实时荧光定量PCR技术在乳酸菌定量检测中的应用 被引量：25

1

作者 赵文静 李妍 +1 位作者 高鹏飞 张和平 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期433-437,共5页

与传统的菌落计数、杂交技术及PCR技术等相比,实时荧光定量PCR技术作为一种检测和定量微生物的方法,具有较高的灵敏度及可重复性,而且反应过程快速,污染较小。作者综述了实时荧光定量PCR技术的定量原理,荧光检测物质,目的基因序列以及... 与传统的菌落计数、杂交技术及PCR技术等相比,实时荧光定量PCR技术作为一种检测和定量微生物的方法,具有较高的灵敏度及可重复性,而且反应过程快速,污染较小。作者综述了实时荧光定量PCR技术的定量原理,荧光检测物质,目的基因序列以及其特点,并且列举了在乳酸菌定量检测中的应用,同时对其应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 实时定量pcr 乳酸菌 定量检测

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棘孢木霉Trichoderma asperellum在土壤中定殖量的荧光定量PCR检测 被引量：18

2

作者 贺字典 宋士清 +2 位作者 高玉峰 石延霞 李宝聚 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期552-558,共7页

为快速准确检测棘孢木霉Trichoderma asperellum在土壤中的定殖量,构建了荧光定量PCR检测体系,并运用该体系对防治黄瓜枯萎病后土壤中的棘孢木霉数量进行了检测。结果表明:所建立的荧光定量PCR检测体系对棘孢木霉DNA特异性强,R^2为0.998... 为快速准确检测棘孢木霉Trichoderma asperellum在土壤中的定殖量,构建了荧光定量PCR检测体系,并运用该体系对防治黄瓜枯萎病后土壤中的棘孢木霉数量进行了检测。结果表明:所建立的荧光定量PCR检测体系对棘孢木霉DNA特异性强,R^2为0.998,检测限点为15 fg/μL;在灭菌土壤中检测到的棘孢木霉DNA的拷贝数大于1 866 fg/μL时,对黄瓜枯萎病的防治效果高于64.29%;在黄瓜整个生育期内,检测到土壤中的棘孢木霉定殖量呈现先降后升的变化趋势,第7天时,棘孢木霉DNA拷贝数为320 ng/μL,56 d后棘孢木霉DNA拷贝数迅速上升,最高可达5.16×10~4ng/μL,且对黄瓜枯萎病的防治效果为64.29%~76.81%。研究表明,荧光定量PCR方法检测土壤中棘孢木霉数量具有快速、灵敏度高、可靠性强等优点,可用于检测生防菌棘孢木霉施用后的定殖量和生防效果。 展开更多

关键词 棘孢木霉 荧光定量pcr 定殖量 检测技术

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实时荧光定量PCR技术在食源性致病菌检测中的应用 被引量：17

3

作者 吕艳芳 马春颖 励建荣 《食品与发酵科技》 CAS 2014年第2期80-84,88,共6页

近年来食源性疾病爆发数量呈上升趋势,食品安全问题已经成为危害人们生命和健康的严重问题,引起了全世界消费者对食品品质、安全和卫生的关注。实时荧光定量PCR技术是在定性PCR技术的基础上发展起来的核酸定量技术,灵敏性高、特异性强,... 近年来食源性疾病爆发数量呈上升趋势,食品安全问题已经成为危害人们生命和健康的严重问题,引起了全世界消费者对食品品质、安全和卫生的关注。实时荧光定量PCR技术是在定性PCR技术的基础上发展起来的核酸定量技术,灵敏性高、特异性强,实现了对DNA模板的定量检测,目前已广泛应用于食品检测领域。本文概述了实时荧光定量PCR技术的原理及其在食源性致病菌检测中的应用,并对其应用前景进行了探讨。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr 食源性致病菌 检测

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辣椒疫霉菌RT-PCR检测技术的建立及应用 被引量：16

4

作者 程颖超 康华军 +4 位作者 石延霞 柴阿丽 张红杰 谢学文 李宝聚 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期997-1006,共10页

