实时荧光环介导等温扩增快速分型致泻大肠埃希氏菌方法的建立

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作者 李芮 黄艳梅 +5 位作者 童晓钰 山珊 刘成伟 谭俣宬 陈芳 刘道峰 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期233-240,I0005,I0006,共10页

致泻大肠埃希氏菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)是一种重要的食源性致病菌,该研究立足DEC目前流行率高、基层分型困难的现状,建立了快速分型5种DEC的实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法... 致泻大肠埃希氏菌(diarrheagenic Escherichia coli,DEC)是一种重要的食源性致病菌,该研究立足DEC目前流行率高、基层分型困难的现状,建立了快速分型5种DEC的实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法。针对DEC的8段特征性毒力基因pic、aggR、lt、st、stx 1、stx2、escV、invE及大肠埃希氏菌属特异性基因uidA设计LAMP引物,优化反应体系,并对方法的分析性能及临床菌株分型效果进行了评价。结果显示,所建立的方法对pic和escV的检出限是1 ng/μL,对aggR、stx 1、invE和uidA的检出限是100 pg/μL,对lt、st和stx 2的检出限是10 pg/μL,该方法灵敏度与特异度均为100%,DEC型别间无交叉反应,对临床菌株的分型与实际结果完全一致。方法快速简便、设备要求低,借助恒温荧光读取设备可在40 min内迅速判定待检菌株是否为DEC及其致病类型,可满足各机构现场快速检测的需求。 展开更多

关键词 致泻大肠埃希氏菌 实时荧光环介导等温扩增 快速检测 毒力基因 分型 食品安全

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恒温实时荧光法快速检测奶粉中阪崎肠杆菌方法的建立 被引量：6

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作者 李丽丽 叶蕾 +3 位作者 张璜 曹炜伟 邓梓欣 石磊 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2016年第9期308-313,共6页

为实现奶粉中快速检测阪崎肠杆菌,本文建立了检测阪崎肠杆菌的恒温实时荧光法。针对阪崎肠杆菌16S r RNA设计三组LAMP引物,采用Deaou-308C恒温实时荧光检测平台,选取常见病原菌标准株进行引物特异性检测;选取阪崎肠杆菌标准菌株进行基因... 为实现奶粉中快速检测阪崎肠杆菌,本文建立了检测阪崎肠杆菌的恒温实时荧光法。针对阪崎肠杆菌16S r RNA设计三组LAMP引物,采用Deaou-308C恒温实时荧光检测平台,选取常见病原菌标准株进行引物特异性检测;选取阪崎肠杆菌标准菌株进行基因组DNA灵敏度和最低检测限测定,同时利用人工污染方式检测此方法在脱脂和全脂奶粉中的灵敏度和最低检测限,利用Real Amp法和国标法对20份市售奶粉进行对比实验。结果显示,引物组16S-11扩增效率最优,与常见病原菌无交叉反应,对阪崎肠杆菌基因组DNA、阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的灵敏度分别达到102 CFU/m L、102 CFU/m L和103 CFU/m L;对阪崎肠杆菌基因组DNA和阪崎肠杆菌污染的脱脂和全脂奶粉的最低检测限分别达到103 CFU/m L、103 CFU/m L和104 CFU/m L;在20份市售奶粉样品中Real Amp检测结果与传统国标培养结果一致,表明本文建立的阪崎肠杆菌Real Amp检测方法适用于阪崎肠杆菌的快速检测。 展开更多

关键词 恒温实时荧光法 阪崎肠杆菌 奶粉

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实时荧光环介导等温扩增技术检测婴儿配方奶粉中阪崎克罗诺杆菌的研究 被引量：5

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作者 石伟雄 王羽 +1 位作者 杨粤 张伟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2016年第6期2263-2272,共10页

