗、冻干甲型肝炎减毒活疫苗MVD分别为1000,200和1000倍。在MVD范围内,内毒素(endotoxin,LPS)在3种疫苗中的回收率在52.5%~110.1%。方法学验证结果显示该方法可用于3种疫苗热原测定,LPS浓度与其化学光强度(RLU值)相关系数(R^(2))均>0.98;LPS浓度在1~250 EU·mL^(-1),回收率结果在76.4%~192.8%。LPS浓度>5 EU·mL^(-1)时,重复性变异度均<25%;该方法用于3种疫苗热原测定的检测限和定量限在0.05~0.13 EU·mL^(-1)。用建立的HL60-pNL3.2报告基因热原检查法测定3种疫苗热原含量,均低于污染物限值。结论HL60-pNL3.2报告基因热原检查法具有不使用动物、操作简单、快速、检测热原谱广,可对热原进行定量的优点,可用于水痘减毒活疫苗、流感病毒裂解疫苗和冻干甲型肝炎减毒活疫苗热原测定。 展开更多
关键词 热原测定 报告基因法 水痘减毒活疫苗 流感病毒裂解疫苗 冻干甲型肝炎减毒活疫苗
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7种中药提取物对PXR介导的CYP3A4转录调节作用 被引量：5
12
作者 徐玉英 张寅 +2 位作者 周凡 郑一凡 朱心强 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1524-1527,共4页
目的:观察7种中药的粗提取物能否通过活化人孕烷X受体(PXR)诱导CYP3A4的转录表达。方法:采用浸提法和回流法制备中药的粗提取物。用PXR依赖的瞬时转染报告基因试验检测7种中药粗提取物的诱导作用。结果:菊花、枸杞子、丹参水提取物,菊... 目的:观察7种中药的粗提取物能否通过活化人孕烷X受体(PXR)诱导CYP3A4的转录表达。方法:采用浸提法和回流法制备中药的粗提取物。用PXR依赖的瞬时转染报告基因试验检测7种中药粗提取物的诱导作用。结果:菊花、枸杞子、丹参水提取物,菊花、山楂、金银花、山药、丹参醇提取物等均能通过活化PXR诱导HepG2细胞CYP3A4基因的转录表达。结论:菊花水提取物、枸杞子水提取物、丹参水提取物、菊花醇提取物、山楂醇提取物、枸杞子醇提取物、金银花醇提取物、山药醇提取物和丹参醇提取物等7种中药的提取物均能诱导CYP3A4基因的转录表达,其作用机制是通过活化PXR。菊花、山楂、枸杞子、金银花、山药和丹参的摄入可能影响其他CYP3A4底物在体内的代谢。 展开更多
关键词 孕烷X受体 CYP3A4 报告基因实验 山药 金银花 丹参 山楂 枸杞子
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报告基因法测定人绒毛膜促性腺激素生物活性
13
作者 黄盈 张孝明 +6 位作者 李鹤洋 王绿音 张慧 吕萍 李晶 高向东 梁成罡 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期432-438,共7页
本研究根据人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)与受体结合后激活cAMP信号通路,构建一种LHCGR-CRE-luc-HEK293转基因细胞系,采用荧光素酶检测系统对hCG进行生物活性检测,利用四参数拟合分析计算样品相对效价。并且对... 本研究根据人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)与受体结合后激活cAMP信号通路,构建一种LHCGR-CRE-luc-HEK293转基因细胞系,采用荧光素酶检测系统对hCG进行生物活性检测,利用四参数拟合分析计算样品相对效价。并且对该方法条件进行优化,对方法的专属性、相对准确度、精密度和线性进行验证。结果显示,hCG浓度与报告基因表达量存在量效关系,且符合四参数曲线。经优化后,条件确定为hCG初始浓度为2.5μg·mL-1,稀释倍数为1∶4,细胞数为每孔10000~15000个,诱导时间为6 h。该方法具有良好的专属性,相对准确度的相对偏倚范围在-8.9%~3.4%,线性回归方程相关系数为0.996,中间精密度几何变异系数范围为3.3%~15.0%,线性范围为50%~200%。本研究成功建立并验证了一种报告基因法检测hCG生物学活性,可以用于hCG生物活性检测和质量控制。 展开更多
关键词 报告基因法 人绒毛膜促性腺激素 四参数曲线 生物活性 方法学验证