根据辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)与致病疫霉菌(Phytophthora infestans)及其他8种常见土传病害病原菌Actin基因序列差异,设计并筛选出辣椒疫霉菌的特异性引物YM2F/YM2R,建立辣椒疫霉菌的实时荧光定量PCR检测体系,并利用... 根据辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici Leonian)与致病疫霉菌(Phytophthora infestans)及其他8种常见土传病害病原菌Actin基因序列差异,设计并筛选出辣椒疫霉菌的特异性引物YM2F/YM2R,建立辣椒疫霉菌的实时荧光定量PCR检测体系,并利用该体系定量检测人工模拟带菌样品及田间发病土壤样品中的辣椒疫霉菌。试验结果表明,利用该引物建立的实时荧光定量PCR检测体系线性关系良好,灵敏度为1×10^(-1) pg·μL^(-1),是普通PCR的100倍。该体系无需病原菌的分离培养即可对土壤中的辣椒疫霉菌进行快速、特异且定量检测。对田间土壤样品的检测结果表明,在一定范围内病害发生、流行程度与病原菌密度成正比,从而为该病的流行监测和早期防控提供科学依据。 展开更多

关键词 辣椒疫霉菌 南瓜 荧光定量pcr 检测技术 ACTIN

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非洲猪瘟病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：16

5

作者 贾云飞 赵福杰 +3 位作者 朱静静 王超群 吴亚楠 魏战勇 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期69-73,80,共6页

为了建立非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)快速、敏感的检测方法,根据GenBank中登录的中国流行株ASFV-SY18的P 72基因,建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并对所建立方法的灵敏性、特异性与重复性进行了验证。结... 为了建立非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)快速、敏感的检测方法,根据GenBank中登录的中国流行株ASFV-SY18的P 72基因,建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并对所建立方法的灵敏性、特异性与重复性进行了验证。结果显示,所建立的非洲猪瘟病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法能有效扩增1.0~1.0×109 copies·μL-1的ASFV标准质粒,建立的标准曲线呈现良好的线性关系;检测灵敏度为1.0 copies·μL-1;对猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒等病原不发生交叉反应,具有很好的特异性;重复性试验结果显示变异系数小于1%,重复性良好。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 P 72基因 实时荧光定量pcr 检测

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虹彩病毒蛙病毒属病毒实时荧光PCR检测方法的建立 被引量：14

6

作者 李惠芳 吕建强 +5 位作者 岳志芹 刘荭 田飞焱 何俊强 蔡依娜 陈昌福 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期172-176,共5页

在GenBank中搜寻虹彩病毒蛙病毒属主衣壳蛋白(MCP)基因序列并进行多重比较后,利用其中的保守序列,设计引物和Taqman探针,建立了虹彩病毒蛙病毒属实时荧光PCR检测方法。对荧光PCR反应条件进行优化,评估该检测方法的特异性、稳定性和重复... 在GenBank中搜寻虹彩病毒蛙病毒属主衣壳蛋白(MCP)基因序列并进行多重比较后,利用其中的保守序列,设计引物和Taqman探针,建立了虹彩病毒蛙病毒属实时荧光PCR检测方法。对荧光PCR反应条件进行优化,评估该检测方法的特异性、稳定性和重复性,利用10倍系列稀释法检验其灵敏度并与常规PCR做了比较。结果显示,该方法对虹彩病毒蛙病毒属成员(新加坡石斑鱼虹彩病毒除外)的检测有高度的特异性,与淋巴囊肿病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒等其他水生动物病毒之间均无交叉反应,有良好的特异性,检测总DNA灵敏度为4.5×10-3pg/μL,比传统PCR的敏感度高出100倍,可对低病毒含量的样品进行准确检测。制作的标准曲线有极好的线性关系,且线性范围宽,相关系数为0.9984。组内和组间重复试验的Ct值标准偏差分别为1.2%和1.6%,有良好的重复性。与常规的PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量、可同时检测大量样品等优点,可用于出入境检疫和动物防疫监督部门对虹彩病毒蛙病毒属的疫情监测。 展开更多

关键词 虹彩病毒蛙病毒属 实时荧光定量pcr 检测

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实时荧光定量PCR技术在食品微生物检测和研究中的应用 被引量：13

