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应用ELISPOT试验测定重组卡介苗诱导的T细胞应答 被引量：7
1
作者 焦新安 RichardLo-man +4 位作者 EdithD’eriaud Brigitte Gicquel Nathalie Winter Claude Leclerc 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期46-49,共4页
应用免疫磁性分离技术去除免疫小鼠脾脏细胞中CD4+或CD8+T细胞后 ,在酶联免疫斑点试验中证实表达大肠杆菌MalE蛋白的重组卡介苗 (rBCG·MalE)诱导的T细胞应答是CD4+T细胞依赖的。对MalE、PPD特异T细胞应答的动态分析结果表明 ,rBCG&... 应用免疫磁性分离技术去除免疫小鼠脾脏细胞中CD4+或CD8+T细胞后 ,在酶联免疫斑点试验中证实表达大肠杆菌MalE蛋白的重组卡介苗 (rBCG·MalE)诱导的T细胞应答是CD4+T细胞依赖的。对MalE、PPD特异T细胞应答的动态分析结果表明 ,rBCG·MalE、BCG诱导的特异CD4+T细胞应答存在Th1/Th2平衡转换现象 ,即起始阶段为Th1应答 ,一段时间后出现Th2应答 ,并逐步形成Th1/Th2混合应答。这些结果 ,为分枝杆菌T细胞应答规律提供了新的认识 ,同时 ,亦表明BCG是优良的外源抗原表达与运送载体。 展开更多
关键词 ELISPOT 重组bcg T细胞 免疫应 卡介苗
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重组卡介苗及猪苓多糖对荷瘤小鼠巨噬细胞NO释放量的影响 被引量：8
2
作者 梅玉屏 曾星 +1 位作者 黄羽 黄建华 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期292-295,共4页
目的　观察重组卡介苗 (rBCG)和中药猪苓多糖(PPS) ,对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的影响。方法将黑色素瘤细胞株B16接种于小鼠左大腿外侧皮下 ,建立荷瘤小鼠模型 ,分别用rBCG IL 2、rBCG IL 2 +PPS和PPS进行局部治疗。于给药后第 1、2... 目的　观察重组卡介苗 (rBCG)和中药猪苓多糖(PPS) ,对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的影响。方法将黑色素瘤细胞株B16接种于小鼠左大腿外侧皮下 ,建立荷瘤小鼠模型 ,分别用rBCG IL 2、rBCG IL 2 +PPS和PPS进行局部治疗。于给药后第 1、2、3和 5wk处死小鼠 ,用NO酶法测定小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平 ,并观察不同实验组瘤体的变化。结果　rBCG IL 2组小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平最高。与对照组相比较 ,PPS组小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平在第 1wk与第 2wk增高 ,第 3wk起与对照组释放的NO水平没有差异。rBCG IL 2组小鼠随给药时间的延长 ,皮下瘤体逐渐缩小。PPS组小鼠瘤体在给药后第 1wk和第 2wk生长缓慢 ,第 3wk起瘤体生长速度明显增加。结论　rBCG IL 2与PPS能提高小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的水平 ,rBCG IL 展开更多
关键词 重组卡介苗 猪苓多糖 巨噬细胞 黑色素瘤细胞株 一氧化氮
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柔嫩艾美耳球虫ADF基因重组卡介苗的构建及其免疫保护性研究 被引量：8
3
作者 李运娜 黄金贵 +7 位作者 李建华 宫鹏涛 田甜 李赫 杨举 张国才 陈玉江 张西臣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第2期85-88,共4页
目的构建鸡柔嫩艾美耳球虫ADF基因重组卡介苗并研究其免疫保护性。方法应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫ADF基因完整开放阅读框,克隆至pMD18-T载体中;分别用限制性内切酶PstⅠ/ClaⅠ和PvuⅡ/ClaⅠ进行双酶切,ADF目的基因克隆至大肠埃希... 目的构建鸡柔嫩艾美耳球虫ADF基因重组卡介苗并研究其免疫保护性。方法应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫ADF基因完整开放阅读框,克隆至pMD18-T载体中;分别用限制性内切酶PstⅠ/ClaⅠ和PvuⅡ/ClaⅠ进行双酶切,ADF目的基因克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,获得重组质粒pMV261-ADF和pMV361-ADF,重组质粒电穿孔转化卡介苗。