目的建立实时荧光环介导等温扩增法(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测阪崎克罗诺杆菌。方法以阪崎克罗诺杆菌(基因号AY702093)16S^23S rRNA的保守序列进行引物设计,对dNTPs、Mg^(2+)及模板... 目的建立实时荧光环介导等温扩增法(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测阪崎克罗诺杆菌。方法以阪崎克罗诺杆菌(基因号AY702093)16S^23S rRNA的保守序列进行引物设计,对dNTPs、Mg^(2+)及模板浓度等反应条件进行优化,并考察该方法的特异性和灵敏度。结果实时荧光LAMP法检测的最佳反应体系为:内引物1.6μL FIP和1.6μL BIP,外引物:0.5μL F3和0.5μL B3,2.5μL2.5mmol/L d NTP,2μL 4 mmol/L MgSO_4,3μL Buffer,1.6μL 10×Bst DNA聚合酶,3μL DNA模板,0.5μL 100×荧光染料,用灭菌双蒸水补足25μL体系,在63℃下反应60 min。除阪崎克罗诺杆菌之外其他菌株均没有产生特异性荧光扩增曲线。实时荧光LAMP检测克罗诺杆菌的灵敏度可达到8×10-2 CFU/mL。结论本方法检测克罗诺杆菌具有耗时短、特异性强及灵敏度高等优点,可为快速检测婴儿配方奶粉中的克罗诺杆菌提供参考。 展开更多

关键词 实时荧光 环介导等温扩增 阪崎克罗诺杆菌 婴儿配方奶粉

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山羊支原体山羊肺炎亚种可视化实时荧光LAMP检测方法的建立及应用 被引量：3

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作者 宋相阳 颜新敏 +5 位作者 付磊 陈胜利 郝华芳 高鹏程 刘永生 储岳峰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期671-678,共8页

为建立快速简便、灵敏度高、特异性强的山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp)核酸快速检测方法,选择Mccp的92.1基因序列为靶序列,设计2条外引物、2条内引物和2条环引物,并向反应体系中添加可视化染料羟基溴酚蓝(HNB)或荧光染料(Eva green),分... 为建立快速简便、灵敏度高、特异性强的山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp)核酸快速检测方法,选择Mccp的92.1基因序列为靶序列,设计2条外引物、2条内引物和2条环引物,并向反应体系中添加可视化染料羟基溴酚蓝(HNB)或荧光染料(Eva green),分别建立Mccp可视化环介导恒温扩增(V-LAMP)和实时荧光环介导恒温扩增(RF-LAMP)检测方法,并对比两种方法的敏感性、特异性、重复性以及两种方法在山羊组织样品中的检测效果。结果显示,两种方法均可检出1.0×10 copies/μL的核酸标准品,灵敏度高;与其他支原体及细菌,如丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体、多杀性巴氏杆菌、肺炎克雷伯菌等类症病原体,均无交叉反应;V-LAMP、RF-LAMP的变异系数均小于1%;对人工感染的试验样品和临床样品进行检测,两种检测方法结果一致,阳性率为9.09%,并且与实时定量PCR检测结果一致。本试验建立的V-LAMP和RF-LAMP为Mccp流行病学调查和疾病诊断提供了新的临床快速检测方法。 展开更多

关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 可视化环介导恒温扩增 实时荧光环介导恒温扩增 核酸检测

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四种单增李斯特菌常用核酸检测方法的评价与应用 被引量：3

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作者 纪顺师 叶长芸 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1085-1091,1099,共8页

目的应用聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光PCR(Real-time PCR)、环介导等温扩增(LAMP)和多交叉置换扩增(MCDA)4种核酸检测方法,对单增李斯特菌进行检测,探索特异、灵敏、高效,且适用于肉类样本中单增李斯特菌检测的核酸检测方法。方法比... 目的应用聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光PCR(Real-time PCR)、环介导等温扩增(LAMP)和多交叉置换扩增(MCDA)4种核酸检测方法,对单增李斯特菌进行检测,探索特异、灵敏、高效,且适用于肉类样本中单增李斯特菌检测的核酸检测方法。方法比较文献报道的以单增李斯特菌特异性基因lmo0733作为靶标的4种核酸检测方法,评价这4种方法在特异性、灵敏度、检出速率方面的差异,并应用于单增李斯特菌模拟样本和猪肉样本中单增李斯特菌的检测。结果传统PCR、Real-time PCR、LAMP和MCDA方法都能准确检测单增李斯特菌,其中MCDA方法检测下限为10 fg/反应,且能在30 min内完成对样本核酸的检测,灵敏度和检出速率优于其它3种核酸诊断方法;MCDA方法对于模拟样本和实际样本的检测效率优于其它3种核酸检测方法和传统分离培养方法,能够提高样本检测的阳性率。结论MCDA方法作为一种特异、灵敏和高效的核酸检测方法,可用于肉制品中单增李斯特菌检测时的快速筛查,并能提高传统分离培养方法对标本中单增李斯特菌的阳性检出率。 展开更多