7

作者 李勤 盛占武 孙志高 《四川食品与发酵》 2006年第5期9-12,共4页

实时荧光定量PCR技术是通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量的目的,不仅实现了对核酸信息量的分析比较,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、能有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,近年来该技术开始作为食品微生物的研究手... 实时荧光定量PCR技术是通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量的目的,不仅实现了对核酸信息量的分析比较,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、能有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,近年来该技术开始作为食品微生物的研究手段。本文概述了实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点及其在食品微生物检测中的应用与研究进展,并探讨了它的技术发展和应用前景。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr 食品微生物 定量检测

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猪德尔塔冠状病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：12

8

作者 肖帅 刘新生 +7 位作者 方玉珍 周鹏 张巧玲 芦延珍 董昭良 张永光 王永录 魏彦明 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1080-1086,共7页

根据GenBank中已公布的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)N基因序列设计并合成特异的引物和TaqMan探针,构建质粒标准品,以标准品为模板建立了检测PDCoV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对该方法的敏感性、特异性及重复性进行了评价。结果显示,以... 根据GenBank中已公布的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)N基因序列设计并合成特异的引物和TaqMan探针,构建质粒标准品,以标准品为模板建立了检测PDCoV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,并对该方法的敏感性、特异性及重复性进行了评价。结果显示,以猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪库布病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和口蹄疫病毒为模板时均未检测到荧光信号,表明该方法具有良好的特异性;用2.66×10~6、2.66×10~5和2.66×10~4copies/L这3个不同浓度的质粒标准品进重复试验,循环阈值Ct的变异系数均低于2%,表明该方法具有良好的特异性;标准曲线斜率为-3.461,相关系数为R^2=0.998,表明阈值和模板浓度之间具有良好的线性关系。10倍梯度稀释质粒标准品,检测的最低限度为2.66×10~1 copies/L的质粒DNA,表明此方法具有良好的敏感性。利用该方法对194份临床猪粪便样品进行了检测,结果显示PDCoV阳性率为22.1%,明显高于常规RT-PCR的11.9%,表明该方法可应用于PDCoV的临床诊断及定量检测。 展开更多

关键词 猪德尔塔冠状病毒 实时荧光定量pcr 病毒检测

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快速检测牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR技术建立及应用 被引量：11

9

作者 郭锐 陈平 +4 位作者 田永祥 杨克礼 刘泽文 段正赢 梁望旺 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第8期1640-1643,共4页

以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的保守基因序列为参考,设计、优化出一对特异的PCR引物和一条TaqMan荧光探针,建立一种快速定量检测牛病毒性腹泻病毒的实时荧光定量PCR技术。该方法检测灵敏度比RT-PCR高100倍,并且避免了常规PCR电泳检测所带... 以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的保守基因序列为参考,设计、优化出一对特异的PCR引物和一条TaqMan荧光探针,建立一种快速定量检测牛病毒性腹泻病毒的实时荧光定量PCR技术。该方法检测灵敏度比RT-PCR高100倍,并且避免了常规PCR电泳检测所带来的高污染率。因此,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能定量检测等优点,适用于牛场BVDV感染的快速定量检测和肉类食品进出口检疫。 展开更多

关键词 牛病毒性腹泻病毒 实时荧光定量pcr 定量检测

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应用实时荧光定量PCR技术快速检测甲型H1N1流感病毒 被引量：9

10

作者 陈棋炯 孙永祥 +2 位作者 丁水军 傅丹青 戴城钢 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第6期1394-1396,共3页