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报告基因法在生物技术药物活性检测中的应用 被引量：4
14
作者 刘荔桢 王灿 邵泓 《中国药师》 CAS 2021年第7期349-352,共4页
随着生物技术药物不断发展,对建立稳定高效的生物活性分析方法的需求不断上升。报告基因法与生物技术药物作用机制有关,方法变异小,准确度高,广泛应用于各种细胞因子、激素、抗体等生物技术药物生物活性检测。本文综述了报告基因、报告... 随着生物技术药物不断发展,对建立稳定高效的生物活性分析方法的需求不断上升。报告基因法与生物技术药物作用机制有关,方法变异小,准确度高,广泛应用于各种细胞因子、激素、抗体等生物技术药物生物活性检测。本文综述了报告基因、报告基因法的类型及特点,以及报告基因法在多种生物技术药物活性检测中的应用。 展开更多
关键词 报告基因法 生物技术药物 生物活性检测 细胞因子 单克隆抗体
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抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性测定方法的建立
15
作者 俞小娟 刘丽 +12 位作者 白海娇 韩晓捷 刘春雨 付志浩 李萌 杜加亮 徐刚领 段茂芹 杨雅岚 崔春博 陈浩彬 于传飞 王兰 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第7期922-928,共7页
目的建立基于报告基因的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法。方法以WIL2-S细胞系作为靶细胞,以Jurkat-NF-κB-Luc转基因细胞系作为效应细胞,对抗体的量效范围、孵育时间、诱导时间、效靶比及细胞接种密度进行优化,构建可用于测... 目的建立基于报告基因的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法。方法以WIL2-S细胞系作为靶细胞,以Jurkat-NF-κB-Luc转基因细胞系作为效应细胞,对抗体的量效范围、孵育时间、诱导时间、效靶比及细胞接种密度进行优化,构建可用于测定抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性的报告基因法。依据ICHQ2的指导原则对方法进行全面验证,包括专属性、准确性、精密度、线性、稳定性。结果成功建立了具有量效关系的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法,该方法的抗体起始浓度为500 ng/mL,稀释倍数为1∶4,共计8个浓度点(500,125,31.25,7.81,1.95,0.49,0.12,0.031 ng/mL),效靶比为4∶1,诱导时间为4 h。本方法具有良好的专属性;5个不同稀释组回收率样品经测定,相对效价分别为59.63%±4.57%,75.54%±4.05%,99.98%±9.63%,123.90%±5.54%和142.51%±12.82%;对应的回收率分别为93.17%±7.15%,94.42%±5.06%,99.98%±9.63%,99.12%±4.43%以及91.21%±8.21%,CV分别为7.67%,5.35%,9.63%,4.47%和9.00%,上述结果的变异系数CV值均<10%;实测效价与理论效价线性回归分析相关系数R^(2)=0.9823,线性良好;本研究建立的方法可以敏感检测出抗体结构变化对生物活性的影响,对双特异性抗体的稳定性检测有一定的指导意义。结论利用转基因细胞法成功建立了抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性。 展开更多
关键词 抗CD3/CD20双特异性抗体 双特异性抗体 生物学活性 报告基因 优化 验证
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抗PD-1单抗生物学活性测定方法的联合验证 被引量：4
16
作者 于传飞 黄璟 +3 位作者 杨雅岚 倪永波 王开芹 王兰 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1010-1014,共5页
