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呼吸道合胞病毒PreF和PostF重组蛋白疫苗的免疫原性评价
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作者 陈佳敏 肖红剑 +3 位作者 杨耀云 张恒 李智华 李倩倩 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期110-119,共10页
目的对比呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(PreF)和融合后F蛋白(PostF)的免疫原性差异。方法通过SDS-PAGE及Western blot鉴定PreF和PostF的表达,使用Octet仪器检测F蛋白与特异性抗体的亲和力,用PreF和PostF免疫小鼠,检测免疫血清的结合... 目的对比呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(PreF)和融合后F蛋白(PostF)的免疫原性差异。方法通过SDS-PAGE及Western blot鉴定PreF和PostF的表达,使用Octet仪器检测F蛋白与特异性抗体的亲和力,用PreF和PostF免疫小鼠,检测免疫血清的结合抗体与中和抗体差异。结果PreF经改造后以稳定的三聚体形式存在,与单抗D25、8897、AM14、Palivizumab以及Motavizumab均具有很高的亲和力,但PostF缺乏表位Ø构象,并呈现单体构象,与D25、8897、AM14并无明显结合。PreF和PostF免疫小鼠的研究发现,AS01佐剂比铝佐剂更能诱导出高滴度结合抗体和针对RSV Long株的中和抗体。PreF与PostF免疫后诱导的结合抗体与PreF的结合能力相当,PostF免疫后诱导的结合抗体与PostF的结合水平显著高于PreF。结论PreF拥有更多的抗体结合表位,改造后稳定的PreF三聚体重组蛋白能够诱导更强的中和抗体。同时,AS01佐剂免疫效果优于铝佐剂。因此,基于PreF稳定的三聚体结构改造及佐剂的研发对于RSV疫苗的发展至关重要。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 重组f蛋白 融合前构象 佐剂 免疫评价
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鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原的制备及其免疫保护效果的研究 被引量:5
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作者 王栋 黄顺军 +5 位作者 邢丽 郭习勤 韩岳 罗德炎 李敏 王希良 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期287-291,共5页
为制备鼠疫耶尔森氏菌F1-V重组融合蛋白抗原,观察其免疫原性和免疫保护效果,通过疏水层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原.用氢氧化铝凝胶吸附制备试验性鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原,皮下接种健康BALB/c小鼠,... 为制备鼠疫耶尔森氏菌F1-V重组融合蛋白抗原,观察其免疫原性和免疫保护效果,通过疏水层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原.用氢氧化铝凝胶吸附制备试验性鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原,皮下接种健康BALB/c小鼠,ELISA检测血清F1-V抗体效价、MTT法测定淋巴细胞增殖能力,进一步用400LD50鼠疫耶尔森氏菌141标准毒株皮下攻毒,观察动物的存活情况.通过三步柱层析纯化获得的鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原纯度达到90%以上.氢氧化铝凝胶吸附的鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原免疫BALB/c小鼠三次,血清抗F1-V抗体效价为1∶(51200±800),对耶尔森氏菌141强毒株攻击的保护率是90%.上述结果表明,制备的鼠疫F1-V重组融合蛋白抗原具有良好的免疫原性和免疫保护效果,为研制鼠疫F1-V重组融合蛋白疫苗奠定了基础. 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森氏菌 f1-V重组融合蛋白抗原 免疫保护效果
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产肠毒素大肠杆菌F41菌毛抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:2
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作者 何晓杰 侯喜林 +3 位作者 余丽芸 王桂华 刘建奎 魏春华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期333-337,共5页