目的:对疑似甲型H1N1流感患者标本进行病毒核酸检测确诊,探讨实时荧光定量PCR检测方法在流行性感冒检测诊断中的意义。方法:采用WHO标准实时荧光定量PCR方法对2009年6月～12月萧山地区采集的436份疑似甲型H1N1流感患者咽拭子标本进行病... 目的:对疑似甲型H1N1流感患者标本进行病毒核酸检测确诊,探讨实时荧光定量PCR检测方法在流行性感冒检测诊断中的意义。方法:采用WHO标准实时荧光定量PCR方法对2009年6月～12月萧山地区采集的436份疑似甲型H1N1流感患者咽拭子标本进行病毒核酸检测,并对甲型H1N1流感病毒、甲1型流感病毒、甲3型流感病毒和乙型流感病毒进行快速分型。结果:436份咽拭子标本中有144份呈甲型H1N1流感病毒核酸阳性,阳性率33.03%,另检出甲1型流感病毒15份,甲3型流感病毒30份,没有检出乙型流感病毒。结论:实时荧光定量PCR方法操作方便、耗时短、特异性强、灵敏度高,可作为甲型H1N1流感疫情可靠的快速诊断方法。 展开更多

关键词 甲型H1N1流感病毒 实时荧光定量pcr RT-pcr 快速检测

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枣疯病植原体TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：8

11

作者 韩剑 罗明 +2 位作者 徐金虹 王同仁 张祥林 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期111-116,共6页

根据枣疯病植原体16SrDNA基因保守区域设计、合成特异性引物和TaqMan探针,以构建的重组质粒作为阳性标准品,建立并优化了对枣疯病植原体的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。对优化后的方法进行灵敏度、特异性及稳定性评价,制作了标准曲... 根据枣疯病植原体16SrDNA基因保守区域设计、合成特异性引物和TaqMan探针,以构建的重组质粒作为阳性标准品,建立并优化了对枣疯病植原体的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。对优化后的方法进行灵敏度、特异性及稳定性评价,制作了标准曲线。结果显示,制作的标准曲线有极好的线性关系,相关系数(r2)达到0.998,建立的实时荧光定量PCR检测方法能够特异性地检测枣疯病植原体,能检测到60拷贝的质粒DNA。本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法灵敏度、特异性、重复性好,不仅能够实现对枣疯病植原体的快速检测,而且为实现从病原定量水平上对枣疯病病情分级奠定了基础。 展开更多

关键词 枣疯病植原体 TAQMAN探针 实时荧光定量pcr 检测

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基于TaqMan实时荧光定量PCR技术的西花蓟马快速检测 被引量：8

12

作者 吴霞 张桂芬 万方浩 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期497-503,共7页

西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pargande)是世界性害虫,2003年在我国首次发生危害。针对西花蓟马与其他种类蓟马形态相似、难以快速区分的问题,本文在SCAR标记基础上,采用TaqMan实时荧光定量PCR技术,设计1对特异性引物和1条MGB探... 西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pargande)是世界性害虫,2003年在我国首次发生危害。针对西花蓟马与其他种类蓟马形态相似、难以快速区分的问题,本文在SCAR标记基础上,采用TaqMan实时荧光定量PCR技术,设计1对特异性引物和1条MGB探针,扩增出大小为138bp的特异片段。以质粒DNA为标准品建立了标准曲线(R2=0.9965),种特异性检验结果显示,该引物和探针只能检测到西花蓟马的荧光信号,而对其他种类的蓟马不具有检测能力。并且可以定量检测西花蓟马不同虫态靶标DNA片段的拷贝数。该检测体系重复性强、稳定性高,在口岸检疫以及植物种苗及其产品调运中的有害生物检测和监测中具有重要意义。 展开更多

关键词 西花蓟马 TAQMAN-MGB探针 实时荧光定量pcr 快速检测 SCAR标记

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基于vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR快速检测创伤弧菌的研究 被引量：7

13

作者 吴增辉 楼永良 +2 位作者 卢中秋 卢亦愚 严杰 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期477-481,共5页