针对抗PD-1单抗的报告基因活性测定法开展实验室间的联合验证,以研究该方法多实验室间的可应用和可转移性。本文采用两种协作方案,分别对该方法的检测内、检测间和实验室间精密度以及线性和准确性进行了研究。结果显示:该方法的检测内... 针对抗PD-1单抗的报告基因活性测定法开展实验室间的联合验证,以研究该方法多实验室间的可应用和可转移性。本文采用两种协作方案,分别对该方法的检测内、检测间和实验室间精密度以及线性和准确性进行了研究。结果显示:该方法的检测内精密度的95%可置信区间为(1.72~16.89)%,检测间精密度为(2.63~17.67)%,实验室间精密度为(9.00~14.26)%;线性的相关系数均大于0.99,对于不同效价水平准确性的95%可置信区间, 50%为(91.83~104.40)%, 75%为(90.40~101.40)%, 100%为(94.71~105.60)%, 125%为(94.00~102.00)%, 150%为(96.73~104.30)%。联合验证结果证明,该针对抗PD-1单抗的报告基因测活法,其精密度、线性和准确性均良好,可应用于不同实验室抗PD-1单抗的放行检测及稳定性分析。 展开更多
关键词 抗PD-1单抗 报告基因法 生物学活性 联合验证
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采用体外报告基因试验方法研究妊高征患者总雌激素效应 被引量：3
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作者 曹新国 孙宏 +1 位作者 王小青 郭锡熔 《实用预防医学》 CAS 2009年第4期1007-1009,共3页
目的建立检测人血清总雌激素活性的报告基因试验方法,研究妊娠高血压综合征与血清环境雌激素水平的关系。方法采用ER介导的报告基因试验方法,检测了15例正常孕妇和10例妊高征患者的血清总雌激素活性。结果rERa报告基因系统能够很好的反... 目的建立检测人血清总雌激素活性的报告基因试验方法,研究妊娠高血压综合征与血清环境雌激素水平的关系。方法采用ER介导的报告基因试验方法,检测了15例正常孕妇和10例妊高征患者的血清总雌激素活性。结果rERa报告基因系统能够很好的反映人血清中的总雌激素活性;妊高征患者血清总雌激素活性显著高于正常孕妇对照(P<0.01)。结论妊高征患者血清环境雌激素活性可能高于正常对照,这可能和妊高征的发生和发展密切相关。 展开更多
关键词 环境雌激素 妊娠高血压综合征 报告基因实验
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康柏西普质量标准优化和提高 被引量：4
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作者 张峰 于传飞 +6 位作者 王文波 武刚 贺庆 刘爱兵 宋晓婕 柯潇 王兰 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期1-12,共12页
目的:为在更高水平上控制康柏西普质量,进一步确保产品的安全性和有效性,对其生物学活性、非还原SDS-PAGE纯度、唾液酸含量、糖基化项目的检测方法和不溶性微粒的质量标准进行提高。方法:建立和验证康柏西普3个质量控制方法,包括康柏西... 目的:为在更高水平上控制康柏西普质量,进一步确保产品的安全性和有效性,对其生物学活性、非还原SDS-PAGE纯度、唾液酸含量、糖基化项目的检测方法和不溶性微粒的质量标准进行提高。方法:建立和验证康柏西普3个质量控制方法,包括康柏西普生物学活性的荧光素酶报告基因分析(reporter gene assay,RGA)方法、唾液酸含量的反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)测定方法和糖谱的离子交换高效液相色谱(ion exchange-high performance liquid chromatography,IEX-HPLC)测定方法,并对非还原十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)纯度测定方法的凝胶浓度和上样量进行优化,按照2015年版《中华人民共和国药典》通则0903,采用光阻法测定不溶性微粒。结果:生物学活性测定中,RGA法在准确度、精密度和中间精密度等方面均优于人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖抑制法,且能够更好地反映康柏西普生物学活性的变化;非还原SDS-PAGE纯度检测中,4%～15%梯度胶较10%固定浓度凝胶对主带和杂带的分离度高,3μg上样量时,能够更准确地测定康柏西普纯度;间苯二酚法测定唾液酸含量中,N-糖的非唾液酸单糖亦可与间苯二酚反应,产物在580 nm处有光吸收,从而影响检测结果,本研究建立的RP-HPLC法通过4,5-亚甲二氧基-1,2-邻苯二胺盐酸盐(4,5-methylenedioxy-1,2-phenylenediamine dihydrochloride,DMB)标记排除该影响,检测结果更准确;建立的IEX-HPLC糖谱测定方法可以有效控制影响康柏西普关键质量属性的N-糖基化类型;康柏西普成品的不溶性微粒检测结果能够满足USP<789>要求。结论:所建立/优化的质控方法和提高的质量标准可在更高水平上对康柏西普质量进行控制。 展开更多
