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同源重组方法在制备DNA大片段中的应用 被引量：5
1
作者 倪现朴 季州翔 夏焕章 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期663-668,共6页
目的介绍快速、简便制备DNA大片段的新方法。方法查阅国内外近年关于DNA大片段制备方法的文献33篇,对这些方法进行归纳和总结。结果综述了大肠杆菌Red/ET重组系统和基于酿酒酵母重组系统的DNA自组装和TAR克隆在DNA片段制备中的应用。结... 目的介绍快速、简便制备DNA大片段的新方法。方法查阅国内外近年关于DNA大片段制备方法的文献33篇,对这些方法进行归纳和总结。结果综述了大肠杆菌Red/ET重组系统和基于酿酒酵母重组系统的DNA自组装和TAR克隆在DNA片段制备中的应用。结论同源重组系统不仅提高了克隆DNA大片段的效率,而且简化了操作流程。这些方法在制备DNA大片段用于组合生物合成和合成生物学制备药物中具有重要的应用前景。 展开更多
关键词 合成生物学 同源重组 recet系统 DNA自组装 酵母TAR克隆
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噬菌体重组酶介导的DNA同源重组工程 被引量：3
2
作者 李瑞娟 赵晓雨 +5 位作者 杨润雨 刘洋 颜富 王海龙 张友明 符军 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期3230-3248,共19页
来源于噬菌体的遗传操作工具在基因工程中具有非常重要的地位,例如位点特异性重组酶、柯斯质粒DNA文库及同源重组酶等。其中,来源于Lambda噬菌体的同源重组酶Redα/Redβ和来源于Rac原噬菌体的同源重组酶RecE/RecT能够高效地介导35–50b... 来源于噬菌体的遗传操作工具在基因工程中具有非常重要的地位,例如位点特异性重组酶、柯斯质粒DNA文库及同源重组酶等。其中,来源于Lambda噬菌体的同源重组酶Redα/Redβ和来源于Rac原噬菌体的同源重组酶RecE/RecT能够高效地介导35–50bp短同源臂之间的重组。基于噬菌体同源重组酶Redα/Redβ和RecE/RecT开发的DNA同源重组工程(Recombineering)能够对靶标DNA分子进行快速、精准、高效的修饰,不受限制性内切酶识别位点和DNA分子大小限制,已发展成为一种新型的基因工程技术。本文主要综述了噬菌体同源重组酶及其作用机制、在大肠杆菌及其他细菌中的应用和开发,以及在微生物次级代谢产物的挖掘、动植物转基因、病毒基因组克隆和修饰等方面的应用。原位激活沉默基因簇需要宿主特异性的DNA同源重组工程进行启动子和调控元件的修饰;异源表达次级代谢产物的首要步骤一般是通过RecET直接克隆大的DNA片段;动植物转基因复杂载体的构建效率在有了Red同源重组系统以后有了革命性的发展;RecET直接克隆和Red同源重组介导的感染性克隆构建和修饰方法,不仅有利于病毒基因组功能研究,同时也为载体疫苗开发提供了最优方案。 展开更多
关键词 噬菌体同源重组酶 同源重组工程 Red系统 recet系统 次级代谢产物 动植物转基因 病毒反向遗传学
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运动发酵单胞菌RecET重组系统的构建及应用 被引量：1
3
作者 李涛 曹庆华 +2 位作者 吴燕 谭雪梅 张义正 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期209-214,共6页
为了提高外源基因整合到染色体的效率,在已构建的运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体基础上,构建了RecET表达质粒pSUZM3a-RecET.选取乙醇脱氢酶Ⅰ(adhA)基因作为靶基因,四环素抗性基因(Tcr)作为筛选标记基因,检测RecET重组系统在Z.mobili... 为了提高外源基因整合到染色体的效率,在已构建的运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体基础上,构建了RecET表达质粒pSUZM3a-RecET.选取乙醇脱氢酶Ⅰ(adhA)基因作为靶基因,四环素抗性基因(Tcr)作为筛选标记基因,检测RecET重组系统在Z.mobilis中进行基因重组的可行性.将两端带有60bp adhA基因同源臂的四环素抗性基因片段电击转化含有RecET重组系统表达质粒的运动发酵单胞菌ZM4,获得adhA基因缺失突变菌株.对突变菌株adhA基因的PCR产物进行测序发现,adhA基因已被置换为四环素抗性基因.上述结果表明:RecET重组系统在运动发酵单胞菌中具有高效、便捷和可操作性,只需60bp同源臂即可完成同源重组. 展开更多
关键词 运动发酵单胞菌 recet重组系统 基因敲除 基因敲入
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