目的建立基于溶细胞毒素基因vvhA检测创伤弧菌（Vibrio vulnificus）的TaqMan实时荧光定量PCR。方法采用Primer Express软件，设计位于vvhA基因序列保守区的PCR引物和TaqMan探针，建立检测创伤弧菌vvhA基因100bp扩增产物的TaqMan实时荧... 目的建立基于溶细胞毒素基因vvhA检测创伤弧菌（Vibrio vulnificus）的TaqMan实时荧光定量PCR。方法采用Primer Express软件，设计位于vvhA基因序列保守区的PCR引物和TaqMan探针，建立检测创伤弧菌vvhA基因100bp扩增产物的TaqMan实时荧光定量PCR。采用基因克隆技术，构建作为阳性对照的pMD19-vvhA100重组质粒。以最低扩增循环数（Ct值）、荧光强度增加值（△Rn）为观察指标，对vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR条件进行优化。以不同浓度的创伤弧菌及其它8种细菌DNA和pMD19-vvhA100为模板，对vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR的特异性、敏感性和重复性进行验证。创伤弧菌经腹腔和皮下注射及灌胃感染ICR小鼠，验证vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR对感染小鼠血液、皮下感染组织和肠内容物的检测效果。结果所建立的vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR仅对创伤弧菌DNA或pMD19-vvhA100呈现阳性检测结果，其检测灵敏度可达0．01ng创伤弧菌DNA或10^3个拷贝的pMD19-vvhA100，不同浓度pMD19-vvhA100三次检测结果的SD≤0．79，对腹腔和皮下感染创伤弧菌的小鼠血液、皮下组织标本检测结果均为阳性。结论所建立的创伤弧菌vvhA基因TaqMan实时荧光定量PCR具有快速、稳定、敏感、特异等优点，适合用于临床实验室进行创伤弧菌引起的败血症和创口感染快速诊断。 展开更多

关键词 创伤弧菌 vvhA基因 TAQMAN探针 实时荧光定量pcr 检测

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6种不同实时荧光定量PCR仪对新型冠状病毒核酸检测性能的影响探讨 被引量：2

14

作者 陈家颖 耿帜 +1 位作者 佘丹 陈凤花 《临床血液学杂志》 2023年第10期697-701,706,共6页

目的:探讨6种不同型号的实时荧光定量PCR仪(分别为CFX96 DeepWell、GENTIER 96E、Cobas z480、LightCycler 480Ⅱ、ABI 7500、QuantStudio 5,依次标为A、B、C、D、E、F)对新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测性能的影响,以便选择分析性能... 目的:探讨6种不同型号的实时荧光定量PCR仪(分别为CFX96 DeepWell、GENTIER 96E、Cobas z480、LightCycler 480Ⅱ、ABI 7500、QuantStudio 5,依次标为A、B、C、D、E、F)对新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测性能的影响,以便选择分析性能佳的检测系统用于临床检测。方法:应用2019-nCoV阴性混合鼻咽拭子样本将商品化2019-nCoV RNA液体室内质控品(假病毒)先10倍稀释接着2.5倍梯度稀释至1∶10、1∶25、1∶62.5、1∶156.25、1∶390.63、1∶976.56、1∶2 441.41和1∶6 103.52八个不同浓度,连续3 d内每天每个浓度做5个复孔,共计15个复孔,磁珠法提取核酸后应用同一种2019-nCoV扩增试剂在6种不同实时荧光定量PCR仪上进行扩增以评价其检出限;将1∶10和1∶25两个稀释度的质控品样本,连续5 d内每天每个浓度做5个复孔,共计25孔,磁珠法提取核酸后应用同一种2019-nCoV扩增试剂在6种不同实时荧光定量PCR仪上进行扩增以评价靶基因循环阈值(Ct)的重复性和实验室内精密度。结果:(1)6种实时荧光定量PCR仪对1∶10、1∶25和1∶62.5三个稀释度的质控品样本中ORF1ab和N基因的检出率均为100.0%;而对1∶156.25稀释样本中ORF1ab和N基因的检出率:仪器A为100.0%和100.0%,B为66.7%和86.7%,C为100.0%和100.0%,D为93.3%和93.3%,E为93.3%和93.3%,F为100.0%和100.0%;对1∶390.63稀释样本中ORF1ab和N基因的检出率:仪器A为60.0%和86.7%,B为60.0%和80.0%,C为66.7%和73.3%,D为73.3%和93.3%,E为66.7%和53.3%,F为73.3%和93.3%;1∶976.56、1∶2 441.41和1∶6 103.52三个稀释度的质控品样本中靶基因的检出率分别为4.00%~60.00%、6.67%~20.00%和0~20.00%。(2)6种不同实时荧光定量PCR仪对1∶10和1∶25两个稀释度的质控品样本中Ct的重复性和实验室内不精密度均<5.00%。结论:不同的实时荧光定量PCR仪对2019-nCoV核酸检测性能存在影响,该2019-nCoV扩增试剂在仪器C、F上的分析灵敏度优于另外4种实时荧光定量PCR仪。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 实时荧光定量pcr仪 检测性能 检出限 精密度