关键词 康柏西普 唾液酸 糖谱 不溶性微粒 报告基因分析 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰氨电泳
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基于Wnt/β-catenin信号通路的DKK-1抗体药物生物活性报告基因法开发与评估
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作者 赵香 侯盛 +6 位作者 徐进 张大鹏 付蓉蓉 徐梦娇 王福贵 钱卫珠 李军 《聊城大学学报（自然科学版）》 2024年第5期183-190,共8页
生物活性检测对于确保治疗性抗体的安全性和有效性至关重要,需要准确反映药物的作用机制(MOA)。作为一类新兴靶点药物,DKK-1抗体在骨质疏松和肿瘤治疗领域展现出巨大潜力。然而,当前针对DKK-1抗体的生物活性评价主要基于碱性磷酸酶活性... 生物活性检测对于确保治疗性抗体的安全性和有效性至关重要,需要准确反映药物的作用机制(MOA)。作为一类新兴靶点药物,DKK-1抗体在骨质疏松和肿瘤治疗领域展现出巨大潜力。然而,当前针对DKK-1抗体的生物活性评价主要基于碱性磷酸酶活性测定,该方法存在操作复杂、耗时长及结果变异性大等问题,在一定程度上限制了此类抗体的研发及质控。为了建立一种DKK-1抗体高性能生物活性检测方法,本研究引入了报告基因法(RGA),通过将TCF/LEF反应元件控制的稳定表达荧光素酶的报告基因质粒转染HEK 293细胞,成功建立了一种基于DKK-1抗体MOA的Wnt/β-catenin信号通路的报告基因检测方法。该方法经过优化及模拟实验评估,显示出在实际应用中的潜力和可靠性。该新方法的建立预计将进一步促进DKK-1抗体类药物的筛选评估及其在后续开发过程中的质量控制。 展开更多
关键词 生物活性 抗体药物 DKK-1 报告基因方法
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先天性动脉导管未闭致病基因MESP2新突变的发现与功能分析 被引量：2
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作者 严梓 陈春英 +1 位作者 杨奕清 刘兴元 《国际心血管病杂志》 2023年第3期170-174,共5页
目的:研究先天性动脉导管未闭(PDA)致病基因MESP2新突变。方法:选取2016年2月至2019年11月同济大学医学院附属同济医院儿科208例先天性心脏病(CHD)患儿和232名无CHD儿童,收集其血液标本及临床数据。常规纯化基因组DNA,测序分析转录因子... 目的:研究先天性动脉导管未闭(PDA)致病基因MESP2新突变。方法:选取2016年2月至2019年11月同济大学医学院附属同济医院儿科208例先天性心脏病(CHD)患儿和232名无CHD儿童,收集其血液标本及临床数据。常规纯化基因组DNA,测序分析转录因子基因MESP2以发现新的致病突变。克隆野生型MESP2基因并构建其真核表达质粒,通过定位诱变产生突变型MESP2表达质粒,转染HEK 293T细胞,通过报告基因分析揭示突变体的功能特性。结果:1例散发性先天性动脉导管未闭(PDA)患者检测出1个MESP2基因新突变,即NM_001039958.2:c.268G>T(p.Glu90*)突变。该突变不存在于对照组和其他CHD儿童中。报告基因分析显示突变型MESP2对靶基因NKX2.5的转录激活功能丧失。结论:MESP2基因缺陷可能是部分先天性PDA的分子病因,为先天性PDA的防治提供了新的分子靶标。 展开更多
关键词 先天性动脉导管未闭 分子遗传学 转录因子 MESP2基因 报告基因分析
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