关键词 单增李斯特菌 聚合酶链式反应 实时荧光PCR 环介导等温扩增 多交叉置换扩增

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RF-LAMP技术检测肉制品中沙门氏菌的研究 被引量：3

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作者 徐慧 陈发荣 +6 位作者 王保娟 王永 石磊 陈洵 常彦磊 时国强 张伟 《农产品加工（下）》 2018年第12期56-58,62,共4页

研究建立了实时荧光环介导等温扩增技术(Real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RFLAMP)检测沙门氏菌(Salmonella)的方法。针对沙门氏菌侵袭蛋白(Invasion protein A,inv A)基因验证该方法特异性,同时对灵敏... 研究建立了实时荧光环介导等温扩增技术(Real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RFLAMP)检测沙门氏菌(Salmonella)的方法。针对沙门氏菌侵袭蛋白(Invasion protein A,inv A)基因验证该方法特异性,同时对灵敏度和人工污染肉品的检出限进行测定。结果表明,沙门氏菌呈阳性结果,非沙门氏菌均呈阴性结果。该方法检测纯菌的灵敏度为56 CFU/m L,人工污染肉品的检出限为5.6×104 CFU/g。该方法特异性强、灵敏度高,可实时检测沙门氏菌,实现了对沙门氏菌的快速检测。 展开更多

关键词 实时荧光 环介导等温扩增 沙门氏菌 检测 肉制品

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实时荧光环介导等温扩增技术检测糕点中沙门氏菌的研究 被引量：3

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作者 于潇潇 张蕴哲 +2 位作者 徐慧 张伟 苑宁 《食品科技》 CAS 北大核心 2019年第4期333-337,共5页

研究建立一种实时荧光环介导等温扩增技术(Real-time?uorescence loop-mediated isothermal amplification,RF﹣LAMP)检测沙门氏菌的方法。利用invA基因设计引物,进行特异性验证,并对灵敏度和人工污染蛋糕的检出限进行测定。结果显示,... 研究建立一种实时荧光环介导等温扩增技术(Real-time?uorescence loop-mediated isothermal amplification,RF﹣LAMP)检测沙门氏菌的方法。利用invA基因设计引物,进行特异性验证,并对灵敏度和人工污染蛋糕的检出限进行测定。结果显示,沙门氏菌呈阳性结果,非沙门氏菌呈阴性结果,表明特异性良好。该方法检测纯培养物的灵敏度为6.3 cfu/mL,人工污染蛋糕样品的检出限为63 cfu/g。另外,利用该方法对65份糕点样品进行检测,并与GB 4789.4—2016方法进行比较,其敏感性、特异性和符合率分别为100%、98.44%和98.46%。该方法特异性好,灵敏度高,操作简单,可实时监测扩增反应,对沙门氏菌引起的食源性疾病的预防和控制具有重要意义。 展开更多

关键词 实时荧光 环介导等温扩增 沙门氏菌 INV A基因 糕点

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可视化和实时荧光环介导恒温扩增技术快速检测原料乳中的沙门氏菌 被引量：3

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作者 周杨 万强 +4 位作者 蔡芷荷 卢勉飞 杨绪伟 吴清平 曲晓莹 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期3741-3755,共15页

【背景】原料乳质量控制是乳制品生产流程中的关键环节,沙门氏菌是污染原料乳的主要致病菌之一。随着生物检测技术的不断发展,建立用于快速检测原料乳中沙门氏菌的实用型方法具有重要意义。【目的】评价可视化环介导恒温扩增技术(visual... 【背景】原料乳质量控制是乳制品生产流程中的关键环节,沙门氏菌是污染原料乳的主要致病菌之一。随着生物检测技术的不断发展,建立用于快速检测原料乳中沙门氏菌的实用型方法具有重要意义。【目的】评价可视化环介导恒温扩增技术(visual loop-mediated isothermal amplification,V-LAMP)和实时荧光环介导恒温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)方法快速检测原料乳中沙门氏菌的实效性。【方法】建立沙门氏菌LAMP反应体系和反应条件,对比V-LAMP和RF-LAMP两种方法的特异性、灵敏度、稳定性及其应用于实际样品检测的效用。【结果】采用V-LAMP和RF-LAMP方法检测沙门氏菌标准菌株,其结果均为阳性,检测非沙门氏菌标准菌株其结果均为阴性;该两种方法的检出限为13 CFU/mL,检测重复率均为100%;经检测10份人工污染样品,该两种方法的检测结果与实际结果高度一致;经检测73份实际样品,相对于标准方法,该两种方法其相对特异性分别为94.12%和92.65%,相对敏感度分别为100%和100%,相对准确率分别为94.52%和93.15%,一致性χ^2值分别为2.25和3.20,与标准方法无明显差异(P>0.05)。【结论】V-LAMP和RF-LAMP方法检测特异性好、灵敏度高、稳定性好,适用于原料乳中沙门氏菌的快速检测。 展开更多

