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千金子对肾癌Renca细胞周期及侵袭能力的影响 被引量:8
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作者 赵俊峰 李豪 +6 位作者 肖耀军 雷震 张林超 孙继建 潘世杰 崔洪泉 陈瑞廷 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第22期5599-5602,共4页
目的探讨中药千金子二萜醇对小鼠肾癌Renca细胞细胞周期及其侵袭能力的影响。方法小鼠肾癌Renca细胞为模型,以最有效的浓度(9000μg/ml)千金子二萜醇作用于肾癌Renca细胞前后,倒置显微镜下观察肾癌Renca细胞形态学的变化;Transwell实验... 目的探讨中药千金子二萜醇对小鼠肾癌Renca细胞细胞周期及其侵袭能力的影响。方法小鼠肾癌Renca细胞为模型,以最有效的浓度(9000μg/ml)千金子二萜醇作用于肾癌Renca细胞前后,倒置显微镜下观察肾癌Renca细胞形态学的变化;Transwell实验检测千金子对肾癌Renca细胞侵袭能力的影响;细胞划痕实验观察千金子对肾癌Renca细胞转移能力的影响;运用流式细胞技术检测肾癌Renca细胞周期的改变。结果与对照组相比较,千金子处理肾癌细胞24 h以后,细胞变圆钝呈现出凋亡形态学的改变;Transwell实验显示千金子处理Renca细胞后,穿越小室膜细胞数量明显减少且(P<0.05);划痕实验中对照组肾癌细胞侵袭的距离为(0.72±0.03)mm,加入药物作用48 h后,实验组肾癌细胞的侵袭距离为(0.62±0.03)mm,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术显示千金子处理Renca细胞后,处于G0/G1期的细胞明显增多而处于S期、G2/M期的细胞降低(P<0.05)。结论千金子对肾癌细胞的影响是将其阻断在细胞周期的G0/G1期、并且能够抑制肾癌细胞的侵袭和转移。 展开更多
关键词 renca细胞 侵袭 转移 细胞周期 千金子
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千金子对表达人G250基因小鼠renca细胞增殖的影响 被引量:5
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作者 赵俊峰 郑少斌 +5 位作者 杨旭凯 张林超 潘世杰 陈瑞廷 王蒙蒙 李振东 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2017年第5期1065-1067,共3页
目的观察中药千金子对表达人G250基因小鼠renca细胞增殖的影响。方法利用DNA重组技术将成功扩增的人G250基因编码区序列定向插入到pRNAT-U6.1/Neo质粒真核表达载体中,得到重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-G250,将该质粒转染renca小鼠细胞,经G41... 目的观察中药千金子对表达人G250基因小鼠renca细胞增殖的影响。方法利用DNA重组技术将成功扩增的人G250基因编码区序列定向插入到pRNAT-U6.1/Neo质粒真核表达载体中,得到重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-G250,将该质粒转染renca小鼠细胞,经G418筛选获得抗性单克隆,扩大培养后经Western印迹鉴定人G250基因的表达。将该细胞在不同浓度含千金子二萜醇(111μg/ml、333μg/ml、1 000μg/ml、3 000μg/ml、9 000μg/ml)的培养基中培养,MTT法观察千金子二萜醇对表达人G250基因小鼠renca细胞体外增殖情况的影响。结果与空白对照组相比,24 h后实验组细胞增殖速度减慢,并随浓度增加增殖速度减慢越明显,空白组与3 000μg/ml及9 000μg/ml浓度组比较差异有明显统计学(P=0.006,P=0.000)。结论中药千金子使表达人G250基因小鼠renca细胞增殖能力降低,renca细胞体外生长被显著抑制。 展开更多
关键词 G250基因 细胞增殖 renca细胞 肿瘤相关抗原 千金子
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中药千金子对肾癌Renca细胞凋亡的影响及其机制 被引量:5
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作者 赵俊峰 李豪 +6 位作者 雷震 张嘉琪 张林超 孙继建 潘世杰 苏晓斐 肖耀军 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第21期5334-5336,共3页