以纯化的重组F41菌毛蛋白作为检测抗原,建立了检测产肠毒素大肠杆菌F41菌毛抗体的间接ELISA方法。经优化筛选的最佳反应条件:包被抗原浓度为0.26μg/孔,血清稀释度为1∶800,酶标二抗工作浓度为1∶6 000,30 g/L明胶封闭1 h,底物作用时间... 以纯化的重组F41菌毛蛋白作为检测抗原,建立了检测产肠毒素大肠杆菌F41菌毛抗体的间接ELISA方法。经优化筛选的最佳反应条件:包被抗原浓度为0.26μg/孔,血清稀释度为1∶800,酶标二抗工作浓度为1∶6 000,30 g/L明胶封闭1 h,底物作用时间为10 min。经试验验证,该方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强等特点。用建立的间接ELISA方法与PCR方法进行符合性试验,总符合率为97.4%。表明,该方法可以用于产肠毒素大肠杆菌F41菌毛抗体的检测。 展开更多
关键词 产肠毒素性大肠杆菌 重组f41菌毛蛋白 间接酶联免疫吸附试验
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中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析
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作者 房婷 任军 +5 位作者 张金龙 尹可欣 杨秀旭 于蕊 张晓鹏 于长明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期95-104,共10页
重组F1-V融合蛋白(rF1-V)是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表达条件,并对条件进行了优化和放大,确定的中试发酵工艺为:在重组菌对数生长期中期加入50μmol/LIPTG,25℃诱导表达5h。通过硫酸铵... 重组F1-V融合蛋白(rF1-V)是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表达条件,并对条件进行了优化和放大,确定的中试发酵工艺为:在重组菌对数生长期中期加入50μmol/LIPTG,25℃诱导表达5h。通过硫酸铵分级沉淀、离子交换、疏水相互作用层析和凝胶过滤四步纯化,最终得到纯度为99%、回收率大于20%且各项检测指标合格的蛋白。在此基础上,将蛋白使用氢氧化铝佐剂进行吸附,在小鼠体内进行了免疫原性研究。ELISA测定两次皮下免疫后血清的抗体滴度。比较融合蛋白免疫组(rF1-V)与单一抗原免疫组(rF1、rV)以及联合抗原免疫组(rF1+rV)之间体液免疫反应的差异。结果显示:20μgrF1-V免疫剂量组诱导的抗F1抗体滴度明显高于其他组,抗V抗体滴度与其他组相比没有显著差异。表明本工艺制备的rF1-V抗原有望作为鼠疫亚单位疫苗的主要组分。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 重组f1-V融合蛋白 发酵 分离纯化 免疫原性 亚单位疫苗
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粉尘螨Ⅲ类重组变应原致敏的小鼠哮喘模型致敏效果分析 被引量:4
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作者 唐小牛 马红丹 +1 位作者 姜玉新 李朝品 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期880-884,共5页
目的探讨粉尘螨Ⅲ类重组变应原(Der f 3)诱导的小鼠哮喘模型的致敏效果。方法 30只6~8周龄雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为PBS组(阴性对照组)、卵清蛋白(OVA)组(阳性对照组)和Der f 3组(实验组),OVA组和Der f 3组分别使用OVA和纯化Der f ... 目的探讨粉尘螨Ⅲ类重组变应原(Der f 3)诱导的小鼠哮喘模型的致敏效果。方法 30只6~8周龄雌性SPF级BALB/c小鼠随机分为PBS组(阴性对照组)、卵清蛋白(OVA)组(阳性对照组)和Der f 3组(实验组),OVA组和Der f 3组分别使用OVA和纯化Der f 3蛋白于第0、7、14d进行腹腔注射致敏,于第21d开始雾化吸入,连续7d,PBS组则换成PBS进行腹腔注射和雾化吸入。最后一次雾化吸入24h后,分别观察肺组织病理变化、支气管肺泡灌洗液(BLAF)中的白细胞计数,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定BLAF和脾细胞培养上清中IL-4、IL-2、IL-17和IFN-γ的含量及血清中IgG1、IgE抗体水平变化。结果 OVA组和Der f 3组小鼠肺部支气管、血管粘膜下及周围肺组织有明显的炎性细胞浸润、支气管上皮细胞部分断裂及脱落,血管壁明显水肿等,而PBS组未见明显病理改变;Der f 3组的BALF中白细胞总数[(19.99±1.03)×106个/mL]及嗜酸性粒细胞(EOS)[(1.81±0.07)×106个/mL]计数均明显高于PBS组(P<0.01);与PBS组相比:BALF中IL-4[(80.99±9.06)pg/mL]、IL-17[(209.69±31.86)pg/mL]呈高水平表达(P<0.01),而IL-2[(8.29±1.27)pg/mL]和IFN-γ[(55.04±18.85)pg/mL]含量则显著下降(P<0.01);上述指标在脾细胞培养上清中出现类似的变化。Der f 3组血清中IgE[(31.92±2.68)U/mL]、IgG1[(16.46±4.32)μg/mL]的含量表现为Th2型反应增强趋势;但OVA组和Der f 3组间所有指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论粉尘螨重组Der f 3蛋白可成功建立小鼠变态反应性气道及肺部炎症动物模型。 展开更多
关键词 粉尘螨 重组Der f3蛋白 致敏效果 哮喘模型
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