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产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR特异性引物设计和方法验证

15

作者 马嘉琦 孙波 +4 位作者 马红梅 王东 赵志军 李勇 曾瑾 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2024年第2期147-155,共9页

目的建立针对水样中产气荚膜梭菌检测的TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,并测试该方法在自来水样中的检测效果。方法选择位于该菌拟核中高度保守的plc基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化后建立了针对该菌的TaqMan实时... 目的建立针对水样中产气荚膜梭菌检测的TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法,并测试该方法在自来水样中的检测效果。方法选择位于该菌拟核中高度保守的plc基因,设计特异性引物和TaqMan探针,经优化后建立了针对该菌的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,结合滤膜法处理含有plc基因的标准菌株的模拟污染水样,并对所建立的方法进行测试。结果所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有高度的特异性,13株食源性致病菌、3株艰难梭菌及1株腐败梭菌的Ct值大于40;该方法的最低检出限为1×10 copies/μL,具有较高的灵敏性;对模拟污染水样的最低检测限为1.0×10^(2)CFU/mL。应用该方法对4份人工模拟污染阳性水样与90份自来水样进行检测发现,2份1.0×10^(2)CFU/mL的模拟污染水样可检出产气荚膜梭菌,2份1.0×10 CFU/mL的模拟污染水样与90份自来水样均未检出产气荚膜梭菌。结论所建立的产气荚膜梭菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法具有特异性好、灵敏性高的优点,对水体中产气荚膜梭菌的检测具有较高的应用价值。 展开更多

关键词 产气荚膜梭菌 实时荧光定量pcr TaqMan探针法 水样检测 食源性致病菌

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多重RT-PCR快速检测转基因油菜 被引量：1

16

作者 钟婷婷 郭诗芬 +2 位作者 卢文斌 张振乾 肖钢 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第5期1576-1582,共7页

全球转基因油菜的数量和种类日益增多,其所带来的潜在风险也备受人们的关注,迫切需要开发一套精准、高效、便捷检测转基因油菜的技术体系。本研究针对花椰菜花叶病毒35 S启动子(pCaMV 35S)、膦丝菌素乙酰转移酶(bar)、5-莽草酸-3-磷酸... 全球转基因油菜的数量和种类日益增多,其所带来的潜在风险也备受人们的关注,迫切需要开发一套精准、高效、便捷检测转基因油菜的技术体系。本研究针对花椰菜花叶病毒35 S启动子(pCaMV 35S)、膦丝菌素乙酰转移酶(bar)、5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(epsps)3个目标基因的序列,以及油菜内源基因cruciferinA (CruA)序列设计四重实时荧光定量聚合酶链式反应(Multiplex real-time fluorescence quantitative,PCR)特异性强的引物和多重荧光探针。通过对多个转基因油菜材料验证,结果表明该方法检测特异性强,重复性好,4个基因的扩增效率都在90%~105%之间,标准曲线相关系数R2都大于0.99。转基因成分bar,epsps和pCaMV35S的检出限为0.1 ng/μL,内参基因CruA的检出限为0.01 ng/μL。本研究建立了一种能快速、高效、准确检测转基因油菜四重实时荧光定量PCR技术的检测体系。 展开更多

关键词 转基因油菜 多重实时荧光定量pcr 检测

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实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较 被引量：4