目的探讨中药千金子对肾癌Renca细胞凋亡的影响及其机制,进一步揭示其抗肿瘤活性的分子生物学机制。方法以小鼠肾癌Renca细胞为研究对象,使用最有效浓度(9000μg/ml)千金子二萜醇作用Renca细胞前后,运用流式细胞术检测千金子对其凋亡的... 目的探讨中药千金子对肾癌Renca细胞凋亡的影响及其机制,进一步揭示其抗肿瘤活性的分子生物学机制。方法以小鼠肾癌Renca细胞为研究对象,使用最有效浓度(9000μg/ml)千金子二萜醇作用Renca细胞前后,运用流式细胞术检测千金子对其凋亡的影响;采用十二烷基硫代硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术检测千金子对肾癌细胞中凋亡蛋白Caspase-3、Bcl-2及Bax表达的影响。结果流式细胞术显示,千金子作用于肾癌Renca细胞后,无论早期凋亡率还是晚期凋亡率与对照组相比较均明显提高(P<0.05);Western印迹结果显示,与对照组相比较,实验组促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达量明显增多、抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减少(P<0.05)。结论千金子可诱导肾癌Renca细胞凋亡,其分子生物学机制可能与影响肾癌Renca细胞中促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 千金子 凋亡 renca细胞 BAX BCL-2 CASPASE-3
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Renca细胞来源的外泌体活化髓源抑制性细胞对细胞毒性T细胞的抑制效应 被引量:2
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作者 徐浩语 王和西 +1 位作者 黎楠 张尧 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期923-930,共8页
目的探讨Renca细胞来源的外泌体(exosomes)活化的髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs)对肾癌抗原特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic lymphocytes, CTLs)体外增殖和杀伤效应的抑制作用。方法超速离心法从Renca细胞无... 目的探讨Renca细胞来源的外泌体(exosomes)活化的髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs)对肾癌抗原特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic lymphocytes, CTLs)体外增殖和杀伤效应的抑制作用。方法超速离心法从Renca细胞无血清上清液中提取出exosomes,流式细胞术检测exosomes对MDSCs的活化效应。分离并培养小鼠树突状细胞(dendritic cells, DCs)和CD8+T细胞,制备DCs活化的肾癌抗原特异性CTLs。磁珠分选exosomes活化的MDSCs,羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)荧光染色和流式细胞术检测MDSCs对CTLs增殖的抑制作用。将MDSCs、CTLs和Renca细胞体外共培养,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放实验检测exosomes活化的MDSCs对CTLs杀伤效应的抑制作用。结果 Renca细胞来源的exosomes有效地诱导了MDSCs的聚集,成功制备了DCs并获得了DCs诱导的肾癌抗原特异性CTLs。与exosomes活化的MDSCs共培养后的CTLs其增殖指数和杀伤率明显低于与未活化的MDSCs共培养后的CTLs和单独的CTLs(P<0.05)。结论 Renca细胞来源的exosomes活化的MDSCs抑制了肾癌抗原特异性CTLs的体外增殖和杀伤效应,可能在肾癌免疫逃逸中扮演重要作用。 展开更多
关键词 renca细胞 EXOSOMES MDSCS CTLS 抑制效应
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Renca细胞exosomes所诱导的CD8^+T细胞的特异性杀伤作用
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作者 徐浩语 黎楠 张尧 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期567-573,共7页
目的检测Renca细胞exosomes对CD8^+T细胞的激活效应以及exosomes负载的树突状细胞(DCs)所诱导的CD8^+T细胞对Renca细胞特异性杀伤作用。方法采用超速离心法从Renca细胞无血清上清液中提取出exosomes并鉴定,体内通过流式和ELISA;体外通过... 目的检测Renca细胞exosomes对CD8^+T细胞的激活效应以及exosomes负载的树突状细胞(DCs)所诱导的CD8^+T细胞对Renca细胞特异性杀伤作用。方法采用超速离心法从Renca细胞无血清上清液中提取出exosomes并鉴定,体内通过流式和ELISA;体外通过CFSE荧光染色和ELISA检测exosomes对CD8^+T细胞的激活效应。小鼠骨髓分离出DCs并进行体外培养,用exosomes冲击成熟的DCs然后活化CD8^+T细胞,测定其对Renca、4T1、CT26细胞的杀伤率。结果透射电镜下观察exosomes是直径在30~100 nm的盘状囊泡,Western blot检测exosomes高表达MHC-1和HSP70。Exosomes能在体内和体外促进CD8^+T细胞的增殖和激活效应。在体外杀伤实验中,exosomes冲击的DCs所诱导的CD8^+T细胞相对于4T1和CT26细胞,其对Renca细胞具有明显更强的杀伤作用。结论 Renca细胞exosomes对CD8^+T细胞具有明显的激活作用且exosomes负载的DCs所诱导的CD8^+T细胞对自体肿瘤细胞具有强烈的特异性杀伤能力。 展开更多
