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共表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒
被引量：
11
1
作者
韦栋平
刘玉良
+2 位作者
邵卫星
卢建红
刘秀梵
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第3期286-290,共5页
应用RT PCR扩增出新城疫病毒F4 8E8株融合蛋白 (F)基因 ,将其克隆入pGEM Teasyvector构建重组质粒pGEM TF并进行测序确证。分别从pGEM T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株 (A chicken china F 1 998)血凝素 (HA)基因 ,通过一系列...
应用RT PCR扩增出新城疫病毒F4 8E8株融合蛋白 (F)基因 ,将其克隆入pGEM Teasyvector构建重组质粒pGEM TF并进行测序确证。分别从pGEM T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株 (A chicken china F 1 998)血凝素 (HA)基因 ,通过一系列分子生物学操作步骤插入到质粒pFPV7S中的鸡痘病毒基因组复制非必需片段构建重组质粒p7SHF ,其中F基因和HA基因分别由鸡痘病毒启动子PE L和合成启动子PS调控。最后将P1 1 LacZ报告基因表达盒插入质粒p7SHF获得转移载体pFPVHF ,用以转染已预先感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株的鸡胚成纤维细胞 (CEF)。通过在含有X Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化重组病毒。PCR和Southernblot检测证实了F基因和HA基因已插入鸡痘病毒的基因组 ;间接免疫荧光试验结果表明重组病毒能够同时正确表达HA和F蛋白。
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关键词
新城疫病毒
H9亚型禽流感病毒
重组鸡痘病毒
融合蛋白
血凝素
下载PDF
职称材料
甲型流感病毒重组血凝素蛋白的真核表达及免疫效力分析
被引量：
2
2
作者
刘京
龚铮
+7 位作者
年悬悬
邓涛
周蓉
张国梅
李雪丹
张哲罡
张家友
杨晓明
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期31-44,共14页
利用真核表达系统稳定表达HA重组蛋白并评价其免疫原性及攻毒保护效果,为重组流感亚单位疫苗的研制提供更多的理论基础。本研究以H1N1型流感病毒HA胞外区域序列为目的基因构建重组质粒KS001-HA并转染至CHO细胞得到表达重组蛋白rHA的单...
利用真核表达系统稳定表达HA重组蛋白并评价其免疫原性及攻毒保护效果,为重组流感亚单位疫苗的研制提供更多的理论基础。本研究以H1N1型流感病毒HA胞外区域序列为目的基因构建重组质粒KS001-HA并转染至CHO细胞得到表达重组蛋白rHA的单克隆细胞株,通过离子交换层析法纯化rHA。将rHA与佐剂联合免疫小鼠以评估免疫原性,并对免疫后的小鼠进行攻毒,监测小鼠存活率和体重变化,检测其肺组织病毒载量,并分析肺组织的病理变化。重组质粒KS001-HA在CHO细胞中稳定整合并分泌表达rHA蛋白,其相对分子质量约70 kD,经PNGaseF酶处理后,蛋白大小变为60kD。纯化后rHA蛋白纯度>95%。加强免疫后小鼠血清抗体效价显著增强,佐剂配伍免疫效果优于rHA单独免疫,其中HA203佐剂配伍组15、30、60μg剂量组免疫效应显著高于阳性对照组H1N1疫苗原液组。攻毒后HA203佐剂配伍组无小鼠死亡,小鼠体重平均下降率低于10%,肺组织肺泡结构清晰,仅见肺泡壁轻度增厚,伴随少量的炎性细胞浸润,仅检测到少量呈灶性分布的棕黄色颗粒。本研究成功构建了重组质粒KS001-HA,于CHO细胞中表达,并筛选出稳定表达目的蛋白的单克隆细胞株。rHA蛋白以单体形式存在且糖基化丰富。rHA蛋白独自作用小鼠产生的免疫原性较低且不能保护小鼠抵抗H1N1型流感病毒的攻击,rHA蛋白联合佐剂免疫小鼠后具有较好的免疫原性,以HA203佐剂效果最好。HA蛋白配伍HA203佐剂可以诱导小鼠产生特异性体液免疫保护小鼠抵御H1N1型流感病毒的攻击,减少炎性细胞浸润,有效抑制病毒的复制。
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关键词
流感亚单位疫苗
重组蛋白血凝素
免疫原性
原文传递
麻疹病毒融合蛋白(F)和血凝素(HA)在痘苗病毒中的表达
被引量：
2
3
作者
徐水婵
阮力
+3 位作者
阎秀军
许文波
王湛
朱既明
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
1993年第4期301-307,共7页
将麻疹病毒F和HA基因插入到痘苗病毒中,分别处于痘苗启动子P7.5与P11控制下,获得重组病毒vLmF和vCmH。用抗F多肽抗体和HA单抗进行ELISA检测,结果表明,两株重组病毒均能表达相应的麻疹蛋白。蛋白印迹显示重组病毒表达产物在分子大小,蛋...
