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基于钙激活氯离子通道靶向M_(3)受体的药物筛选细胞模型的建立
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作者 肖云萍 解宇浩 +2 位作者 张嘉琪 郝峰 王国庆 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期715-722,共8页
目的建立一种基于钙激活氯离子通道(calcium-activated chloride channel,CaCC)靶向M3受体(cholinergic receptor muscarinic 3,Chrm3)高效敏感的药物细胞筛选模型和方法。方法RT-PCR、免疫荧光技术及Western blot检测Chrm3在FRT细胞中... 目的建立一种基于钙激活氯离子通道(calcium-activated chloride channel,CaCC)靶向M3受体(cholinergic receptor muscarinic 3,Chrm3)高效敏感的药物细胞筛选模型和方法。方法RT-PCR、免疫荧光技术及Western blot检测Chrm3在FRT细胞中的表达情况;构建共表达钙激活氯离子通道蛋白1(anoctamin 1,ANO1)和YFP-H148Q/I152L的Fischer大鼠甲状腺滤泡上皮(Fischer rat thyroid,FRT)细胞模型,倒置荧光显微镜和荧光淬灭动力学实验鉴定CaCC细胞模型有效性;Fura-2荧光探针法检测加入Chrm3激活剂后胞浆内的钙浓度,荧光淬灭动力学实验验证细胞模型可筛选Chrm3调节剂;Z'因子评估该细胞模型是否适用于高通量筛选。结果FRT细胞在mRNA及蛋白水平均内源性表达Chrm3;成功构建了稳定共表达ANO1和YFP-H148Q/I152L的FRT细胞模型;该细胞模型可敏感检测细胞内钙浓度,相对荧光强度变化值与Chrm3调节剂浓度成剂量依赖关系,可用于Chrm3调节剂的筛选;该模型的Z'因子值为0.678,满足高通量筛选的要求。结论此细胞模型通过敏感检测钙信号实现了对Chrm3调节剂的高通量筛选,也可应用于对其他与钙离子信号相关G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptor,GPCR)靶点的筛选。 展开更多
关键词 M_(3)受体 钙激活氯离子通道 细胞模型 高通量筛选 钙浓度
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