关键词 renca细胞 EXOSOMES CD8^+T细胞 激活 特异性杀伤
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千金子二萜醇对人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞体外生长的抑制作用 被引量:4
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作者 赵俊峰 杨旭凯 +4 位作者 郑少斌 潘世杰 孙继建 王蒙蒙 李振东 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第23期5818-5819,共2页
目的观察中药千金子体外对人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞的抑制作用。方法将人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞在不同浓度含千金子二萜醇(111、333、1 000、3 000、9 000μg/ml)的培养基中培养,MTT法观察千金子二萜醇对细胞体外... 目的观察中药千金子体外对人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞的抑制作用。方法将人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞在不同浓度含千金子二萜醇(111、333、1 000、3 000、9 000μg/ml)的培养基中培养,MTT法观察千金子二萜醇对细胞体外增殖情况的影响。结果24 h后两实验组细胞增殖速度减慢,并随浓度增加增殖速度减慢明显;3 000、9 000μg/ml浓度组有统计学差异(7860细胞:P=0.005,P=0.002;renca细胞:P=0.005,P=0.003),以9 000μg/ml浓度组作用最强,人肾癌7860细胞生长抑制率达76.03%,小鼠肾癌renca细胞生长抑制率为64.65%;与空白对照比较差异显著(P=0.002,P=0.003);两实验组细胞增殖比较没有明显差异(P>0.05)。结论中药千金子体外对人肾癌7860细胞和小鼠肾癌renca细胞有明显抑制作用,使两细胞体外生长被显著抑制,证实千金子二萜醇是一种有临床应用前景的抗肿瘤中药提取物。 展开更多
关键词 千金子二萜醇 人肾癌7860细胞 小鼠肾癌renca细胞
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不同浓度千金子对G250基因高表达肾癌Renca细胞株Livin蛋白表达的影响研究 被引量:2
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作者 董建设 赵俊峰 +4 位作者 陈瑞廷 张林超 孙继建 潘世杰 杨锦建 《临床研究》 2017年第4期1-3,共3页
目的观察不同浓度千金子对G250基因高表达肾癌Renca细胞株Livin蛋白表达的影响.方法将125只大鼠分为正常对照组、模型对照组、高剂量千金子治疗组、中剂量千金子治疗组以及低剂量千金子治疗组,每组大鼠25只.正常对照组正常饲养,其余各... 目的观察不同浓度千金子对G250基因高表达肾癌Renca细胞株Livin蛋白表达的影响.方法将125只大鼠分为正常对照组、模型对照组、高剂量千金子治疗组、中剂量千金子治疗组以及低剂量千金子治疗组,每组大鼠25只.正常对照组正常饲养,其余各组采用皮下注射法构建肾脏移植瘤模型.高剂量千金子治疗组、中剂量千金子治疗组以及低剂量千金子治疗组分别于成瘤5d后连续给予千金子治疗,注射浓度分别为20mg/mL、10mg/mL以及2.5mg/mL,剂量为200mg/kg,1次/d,连续15d接受千金子治疗.正常对照组与模型对照组造模后给予注射等剂量生理盐水.比较各组大鼠抑瘤率、G250基因蛋白、Livin基因蛋白的表达.结果与模型对照组相比,高、中、低剂量千金子治疗组5-25d平均抑瘤率较高(P〈0.05),且各组平均抑瘤率呈逐渐增高趋势;与中剂量千金子治疗组以及低剂量千金子治疗组相比,高剂量千金子治疗组平均抑瘤率较高(P〈0.05).与正常对照组相比,模型对照组,高、中、低剂量千金子治疗组肾脏组织中Livin基因表达水平较低(P〈0.05);G250基因表达水平较高(P〈0.05);与中剂量千金子治疗组以及低剂量千金子治疗组相比,高剂量千金子治疗组Livin基因表达水平较高(P〈0.05);G250基因表达水平较低(P〈0.05).结论高浓度千金子对肾癌Renca细胞株具有良好的抑制作用,可能与下调G250基因表达,上调Livin蛋白表达相关. 展开更多
关键词 千金子 G250基因 肾癌renca细胞 LIVIN蛋白
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