将麻疹病毒F和HA基因插入到痘苗病毒中,分别处于痘苗启动子P7.5与P11控制下,获得重组病毒vLmF和vCmH。用抗F多肽抗体和HA单抗进行ELISA检测,结果表明,两株重组病毒均能表达相应的麻疹蛋白。蛋白印迹显示重组病毒表达产物在分子大小,蛋白切割和糖化方面与麻疹病毒糖蛋白一致。两株重组病毒分别免疫家兔都能产生较高滴度的麻疹抗体,这些抗体具有中和作用和血溶抑制作用。此外,vCmH产生的抗体还具有血凝抑制作用。
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关键词
重组
痘苗病毒
麻疹病毒
融合蛋白
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职称材料
题名
共表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒
被引量：
11
1
作者
韦栋平
刘玉良
邵卫星
卢建红
刘秀梵
机构
扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第3期286-290,共5页
基金
国家"8 63计划"( 2 0 0 1AA2 13 0 41)~~
文摘
应用RT PCR扩增出新城疫病毒F4 8E8株融合蛋白 (F)基因 ,将其克隆入pGEM Teasyvector构建重组质粒pGEM TF并进行测序确证。分别从pGEM T和pUCHA切下F基因和H9亚型禽流感病毒F株 (A chicken china F 1 998)血凝素 (HA)基因 ,通过一系列分子生物学操作步骤插入到质粒pFPV7S中的鸡痘病毒基因组复制非必需片段构建重组质粒p7SHF ,其中F基因和HA基因分别由鸡痘病毒启动子PE L和合成启动子PS调控。最后将P1 1 LacZ报告基因表达盒插入质粒p7SHF获得转移载体pFPVHF ,用以转染已预先感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株的鸡胚成纤维细胞 (CEF)。通过在含有X Gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化重组病毒。PCR和Southernblot检测证实了F基因和HA基因已插入鸡痘病毒的基因组 ;间接免疫荧光试验结果表明重组病毒能够同时正确表达HA和F蛋白。
关键词
新城疫病毒
H9亚型禽流感病毒
重组鸡痘病毒
融合蛋白
血凝素
Keywords
Newcastle
disease
virus
strain
F48E8,
H9
subtype
avian
influenza
virus,
recombinant
fowlpox
virus,
Fusion
protein
,
hemagglutinin
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
甲型流感病毒重组血凝素蛋白的真核表达及免疫效力分析
被引量：
2
2
作者
刘京
龚铮
年悬悬
邓涛
周蓉
张国梅
李雪丹
张哲罡
张家友
杨晓明
机构
武汉生物制品研究所、病毒性疫苗研究二室
国家联合疫苗工程技术研究中心
中国生物技术股份有限公司
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期31-44,共14页
基金
国家重大科学工程建设项目计划(项目号:2016Z09106003-008),题目:四价流感病毒裂解疫苗的研制。
文摘