将构建的重组卡介苗pMV261-ADF和pMV361-ADF疫苗通过滴鼻、口服、颈部皮下注射3种途径接种雏鸡,BCG免疫组作为对照。免疫后经口接种柔嫩艾美耳球虫卵囊,通过抗球虫指数(ACI)评价重组卡介苗疫苗的保护效果。结果重组卡介苗pMV261-ADF和pMV361-ADF采用滴鼻方式免疫保护效果较好,ACI值分别为161.47和169.21。结论构建的重组卡介苗pMV261-ADF和pMV361-ADF对柔嫩艾美耳球虫卵囊的攻击具有一定的免疫保护作用。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 ADF基因 rbcg
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BCG治疗非肌层浸润性尿路上皮癌研究进展 被引量：6
4
作者 邓婉鑫 黄卫人 +3 位作者 邵志会 王金 赵国屏 蔡志明 《深圳中西医结合杂志》 2015年第3期187-189,共3页
膀胱尿路上皮癌占膀胱癌总数的90%以上,其分为非肌层浸润性尿路上皮癌(NMIBC)和肌层浸润性尿路上皮癌(MIBC)。非肌层浸润性尿路上皮癌患者多采用经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)治疗,并在术后采用膀胱灌注治疗以防复发。卡介苗(Mycobacteri... 膀胱尿路上皮癌占膀胱癌总数的90%以上,其分为非肌层浸润性尿路上皮癌(NMIBC)和肌层浸润性尿路上皮癌(MIBC)。非肌层浸润性尿路上皮癌患者多采用经尿道膀胱肿瘤电切术(TURBT)治疗,并在术后采用膀胱灌注治疗以防复发。卡介苗(Mycobacterium bovis BCG)是由活的无毒牛型结核杆菌制成,通常作为膀胱内灌注的药剂并在非浸润性膀胱癌治疗中获得了成功的应用。灌注BCG虽然能够明显降低肿瘤的复发率,但由于其大剂量的使用和较强的副作用等原因经常造成治疗的失效。本文将重点针对BCG的临床应用、作用机理和面临的挑战等方面做一综述,特别探讨了如何利用合成生物学方法来对BCG进行重组改造,以获得高效、低毒副作用的重组BCG(r BCG),并最终使其更好地服务于临床。 展开更多
关键词 非肌层浸润性尿路上皮癌 卡介苗 重组卡介苗 膀胱灌注 尿道膀胱肿瘤电切术 免疫反应
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重组hIFN-α-2B-BCG的生物学特性的观察 被引量：4
5
作者 孙二琳 刘春雨 +1 位作者 韩瑞发 范晓东 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期46-50,共5页
目的构建hIFN-α-2B-BCG重组体，探讨其对膀胱肿瘤细胞的生物学效应。方法对重组BCG与常规BCG生长情况和形态学进行比较；生长10代后，ELISA法测定菌体内、外表达hIFN-α-2B量。重组BCG体外作用于膀胱肿瘤细胞EJ、MB49后行电镜和MTY检... 目的构建hIFN-α-2B-BCG重组体，探讨其对膀胱肿瘤细胞的生物学效应。方法对重组BCG与常规BCG生长情况和形态学进行比较；生长10代后，ELISA法测定菌体内、外表达hIFN-α-2B量。重组BCG体外作用于膀胱肿瘤细胞EJ、MB49后行电镜和MTY检测细胞抑制率。结果常规BCG与重组BCG生长差异无统计学意义：1～7d为近似对数生长期，600nm处吸光度（A）值从0．1升到1．2左右，然后进入平台期。重组BCG和常规BCG抗酸染色均为阳性，均保持相互连接的特点，但重组BCG稍大，余无明显异常。1ml重组BCG分泌IFN—α-2B为997．2pg，菌内含量为99.3pg。连续传10代的重组BCG分泌量为990．3pg，与第一代无明显差别，二者形态学也未见明显差异。重组BCG作用于肿瘤细胞后可见细胞表面微绒毛减少，胞质内线粒体肿胀，空泡样变性，核染色质溶解，细胞质坏死。重组BCG对两种细胞的抑制率都显著高于野生BCG（P〈0．05）。结论重组hIFN-α-2B-BCG的分泌性表达持续稳定，其生长和形态特征与野生型基本一致。重组BCG体外对肿瘤细胞的抑制杀伤作用强于野生BCG。 展开更多
关键词 卡介苗 重组bcg IFN—α-2B 膀胱肿瘤
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柔嫩艾美耳球虫rhomboid抗原基因在卡介苗中的克隆与表达 被引量：5
6
作者 王秋悦 任科研 +2 位作者 宫鹏涛 李建华 张西臣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期270-274,共5页
