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小鼠IL-4重组质粒的构建及目的蛋白的表达和纯化 被引量：2
1
作者 罗晓蕾 任潇潇 +4 位作者 黄浓郁 邱吉 李倩 周西坤 李炯 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期579-583,共5页
目的构建重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定。方法将优化后的小鼠IL-4cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中经IPTG诱导表达得... 目的构建重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定。方法将优化后的小鼠IL-4cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中经IPTG诱导表达得到包涵体。经复性处理后,依次用阴离子交换柱和分子筛纯化蛋白。对纯化得到的蛋白用Western blot检验免疫学特异性,用mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖实验和动物实验测定其生物学活性。结果经酶切和测序证实重组质粒pET32/rmIL-4构建成功。诱导得到的包涵体用3mol/L盐酸胍溶液洗涤后溶于加有β-巯基乙醇的7mol/L盐酸胍溶液中变性,在pH9.5的条件下梯度透析复性。纯化出的蛋白经Western blot鉴定,能与抗小鼠IL-4抗体特异性结合;经细胞和动物实验鉴定,rmIL-4蛋白具有生物学活性,能刺激mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖,使小鼠体内细胞因子发生从TH1到TH2的漂移。结论成功制备了高纯度、具有生物学活性的小鼠IL-4,为进一步研究其生物学功能提供了条件。 展开更多
关键词 重组小鼠白细胞介素-4蛋白纯化生物学活性
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