利用真核表达系统稳定表达HA重组蛋白并评价其免疫原性及攻毒保护效果,为重组流感亚单位疫苗的研制提供更多的理论基础。本研究以H1N1型流感病毒HA胞外区域序列为目的基因构建重组质粒KS001-HA并转染至CHO细胞得到表达重组蛋白rHA的单克隆细胞株,通过离子交换层析法纯化rHA。将rHA与佐剂联合免疫小鼠以评估免疫原性,并对免疫后的小鼠进行攻毒,监测小鼠存活率和体重变化,检测其肺组织病毒载量,并分析肺组织的病理变化。重组质粒KS001-HA在CHO细胞中稳定整合并分泌表达rHA蛋白,其相对分子质量约70 kD,经PNGaseF酶处理后,蛋白大小变为60kD。纯化后rHA蛋白纯度>95%。加强免疫后小鼠血清抗体效价显著增强,佐剂配伍免疫效果优于rHA单独免疫,其中HA203佐剂配伍组15、30、60μg剂量组免疫效应显著高于阳性对照组H1N1疫苗原液组。攻毒后HA203佐剂配伍组无小鼠死亡,小鼠体重平均下降率低于10%,肺组织肺泡结构清晰,仅见肺泡壁轻度增厚,伴随少量的炎性细胞浸润,仅检测到少量呈灶性分布的棕黄色颗粒。本研究成功构建了重组质粒KS001-HA,于CHO细胞中表达,并筛选出稳定表达目的蛋白的单克隆细胞株。rHA蛋白以单体形式存在且糖基化丰富。rHA蛋白独自作用小鼠产生的免疫原性较低且不能保护小鼠抵抗H1N1型流感病毒的攻击,rHA蛋白联合佐剂免疫小鼠后具有较好的免疫原性,以HA203佐剂效果最好。HA蛋白配伍HA203佐剂可以诱导小鼠产生特异性体液免疫保护小鼠抵御H1N1型流感病毒的攻击,减少炎性细胞浸润,有效抑制病毒的复制。
关键词
流感亚单位疫苗
重组蛋白血凝素
免疫原性
Keywords
Influenza
subunit
vaccine
recombinant
protein
hemagglutinin
immunogenicity
分类号
R373.1 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
麻疹病毒融合蛋白(F)和血凝素(HA)在痘苗病毒中的表达
被引量：
2
3
作者
徐水婵
阮力
阎秀军
许文波
王湛
朱既明
机构
中国预防医学科学院病毒学研究所
出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
1993年第4期301-307,共7页
文摘
将麻疹病毒F和HA基因插入到痘苗病毒中,分别处于痘苗启动子P7.5与P11控制下,获得重组病毒vLmF和vCmH。用抗F多肽抗体和HA单抗进行ELISA检测,结果表明,两株重组病毒均能表达相应的麻疹蛋白。蛋白印迹显示重组病毒表达产物在分子大小,蛋白切割和糖化方面与麻疹病毒糖蛋白一致。两株重组病毒分别免疫家兔都能产生较高滴度的麻疹抗体,这些抗体具有中和作用和血溶抑制作用。此外,vCmH产生的抗体还具有血凝抑制作用。
关键词
重组
痘苗病毒
麻疹病毒
融合蛋白
Keywords
recombinant
vaccinia
virus
Fusion
protein
of
measles
virus
hemagglutinin
of
measles
virus
Gene
expression
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
共表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒
韦栋平
刘玉良
邵卫星
卢建红
刘秀梵
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
11
下载PDF
职称材料
2
甲型流感病毒重组血凝素蛋白的真核表达及免疫效力分析
刘京
龚铮
年悬悬
邓涛
周蓉
张国梅
李雪丹
张哲罡
张家友
杨晓明
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
2
原文传递
3
麻疹病毒融合蛋白(F)和血凝素(HA)在痘苗病毒中的表达
徐水婵
阮力
阎秀军
许文波
王湛
朱既明
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
1993
2
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