以含柔嫩艾美耳球虫rhomboid基因的重组质粒为模板,应用PCR方法扩增该基因完整开放阅读框,克隆至pMD18-T载体中。分别用限制性内切酶PstⅠ/ClaⅠ和PvuⅡ/ClaⅠ进行双酶切,将rhomboid目的基因克隆到大肠杆菌-分支杆菌穿梭表达载体pMV261... 以含柔嫩艾美耳球虫rhomboid基因的重组质粒为模板,应用PCR方法扩增该基因完整开放阅读框,克隆至pMD18-T载体中。分别用限制性内切酶PstⅠ/ClaⅠ和PvuⅡ/ClaⅠ进行双酶切,将rhomboid目的基因克隆到大肠杆菌-分支杆菌穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,获得重组质粒pRho-261和pRho-361。将重组质粒电穿孔转化卡介苗,经热诱导后对其表达产物进行SDS-PAGE和western blot分析。结果表明成功构建了两个重组质粒,其表达产物与柔嫩艾美耳球虫阳性血清具有免疫反应性,为重组卡介苗在鸡球虫病防治方面的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 rhomboid基因 rbcg 球虫病疫苗
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人细胞因子IL-12p70与结核分枝杆菌特异性抗原Ag85A融合基因重组卡介苗的构建及鉴定 被引量：5
7
作者 邓仪昊 何红云 张本斯 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第24期4038-4040,共3页
目的:构建可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A的重组卡介苗,为结核病新疫苗的研制奠定基础。方法:以穿梭表达质粒pMV361为载体,构建重组质粒rpMV361-IL-12p70-Ag85A。将成功构建的重组质粒以电转化方式导入BCG基因组构建重组卡介苗rBCG-IL-12... 目的:构建可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A的重组卡介苗,为结核病新疫苗的研制奠定基础。方法:以穿梭表达质粒pMV361为载体,构建重组质粒rpMV361-IL-12p70-Ag85A。将成功构建的重组质粒以电转化方式导入BCG基因组构建重组卡介苗rBCG-IL-12p70-Ag85A。通过抗生素筛选、重组卡介苗基因组PCR扩增及测序,以及western-blotting对重组卡介苗进行鉴定。结果:经鉴定,重组卡介苗成功构建,并可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A。结论:重组卡介苗rBCG-12p70-Ag85A构建成功,并可高效表达目的蛋白。 展开更多
关键词 重组卡介苗 IL-12p70 AG85A
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猪苓多糖对重组卡介苗在膀胱癌细胞株T24作用部位的影响 被引量：4
8
作者 曾星 杨明 +3 位作者 王镓 张娴 孙景波 段小军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1001-1003,共3页
目的:探讨猪苓多糖(PPS)对重组绿色荧光蛋白的卡介苗(rBCG)在人膀胱癌细胞株T24作用部位的影响。方法:将rBCG表达的绿色荧光蛋白作为报告基因,用激光共聚焦显微镜和流式细胞术分析rBCG以及其与PPS协同rBCG刺激培养的T24细胞的变化。结果... 目的:探讨猪苓多糖(PPS)对重组绿色荧光蛋白的卡介苗(rBCG)在人膀胱癌细胞株T24作用部位的影响。方法:将rBCG表达的绿色荧光蛋白作为报告基因,用激光共聚焦显微镜和流式细胞术分析rBCG以及其与PPS协同rBCG刺激培养的T24细胞的变化。结果:T24细胞与rBCG相互作用24h以后,T24细胞质中发现明显的绿色荧光(86.335±5.856)。流式细胞术检测显示rBCG组24、48h细胞,SS&FS为参数的散点光信号强于对照组,T24细胞群向右上方偏移;FL1通道检测到GFP+T24细胞[(8.7±1.572)%、(13.8±2.31)%,P<0.01]。rBCG联合PPS用药组T24细胞细胞核内绿色荧光(72.603±1.165)增强,细胞质荧光(93.06±0.958)减弱,核/质荧光强度比(0.78±0.005)增大,与rBCG组(62.832±2.909,105.306±6.393,0.597±0.012)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:rBCG能够直接进入T24细胞细胞质中。 展开更多
关键词 重组卡介苗 猪苓多糖 膀胱肿瘤 激光共聚焦显微镜 流式细胞术
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分泌性表达融合蛋白85B-ESAT-6重组卡介苗的构建和表达 被引量：5
9
作者 刘洪波 吴少庭 +2 位作者 蔡昌学 甘燕 秦莉 《热带医学杂志》 CAS 2006年第10期1064-1067,共4页