17

作者 吴晓利 《生物化工》 2021年第3期97-98,101,共3页

目的:分析实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用情况。方法:选择2018年9月—2020年9月收治的乙型肝炎患者22例,将患者分成ELISA组和PCR组,每组患者均为11人,其中ELISA组主要接受COBASAmplicor检测,PCR组接受Lig... 目的:分析实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用情况。方法:选择2018年9月—2020年9月收治的乙型肝炎患者22例,将患者分成ELISA组和PCR组,每组患者均为11人,其中ELISA组主要接受COBASAmplicor检测,PCR组接受Light Cycler仪器检测,对比两组患者的可测定范围、重复性、临床标本检测结果。结果:Light Cycler仪器的实验结果的灵敏度要低于COBAS Amplicor。检测结果表明,实时荧光定量PCR技术具有费用低、省时等特点,PCR-ELISA技术具有价格昂贵、重复性和灵敏度高等特点。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr pcr-ELISA 乙型肝炎病毒 DNA定量检测

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霍乱弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：3

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作者 李丹丹 徐义刚 +3 位作者 邱索平 王昱 高会江 高慎阳 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2016年第11期106-108,共3页

为建立霍乱弧菌(VC)的快速检测方法,以VC的hlyA基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针建立实时荧光定量PCR快速检测法,同时对该方法进行了特异性、灵敏性、稳定性和重复性试验,并对145份临床样品进行了检测。结果表明:特异性试验中15... 为建立霍乱弧菌(VC)的快速检测方法,以VC的hlyA基因为靶基因设计合成引物及Taq Man探针建立实时荧光定量PCR快速检测法,同时对该方法进行了特异性、灵敏性、稳定性和重复性试验,并对145份临床样品进行了检测。结果表明:特异性试验中15株试验菌株荧光定量PCR检测只有VC菌株为阳性,表明该检测方法特异性强;灵敏性试验表明该方法的灵敏度为25 cfu/m L;稳定性和重复性试验表明同一样品重复检测4次,Ct值的变异系数均小于2%;对145份临床样品进行检测,共计检出2份VC阳性样品,与行标法(SN/T 2425—2010)检测结果一致。说明该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。 展开更多

关键词 霍乱弧菌(VC) hlyA基因 实时荧光定量pcr 快速检测 检测方法的建立

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实时荧光定量技术在食品微生物检测和研究中的应用 被引量：3

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作者 李勤 盛占武 孙志高 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2006年第6期118-120,共3页

实时荧光定量PCR技术是通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量的目的,不仅实现了对核酸信息量的分析比较,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、能有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。文章概述了实时荧光定量PCR技术的原理、... 实时荧光定量PCR技术是通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量的目的,不仅实现了对核酸信息量的分析比较,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、能有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。文章概述了实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点及其在食品微生物检测中的应用与研究进展,并探讨了它的技术发展和应用前景。 展开更多

关键词 实时荧光定量pcr 食品微生物 定量检测

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番茄煤污假尾孢叶斑病菌实时荧光定量PCR检测技术的建立及应用 被引量：3

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作者 康华军 柴阿丽 +3 位作者 石延霞 谢学文 郭建光 李宝聚 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1214-1221,共8页

为快速、准确地对番茄煤污假尾孢Pseudocercospora fuligena进行检测与定量分析,基于其Avr4基因设计特异性引物JWB-9F/JWB-7R,建立实时荧光定量PCR检测技术,分析该检测技术的特异性和灵敏度,并利用采集自重庆市、河北省和广西壮族自治区... 为快速、准确地对番茄煤污假尾孢Pseudocercospora fuligena进行检测与定量分析,基于其Avr4基因设计特异性引物JWB-9F/JWB-7R,建立实时荧光定量PCR检测技术,分析该检测技术的特异性和灵敏度,并利用采集自重庆市、河北省和广西壮族自治区的14份材料对该检测技术的应用效果进行验证。结果表明,引物JWB-9F/JWB-7R仅可从番茄煤污假尾孢基因组DNA中扩增出232 bp的目的片段,特异性良好;实时荧光定量PCR检测技术的灵敏度为67.09 copies/μL,是普通PCR检测技术的1 000倍。且该实时荧光定量PCR检测技术可以实现未显症样本中番茄煤污假尾孢的定量检测,检测限为6.02×10~2copies/μL,实际应用效果较好。表明所建立的实时荧光定量PCR检测技术可用于番茄煤污假尾孢叶斑病的早期诊断和预测预报。 展开更多

关键词 煤污假尾孢 Avr4 实时荧光定量pcr 检测

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