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外源性重组激活基因在人类细胞中的表达研究
1
作者 曾艳 孙洪海 +5 位作者 王敏 刘旭 严丹丹 孙龙飞 刘志超 韦星呈 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第16期2001-2005,共5页
目的:通过恢复RAG-1、RAG-2分子的表达挽救功能性淋巴细胞的分化、发育,探讨从基因水平上根治RAG-免疫缺陷病的技术方法,为进一步进行基因治疗打下基础。方法:(1)采用RT-PCR方法克隆人类RAG-1、RAG-2编码基因,同时构建RAG-1、RAG-2真核... 目的:通过恢复RAG-1、RAG-2分子的表达挽救功能性淋巴细胞的分化、发育,探讨从基因水平上根治RAG-免疫缺陷病的技术方法,为进一步进行基因治疗打下基础。方法:(1)采用RT-PCR方法克隆人类RAG-1、RAG-2编码基因,同时构建RAG-1、RAG-2真核表达载体;(2)采用转染方法得到转染细胞体,使目的基因在人类细胞得到表达。结果:阳性克隆的测序结果与人类RAG-1、RAG-2基因完全相同,并且分别在获得重组细胞中检测到782 bp的人类RAG-1 mRNA转录产物和378 bp的人类RAG-2 mRNA转录产物,而pcDNA3.1空白对照未检测到任何hRAG-1 mRNA。结论:成功克隆了人类RAG-1、RAG-2基因,并在转染的人类细胞中获得了外源RAG-1、RAG-2的mRNA表达。 展开更多
关键词 重组激活基因-1(rag-1) 重组激活基因-2(rag-2) 真核表达载体 基因表达
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尼罗罗非鱼整胚原位杂交技术的建立和初步应用 被引量：3
2
作者 曹建萌 卢迈新 +2 位作者 叶星 曾祖聪 高风英 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1847-1854,共8页
为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚... 为了研究尼罗罗非鱼胚胎发育和器官形成过程中基因功能和基因表达图式,本研究建立了尼罗罗非鱼的整胚原位杂交流程。尼罗罗非鱼的胚胎具有卵黄大、不透明、色素出现早等特点,因此现有鱼类整胚原位杂交方法不能完全适用于尼罗罗非鱼的胚胎,故本研究做了相应的调整和优化:通过提高H2O2的浓度和添加KOH,改良了尼罗罗非鱼胚胎的色素去除方法;使用冷丙酮代替蛋白酶K在提高胚胎通透性的同时保持胚胎完整;减少了探针回收和抗体回收后的洗涤次数,完善了结果的图像采集和胚胎保存方案。使用尼罗罗非鱼的重组激活基因Rag1作为探针基因,整胚原位杂交结果显示Rag1基因表达的位置与已报道的斑马鱼和日本青鳉的Rag1基因在胚胎中的表达位置高度保守,胚胎完整,基因表达位置清晰可见,表明此套尼罗罗非鱼的整胚原位杂交技术流程成功有效。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 整胚原位杂交 胚胎发育 重组激活基因(rag1)
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V(D)J重组起始阶段的研究进展与展望
3
作者 季延红 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期261-265,共5页
重组激活基因(recombination activating gene)1和2编码的RAG1和RAG2蛋白通过对V(D)J重组起始阶段的调节作用,使得抗原受体基因重排严格地按组织、细胞发育阶段进行。本文将就RAG蛋白结合和催化断裂抗原受体基因机制作简要介绍。这些新... 重组激活基因(recombination activating gene)1和2编码的RAG1和RAG2蛋白通过对V(D)J重组起始阶段的调节作用,使得抗原受体基因重排严格地按组织、细胞发育阶段进行。本文将就RAG蛋白结合和催化断裂抗原受体基因机制作简要介绍。这些新发现明确了体内V(D)J重组发生的部位以及其出现错误时可能发生的地方,提示V(D)J重组机制不仅对淋巴细胞正常发育起关键性作用,而且对基因组不稳定性和淋巴系统恶性肿瘤的发生也具有重要意义。 展开更多
关键词 重组激活基因蛋白1 重组激活基因蛋白2 V(D)J重组
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小鼠与人重排活化基因2启动子的比较
4
作者 赵文璞 岸裕幸 村口笃 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期707-711,共5页
目的　通过比较小鼠与人重排活化基因 2 (RAG2 )启动子 ,试图寻找与小鼠RAG2启动子特异性结合的转录因子。方法　采用表达luciferase的报告基因载体检测启动子的活性。采用EMSA(electrophoresismobilityshiftassay)检测与启动子结合的... 目的　通过比较小鼠与人重排活化基因 2 (RAG2 )启动子 ,试图寻找与小鼠RAG2启动子特异性结合的转录因子。方法　采用表达luciferase的报告基因载体检测启动子的活性。采用EMSA(electrophoresismobilityshiftassay)检测与启动子结合的转录因子。结果　小鼠RAG2启动子 - 6 0 - 4 1区域存在富G的GA盒子 ,而人RAG2启动子在相应位置却是富A区。突变实验结果显示 ,GA盒子是小鼠RAG2启动子完整活性所必须的。EMSA结果显示 ,Sp1 Sp3结合在小鼠RAG2启动子 - 6 0 - 4 1区域 ,并且Sp1能够协同Pax 5、c Myb活化小鼠RAG2启动子。结论　尽管小鼠与人RAG2启动子同源性很高 ,但它们结合的转录因子和功能有所不同。 展开更多
关键词 小鼠 人 重排活化基因2 启动子 比较 免疫球蛋白
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