目的构建分泌性表达融合蛋白85B-ESAT-6重组卡介苗。方法PCR扩增结核分枝杆菌热休克蛋白60(hsp60)的调控序列和合成T4转录终止序列,分别定向克隆入pBCG2000载体的多克隆位点的上下游,得到E.coli-Mycobacterium穿梭载体质粒pBCG3000。PC... 目的构建分泌性表达融合蛋白85B-ESAT-6重组卡介苗。方法PCR扩增结核分枝杆菌热休克蛋白60(hsp60)的调控序列和合成T4转录终止序列,分别定向克隆入pBCG2000载体的多克隆位点的上下游,得到E.coli-Mycobacterium穿梭载体质粒pBCG3000。PCR分别扩增出结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85B的全编码序列及ESAT-6基因,然后将两基因融合插入pBCG3000载体的hsp60启动子下游得到pBCG3000-85B-ESAT-6分泌性表达质粒。用电穿孔法将pBCG3000-85B-ESAT-6质粒转化BCG细胞,得到重组卡介苗。重组卡介苗经热诱导后,SDS-PAGE电泳和Westernblotting鉴定融合蛋白85B-ESAT-6的表达及其免疫学活性。结果通过PCR、酶切以及测序鉴定,pBCG3000-85B-ESAT-6表达质粒构建完全正确,SDS-PAGE电泳未能直接观察到表达的融合蛋白条带,用ESAT-6蛋白的多抗血清通过Westernblotting证实了该蛋白主要分泌性表达于胞外并具有免疫学活性。结论分泌性表达融合蛋白85B-ESAT-6重组卡介苗构建成功。 展开更多
关键词 融合蛋白 AG85B ESAT-6 重组卡介苗 穿梭质粒
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HCV多表位基因重组BCG的筛选及对其诱导的免疫应答研究 被引量：3
10
作者 韦三华 尹文 +6 位作者 雷迎峰 胡兴斌 董轲 李斌 张青 张利军 张惠中 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1041-1045,共5页
目的将丙型肝炎病毒（HCV）多表位基因的穿梭质粒pDE22-CtEm电转化BCG，筛选重组BCG（rBCG），免疫BALB／c小鼠，研究其诱导的免疫应答。方法培养并制备BCG感受态，将重组穿梭质粒pDE22-CtEm电转化BCG，筛选rBCG。rBCG免疫小鼠，同时进... 目的将丙型肝炎病毒（HCV）多表位基因的穿梭质粒pDE22-CtEm电转化BCG，筛选重组BCG（rBCG），免疫BALB／c小鼠，研究其诱导的免疫应答。方法培养并制备BCG感受态，将重组穿梭质粒pDE22-CtEm电转化BCG，筛选rBCG。rBCG免疫小鼠，同时进行基因免疫，测定血清中特异性抗体，分离小鼠脾淋巴细胞，体外测定淋巴细胞刺激指数、IFN-γ和进行CTL杀伤实验，观察rBCG在小鼠体内诱导的体液和细胞免疫应答。结果筛选出HCV多表位基因rBCG，免疫小鼠后在小鼠体内诱导出特异性的体液和细胞免疫应答，免疫应答水平均高于重组的基因免疫。结论构建的HCV多表位抗原rBCG活疫苗优于基因疫苗。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 表位 重组bcg 疫苗
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GLS/IL-12重组BCG的构建及其对小鼠结核病疗效的研究 被引量：3
11
作者 杨春 张黎 +5 位作者 伊正君 何永林 王渝伟 李娜 徐蕾 朱道银 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期774-778,共5页
目的构建携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠IL-12基因质粒(pZM03)的重组卡介苗(BCG),并观察其对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法将分枝杆菌复制子OriM克隆进已含GLS和IL-12的多启动子真核共表达载体pBudCE4.1中(pZM02),得到穿梭质... 目的构建携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠IL-12基因质粒(pZM03)的重组卡介苗(BCG),并观察其对结核分枝杆菌感染的疗效与机制。方法将分枝杆菌复制子OriM克隆进已含GLS和IL-12的多启动子真核共表达载体pBudCE4.1中(pZM02),得到穿梭质粒pZM03,以pZM03电转化BCG获得重组BCG。结核分枝杆菌H37Rv感染Balb/c小鼠4周后分别用生理盐水、BCG、pZM03和重组BCG治疗,于第一次治疗后3个月,处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的分泌水平、血清IL-12和肺、脾组织中GLS表达,同时观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果重组BCG治疗组肺、脾组织荷菌量比生理盐水组、BCG组和质粒组显著降低。重组BCG组和pZM03组经PPD刺激后IFN-γ和TNF-α分泌水平明显高于BCG组和生理盐水组。重组BCG组血清IL-12水平明显高于生理盐水组,但与pZM03质粒组和BCG载体组无明显差异。用免疫组化检测到小鼠肺及脾组织中GLS的表达。生理盐水和BCG组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛,增生改变不明显;重组BCG病变范围局限,并有大量类上皮细胞、泡沫细胞等细胞出现。结论成功构建携带GLS和IL-12的重组BCG;重组BCG对小鼠结核病有一定免疫治疗作用,系增强宿主Th1型免疫应答和抗菌活性有关。 展开更多