关键词 可视化 实时荧光 环介导恒温扩增技术 原料乳 沙门氏菌 快速检测 效用评价

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实时荧光环介导等温扩增技术快速检测牛肉中的大肠杆菌O157 被引量：3

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作者 苑宁 石磊 +5 位作者 王永 陈发荣 时凡 徐慧 贾丽娜 张伟 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第24期6489-6495,共7页

目的建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)快速检测大肠杆菌(Escherichia coli,EHEC)O157的分析斱法。方法针对大肠杆菌O157编码O抗原的rfbE基因设计引物。对该斱... 目的建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)快速检测大肠杆菌(Escherichia coli,EHEC)O157的分析斱法。方法针对大肠杆菌O157编码O抗原的rfbE基因设计引物。对该斱法迚行特异性验证,同时对大肠杆菌O157:H7纯培养物的灵敏度和人工污染牛肉的检出限迚行测定,对61份牛肉样品迚行RF-LAMP检测,幵与GB4789.36-2016斱法迚行比较,评价RF-LAMP斱法的敏感性、特异性和准确度。结果 10株大肠杆菌O157呈阳性结果, 21株非大肠杆菌O157呈阴性结果,该斱法特异性良好。纯培养物检测的灵敏度为5.1CFU/mL,人工污染的牛肉样品的检出限为5.1 CFU/g。结论本研究建立的RF-LAMP技术特异性好、灵敏度高、操作简单,可实时监测扩增反应,避克了繁琐的电泳过程,实现了对大肠杆菌O157的快速检测,对大肠杆菌O157引起的食源性疾病的预防和控制具有重要意义。 展开更多

关键词 实时荧光 环介导等温扩增 大肠杆菌O157 rfbE基因 牛肉 快速检测

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鲤春病毒血症病毒恒温实时荧光快速检测方法的建立 被引量：2

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作者 陈进会 余霞 +6 位作者 余华 黄伟 邱杨 刘建丽 李红梅 石磊 叶蕾 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1146-1151,共6页

根据鲤春病毒血症病毒(SVCV)的保守序列glyG基因,设计了3套LAMP引物,以ESE-Quant tube scanner为检测平台,通过简单易行的LAMP扩增检测SVCV,LAMP扩增温度为63℃。结果显示,在引入环引物后,恒温操作下30min内可得出结果,第1套LAMP引物显... 根据鲤春病毒血症病毒(SVCV)的保守序列glyG基因,设计了3套LAMP引物,以ESE-Quant tube scanner为检测平台,通过简单易行的LAMP扩增检测SVCV,LAMP扩增温度为63℃。结果显示,在引入环引物后,恒温操作下30min内可得出结果,第1套LAMP引物显示出优良的扩增效率和扩增特异性;并且建立的LAMP法有极佳的灵敏度,其检测限可达到每反应2.4pg。与传统LAMP和荧光定量仪两种方式作为LAMP检测平台相比,ESE-Quant tube scanner平台具有简单、便携,试验过程数据化和自动化的特点,适合SVCV的现场检测和大规模监控。 展开更多

关键词 鲤春病毒血症病毒 恒温实时荧光 环介导等温扩增 ESE—Quant TUBE SCANNER

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RF-LAMP技术检测鸡肉中小肠结肠炎耶尔森氏菌 被引量：2

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作者 张蕴哲 杨倩 +2 位作者 马晓燕 杨澜 张伟 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2018年第4期133-138,共6页

本研究建立实时荧光环介导等温扩增技术检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法,扩增产物经电泳和酶切鉴定,表明扩增结果正确。本研究验证该方法特异性,对灵敏度和人工污染鸡肉的检出限进行测定。结果表明小肠结肠炎耶尔森氏菌株呈阳性结果,非... 本研究建立实时荧光环介导等温扩增技术检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法,扩增产物经电泳和酶切鉴定,表明扩增结果正确。本研究验证该方法特异性,对灵敏度和人工污染鸡肉的检出限进行测定。结果表明小肠结肠炎耶尔森氏菌株呈阳性结果,非小肠结肠炎耶尔森氏菌株均呈阴性结果。该方法检测纯菌的灵敏度为61 CFU/m L,人工污染鸡肉的检出限为46 CFU/g。该方法特异性强、灵敏度高、可实时检测小肠结肠炎耶尔森氏菌,能够实现对小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速检测。 展开更多

关键词 实时荧光 环介导等温扩增 小肠结肠炎耶尔森氏菌 检测 鸡肉

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恒温实时荧光法快速检测简单异尖线虫方法的建立 被引量：2

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作者 张森 邓艳 +5 位作者 黄燕琼 何淑华 戴金 赵尚志 石磊 柏建山 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期53-57,共5页

为了快速鉴定简单异尖线虫,本研究建立了一套检测简单异尖线虫DNA的恒温实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,根据LAMP方法原理,针对简单异尖线虫ITS2区域设计引物特异性识别靶标基因。进行了特... 为了快速鉴定简单异尖线虫,本研究建立了一套检测简单异尖线虫DNA的恒温实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,根据LAMP方法原理,针对简单异尖线虫ITS2区域设计引物特异性识别靶标基因。进行了特异性、灵敏度、重复性和实际样品的测试,并与传统的PCR方法进行比较。结果表明,该方法能够特异性扩增简单异尖线虫DNA,对含有简单异尖线虫ITS2目的基因片段的质粒DNA检测限为1 fg/μL,灵敏度比传统的PCR方法高100倍,重复性良好,对实际样品进行检测,与传统的PCR测序方法结果相符。本研究建立的恒温实时荧光快速检测方法适用于特异性检测简单异尖线虫。 展开更多

关键词 恒温实时荧光法 简单异尖线虫 快速检测

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进境水产品中典型异尖线虫恒温实时荧光检测法的建立与应用 被引量：2

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作者 柏建山 赵尚志 +5 位作者 张森 邓艳 黄燕琼 何淑华 戴金 石磊 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2018年第6期255-259,203,共6页

本研究建立了一套检测进境水产品中典型异尖线虫DNA的恒温实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,根据LAMP方法原理,针对典型异尖线虫ITS2区域设计三套引物,特异性识别靶标基因。对比验证了典型异... 本研究建立了一套检测进境水产品中典型异尖线虫DNA的恒温实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,根据LAMP方法原理,针对典型异尖线虫ITS2区域设计三套引物,特异性识别靶标基因。对比验证了典型异尖线虫、简单异尖线虫、短棘异尖线虫、抹香鲸异尖线虫、Anisakis nascettii、宫脂线虫、对盲囊线虫和颚口线虫的引物特异性;研究了模板浓度1 ng/μL至10 ag/μL的LAMP反应灵敏度,比传统的PCR方法高100倍;并在最低检测限1 fg/μL的质粒模板进行15次重复试验;对来自不同热带国家和地区的进境的41个实际样品进行测试,与传统PCR方法进行比较,假阳性率为0。恒温实时荧光快速检测方法适用于特异性检测典型异尖线虫。 展开更多

关键词 恒温实时荧光法 典型异尖线虫 快速检测

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NDM-1阳性细菌实时荧光LAMP方法的建立及应用 被引量：2

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作者 陈斌 杨银梅 +3 位作者 钟志敏 雷秀霞 刘大渔 徐邦牢 《检验医学》 CAS 2016年第8期688-693,共6页

目的建立一种实时荧光环介导等温扩增(LAMP)方法快速检测新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)阳性细菌。方法根据NDM-1基因序列设计4套引物并进行优化,对LAMP反应中的荧光染料SYTO-9浓度进行优化,同时考察该方法的检出限和特异性。利用本方... 目的建立一种实时荧光环介导等温扩增(LAMP)方法快速检测新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)阳性细菌。方法根据NDM-1基因序列设计4套引物并进行优化,对LAMP反应中的荧光染料SYTO-9浓度进行优化,同时考察该方法的检出限和特异性。利用本方法检测72例临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌。结果本研究建立的实时荧光LAMP方法,其荧光染料SYTO-9的最佳浓度为4μmol/L;63℃恒温扩增35 min可检出101拷贝/μL的标准阳性模板;特异性较好;对72例临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌检出的阳性率为16.7%(12/72),12株NDM-1阳性细菌经测序验证,准确率为100%。结论本研究建立的检测NDM-1阳性细菌的实时荧光LAMP方法具有快速、操作简便、特异性好、敏感性高、准确、可靠等优点,可以直观、实时地观察反应的进行情况,适合临床NDM-1阳性细菌的快速检测。 展开更多