关键词 颗粒溶素 白细胞介素-12 重组卡介苗 结核病
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BVDV-E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果评价 被引量：4
12
作者 时坤 李男 +7 位作者 刁乃超 李健明 冯海峰 姚泽慧 田甜 宗颖 曾范利 杜锐 《动物医学进展》 北大核心 2020年第1期34-38,共5页
为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果,将BVDV抗原抗体阴性牛随机分为rBCG-pMV361-E2-1(1 aa-297aa)、rBCG-pMV361-E2-2(1 aa-345 aa)、rBCG-pMV361-E2-3(1 aa-374 aa)、rBCG-pMV361-E2-4(45 aa-297 aa)、rB... 为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果,将BVDV抗原抗体阴性牛随机分为rBCG-pMV361-E2-1(1 aa-297aa)、rBCG-pMV361-E2-2(1 aa-345 aa)、rBCG-pMV361-E2-3(1 aa-374 aa)、rBCG-pMV361-E2-4(45 aa-297 aa)、rBCG-pMV361-E2-5(45 aa-345 aa)、rBCG-pMV361-E2-6(45 aa-374 aa)、BVDV对照组、BCG对照组和PBS对照组,各组牛免疫相应疫苗后通过特异性抗体检测、淋巴细胞增殖试验、淋巴细胞亚群检测和细胞因子检测分析疫苗的免疫效果。结果显示,BVDV E2截短基因重组卡介苗均可诱导BVDV特异性抗体的产生,rBCG-pMV361-E2-1组抗体水平高于其他重组卡介苗试验组和BVDV对照组。淋巴细胞增殖试验结果显示,rBCG-pMV361-E2-2组SI为2.038±0.21,显著高于其他重组卡介苗试验组(P<0.01)。牛外周血CD4^+、CD8^+T淋巴细胞亚群检测结果显示,rBCG-pMV361-E2-5组牛外周血中CD4^+和CD8^+ T淋巴细胞亚群含量与PBS组比较,差异极显著(P<0.01)。IFN-γ检测结果显示,rBCG-pMV361-E2-1的IFN-γ水平显著高于其他试验组和对照组(P<0.01)。研究表明,rBCG-pMV361-E2-1可诱导接种牛产生较好的体液免疫应答,rBCG-pMV361-E2-1、rBCG-pMV361-E2-2和rBCG-pMV361-E2-5在诱导细胞免疫应答上效果较好。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2截短基因 重组卡介苗 免疫评价
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rBCGIL-2对肿瘤生长抑制作用和免疫刺激作用的研究 被引量：3
13
作者 曾星 梅玉屏 +3 位作者 黄羽 章国来 石灵春 杨明 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期425-426,共2页
目的　将表达IL 2重组BCG用于动物实验 ,观察其对肿瘤生长和机体免疫功能的影响。方法　采用基因工程技术和电转化技术 ,构建重组卡介苗即rBCG IL 2和rBCG ,并用瘤株重组BCG接种荷瘤小鼠 ,几周后观察肿瘤生长情况和检测巨噬细胞的杀伤... 目的　将表达IL 2重组BCG用于动物实验 ,观察其对肿瘤生长和机体免疫功能的影响。方法　采用基因工程技术和电转化技术 ,构建重组卡介苗即rBCG IL 2和rBCG ,并用瘤株重组BCG接种荷瘤小鼠 ,几周后观察肿瘤生长情况和检测巨噬细胞的杀伤活性。结果　rBCG IL 2能表达分泌IL 2 ,其表达量为 9 87ng ml± 4 56ng ml,rBCG IL 2与rBCG抑制肿瘤生长的作用明显优于对照组 ,并能提高小鼠巨噬细胞杀瘤率。结论　rBCG IL 2能有效抑制肿瘤生长 ,较早刺激机体的免疫功能 ,提高巨噬细胞的杀瘤活性。 展开更多
关键词 重组卡介苗 rbcg-IL-2 肿瘤生长抑制 免疫刺激
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牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E_0-E_2融合基因的构建及其在卡介苗中的表达 被引量：4
14
作者 张云 时坤 +1 位作者 李健明 杜锐 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期460-464,共5页
为提高牛病毒性腹泻-黏膜病病毒基因工程疫苗的免疫效力,运用重叠延伸PCR法将E0、E2截短基因进行融合后亚克隆至PMV361载体上,重组质粒经酶切和PCR鉴定后电转化入BCG中。构建的重组卡介苗经45℃热诱导2 h后,进行SDS-PAGE分析和Western b... 为提高牛病毒性腹泻-黏膜病病毒基因工程疫苗的免疫效力,运用重叠延伸PCR法将E0、E2截短基因进行融合后亚克隆至PMV361载体上,重组质粒经酶切和PCR鉴定后电转化入BCG中。构建的重组卡介苗经45℃热诱导2 h后,进行SDS-PAGE分析和Western blotting检测。结果表明:E0-E2融合基因在卡介苗中获得了表达,目的蛋白大小为66.5 kD,且具有反应原性。该重组卡介苗的构建为牛病毒性腹泻-黏膜病和结核病的防制奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻-黏膜病病毒 E0-E2融合基因 表达 重组卡介苗
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rBCG-IL-2对小鼠肿瘤局部和全身免疫功能的影响 被引量：4
15
作者 曾星 梅玉屏 +3 位作者 黄羽 章国来 谭敏 张维彬 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第3期206-208,共3页
目的 :将rBCG IL 2应用于动物实验 ,观察其对肿瘤生长和免疫功能的影响。方法 :采用基因工程技术构建rBCG IL 2 ,用黑色素瘤细胞株B16接种于小鼠小腿外侧皮下 ,再用rBCG IL 2局部治疗 ,2周后处死小鼠 ,用ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清... 目的 :将rBCG IL 2应用于动物实验 ,观察其对肿瘤生长和免疫功能的影响。方法 :采用基因工程技术构建rBCG IL 2 ,用黑色素瘤细胞株B16接种于小鼠小腿外侧皮下 ,再用rBCG IL 2局部治疗 ,2周后处死小鼠 ,用ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中IL 2 ,IFN γ和GM CSF的含量和肉眼及镜下观察肿瘤生长和局部免疫效应细胞浸润情况。结果 :rBCG IL 2对肿瘤生长的抑制作用明显优于对照组 ,肿瘤细胞周围有较多的巨噬细胞和淋巴细胞浸润 ,肿瘤细胞减少。同时rBCG IL 2还能诱导机体产生IL 2和IFN γ。结论 :rBCG IL 2能通过诱导局部免疫效应细胞浸润和机体细胞因子的产生 ,抑制肿瘤生长 。 展开更多
关键词 重组卡介苗 肿瘤 免疫治疗 rbcg-IL-2
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结核分枝杆菌ESAT-6基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达 被引量：2
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作者 付小强 吴少庭 +2 位作者 黄汉菊 甘燕 李晓恒 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期745-748,共4页
目的体外扩增结核杆菌ESAT-6基因,并构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-ESAT-6和重组耻垢分枝杆菌。方法采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增结核杆菌ESAT-6基因,克隆入pGEMT载体。然后,构建亚克隆ps3000-ESAT-6大肠杆菌-分枝杆菌... 目的体外扩增结核杆菌ESAT-6基因,并构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-ESAT-6和重组耻垢分枝杆菌。方法采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增结核杆菌ESAT-6基因,克隆入pGEMT载体。然后,构建亚克隆ps3000-ESAT-6大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒,经电转化方法,将ESAT-6基因的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌(Mycobacteri-umsmegmatis mc^2155)中,热诱导此重组耻垢分枝杆菌,用SDS-PAGE电泳观察ESAT-6蛋白的表达,Western blotting鉴定其生物学活性。结果成功扩增了结核杆菌ESAT-6基因;正确构建穿梭质粒ps3000-ESAT-6,用pET表达系统ESAT-6纯化蛋白免疫小鼠的多抗血清通过Western blot证实了该重组耻垢杆菌中有表达并具有生物学活性。结论ESAT-6重组耻垢分枝杆菌构建成功,为下一步表达ESAT-6蛋白的重组BCG(BacilliCalmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 结核杆菌 ESAT-6 耻垢分枝杆菌 重组bcg
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重组BCG联合抗痨药物对小鼠结核病治疗作用的实验研究 被引量：2
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作者 杨春 张黎 +5 位作者 何永林 徐蕾 伊正君 李娜 王渝伟 朱道银 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期452-455,460,共5页
目的:探讨携带编码人天然颗粒溶素(Granulysin,GLS)和小鼠IL-12基因的重组BCG与抗痨药物对结核分枝杆菌感染的协同治疗效果。方法:将结核分枝杆菌H37Rv感染的BALB/c小鼠40只随机分成4组。感染4周后分别用生理盐水、重组卡介苗(BCG)、INH... 目的:探讨携带编码人天然颗粒溶素(Granulysin,GLS)和小鼠IL-12基因的重组BCG与抗痨药物对结核分枝杆菌感染的协同治疗效果。方法:将结核分枝杆菌H37Rv感染的BALB/c小鼠40只随机分成4组。感染4周后分别用生理盐水、重组卡介苗(BCG)、INH+PZA和重组BCG联合INH+PZA治疗,于第一次治疗后3个月,处死小鼠,检测器官荷菌量、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的分泌水平、血清IL-12和IFN-γ、肺、脾组织中GLS表达,同时观察小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果:重组BCG联合INH+PZA治疗组肺、脾组织荷菌量(logCFU/g)比重组BCG和INH+PZA治疗组显著降低;重组BCG和INH+PZA治疗组肺、脾组织荷菌量比生理盐水组显著降低。重组BCG组经PPD刺激后IFN-γ和TNF-α分泌水平明显高于其它组。重组BCG联合INH+PZA治疗组和重组BCG组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于生理盐水组。重组BCG组用免疫组化检测到小鼠肺及脾组织中GLS的表达。重组BCG和INH+PZA组病变轻且局限,生理盐水组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛。重组BCG联合INH+PZA治疗组肺组织病变最轻。结论:GLS/IL-12重组BCG对小鼠结核病有一定免疫治疗作用;重组BCG联合临床常用的抗痨药可增强抗结核病的疗效。 展开更多
关键词 颗粒溶素 IL-12 重组bcg 结核病 抗痨药
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重组hIFN-α-2b-BCG抗肿瘤效应的体外研究 被引量：2
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作者 刁呈文 范晓东 +6 位作者 孙二琳 李娜 卢炳新 雷铭德 丁娜 孙岩 韩瑞发 《天津医科大学学报》 2016年第5期377-380,385,共5页
目的:了解重组h IFN-α-2b-BCG(r BCG)体外抗肿瘤的作用效果和作用机制。方法:体外共培养后,透射电镜观察不同时间点r BCG对人膀胱肿瘤EJ细胞的影响。吖啶橙染色观察各组肿瘤细胞形态。MTT法检测r BCG对肿瘤细胞生长抑制率。ELISA检测r ... 目的:了解重组h IFN-α-2b-BCG(r BCG)体外抗肿瘤的作用效果和作用机制。方法:体外共培养后,透射电镜观察不同时间点r BCG对人膀胱肿瘤EJ细胞的影响。吖啶橙染色观察各组肿瘤细胞形态。MTT法检测r BCG对肿瘤细胞生长抑制率。ELISA检测r BCG作用后淋巴细胞分泌Th1型细胞因子水平。LDH释放试验检测r BCG激活的淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤效应。结果:BCG和r BCG作用后的肿瘤细胞在透射电镜下和吖啶橙染色后均有显著变化。MTT显示r BCG的生长抑制率显著高于BCG和BCG+IFN-α-2b组。r BCG对淋巴细胞分泌Th1型细胞因子有影响,同时r BCG激活的淋巴细胞对膀胱肿瘤细胞有杀伤作用。结论:重组BCG在体外有优于BCG的免疫调节特性、抗肿瘤作用和直接细胞毒作用。 展开更多
关键词 重组bcg IFN-Α-2B 膀胱肿瘤 免疫疗法
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猪弓形虫重组卡介苗的构建及其免疫保护性 被引量：3
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作者 于艳辉 杨升 +6 位作者 姜鑫 信彩岩 李显赫 王伟荣 李建华 张西臣 宫鹏涛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第7期695-700,707,共7页
目的构建弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因的重组卡介苗(BCG),并分析其免疫保护效果。方法应用RT-PCR技术分别扩增弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因,克隆至p MD18-T载体中,双酶切鉴定及测序正确后,将弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因串联... 目的构建弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因的重组卡介苗(BCG),并分析其免疫保护效果。方法应用RT-PCR技术分别扩增弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因,克隆至p MD18-T载体中,双酶切鉴定及测序正确后,将弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因串联后分别连接至穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,电转化BCG,制备重组BCG pMV261-IL-2-Rho和pMV361-IL-2-Rho。分别经颈部肌肉注射免疫猪,共3次,每次间隔2周,免疫剂量均为108 CFU/只,采用ELISA法检测免疫前后猪体内抗体(IgG)滴度、Th1型及Th2型细胞因子的变化情况;第3次免疫后2周通过腹腔注射的方式接种弓形虫China I株速殖子1×108个/只进行攻虫试验,观察重组BCG对猪的免疫保护效果。结果成功构建了重组BCG p MV261-IL-2-Rho和p MV361-IL-2-Rho。重组BCG免疫猪后,随着免疫次数的增加,血清中抗体滴度也逐渐升高,且与PBS对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。3次免疫后,pMV261-IL-2-Rho组血清Th1型细胞因子IL-2、IFNγ和IL-12的表达水平均明显提高,与PBS对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而pMV361-IL-2-Rho组血清IL-2、IFNγ和IL-12的水平虽略有升高,但与PBS对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);各组在免疫过程中Th2型细胞因子IL-4水平均未发生明显变化。攻虫后各组猪出现精神沉郁,食欲下降,体温升高等症状,耐过发病期后的猪,食欲逐渐恢复,体温渐趋正常,各种症状减轻,且各组猪在攻虫后20 d均无死亡。结论构建的基因重组BCG pMV261-IL-2-Rho对猪弓形虫感染具有一定的免疫保护作用。 展开更多
关键词 弓形虫 Rhomboid基因 IL-2基因 重组卡介苗 免疫保护
原文传递
重组人白介素2-卡介苗对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞体外杀伤活性的影响 被引量：2
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作者 梅玉屏 曾星 +1 位作者 黄羽 章国来 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第1期32-34,共3页
目的：研究能分泌人白细胞介素２的重组卡介苗（ｒＢＣＣ－ＩＬ－２）对小鼠腹腔巨噬细胞体外杀伤活性功能的改变，探讨ｒＢＣＧ－ＩＬ－２对宿主免疫功能的影响。方法：采用基因工程技术和电转化技术构建卡介苗，采用ＭＴＴ法测定小鼠... 目的：研究能分泌人白细胞介素２的重组卡介苗（ｒＢＣＣ－ＩＬ－２）对小鼠腹腔巨噬细胞体外杀伤活性功能的改变，探讨ｒＢＣＧ－ＩＬ－２对宿主免疫功能的影响。方法：采用基因工程技术和电转化技术构建卡介苗，采用ＭＴＴ法测定小鼠腹腔巨噬细胞体外的杀伤活性。结果：ｒＢＣＧ－ＩＬ－２组小鼠腹腔巨噬细胞杀伤活性明显大于ｒＢＣＧ组和对照组，且巨噬细胞的杀伤活性在一周内达到最大。结论：ｒＢＣＧ－ＩＬ－２能提高巨噬细胞的杀伤活性，是一种很有前景的生物制剂。 展开更多
关键词 巨噬细胞 肿瘤 杀伤活性 rbcg-IL-2 小鼠
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