关键词 实时荧光环介导等温扩增 新德里金属β-内酰胺酶1细菌 快速检测

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实时荧光环介导等温扩增快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的建立与评价

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作者 赵峻英 董剑 +2 位作者 何建春 梅小亿 欧国平 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第1期62-66,共5页

目的 建立实时荧光环介导恒温扩增(Rea-LAMP)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法 针对葡萄球菌的mec A耐药标志性基因和SA特有的fem A基因的6个区域设计6条特异性引物,对MRSA、MSSA以及其他菌株等19株标准菌株的全基因... 目的 建立实时荧光环介导恒温扩增(Rea-LAMP)快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的方法。方法 针对葡萄球菌的mec A耐药标志性基因和SA特有的fem A基因的6个区域设计6条特异性引物,对MRSA、MSSA以及其他菌株等19株标准菌株的全基因组DNA进行Rea-LAMP,评价这些标准菌株的特异性、灵敏度和重复性;根据这些标准菌株的特异性,用Rea-LAMP反应体系检测临床分离的68株金黄色葡萄球菌(SA)菌株,并与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果进行比较。结果 本研究体系的引物扩增效果好,无引物二聚体,在19株标准菌株的检测中,除了MRSA和MSSA有相应的反应曲线外,其余菌株均为阴性;本体系的灵敏度可达1μg/L,68株临床SA菌株检测结果与VITEK2 Compact全自动微生物分析仪鉴定结果一致。结论 Rea-LAMP反应体系检测MRSA特异性强、稳定性好、灵敏度高、操作简单快捷,可用于MRSA的快速检测。 展开更多

关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 实时荧光 环介导恒温扩增 mec A基因 fem A基因

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实时荧光环介导等温扩增技术检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌 被引量：24

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作者 贾雅菁 付博宇 +4 位作者 王羽 马晓燕 张先舟 苑宁 张伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第6期184-189,共6页

建立牛乳中蜡样芽孢杆菌便捷可靠的检测方法,根据已公布的蜡样芽孢杆菌hbl A基因序列设计内外引物,并向反应体系中加入荧光染料SYBRGreenⅠ,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated i... 建立牛乳中蜡样芽孢杆菌便捷可靠的检测方法,根据已公布的蜡样芽孢杆菌hbl A基因序列设计内外引物,并向反应体系中加入荧光染料SYBRGreenⅠ,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,Real Amp)检测蜡样芽孢杆菌的方法,扩增产物经电泳和酶切鉴定。通过21株致病菌验证RealAmp特异性,并比较了Real Amp与普通环介导等温扩增技术的敏感性,对人工污染的检出限进行了测定。结果表明对21 株致病菌进行特异性实验,4株蜡样芽胞杆菌呈阳性结果,17株非蜡样芽胞杆菌均呈阴性结果。RealAmp检测纯菌的灵敏度为8.2 CFU/m L,比普通环介导等温扩增技术的灵敏度高10倍,人工污染牛乳RealAmp的检出限为8.2 CFU/m L。并且在20 min左右即可判定结果。该方法快速、准确、灵敏度高、操作便捷、可实时监控检测蜡样芽孢杆菌,有望成为快速检测蜡样芽孢杆菌的有效方法。 展开更多

关键词 实时荧光环介导等温扩增检测技术 蜡样芽胞杆菌 检测 牛乳

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食品检测能力验证中沙门氏菌的分离鉴定 被引量：11

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作者 戴冠苹 张红云 +2 位作者 高海军 刘莹 彭星星 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第6期2491-2496,共6页

目的参加编号为CFAPA-375的食品中沙门氏菌的检测能力验证,验证实验室沙门氏菌的检测能力。方法采用国家标准法检测沙门氏菌能力验证样品,同时采用实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)法作为辅助方... 目的参加编号为CFAPA-375的食品中沙门氏菌的检测能力验证,验证实验室沙门氏菌的检测能力。方法采用国家标准法检测沙门氏菌能力验证样品,同时采用实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)法作为辅助方法。对分离出的可疑菌落,采用全自动微生物鉴定系统和实时荧光LAMP法进行全面鉴定。结果样品N1和N3中检出沙门氏菌,样品N2中未检出沙门氏菌,实时荧光LAMP法与国家标准法检测结果一致。结论本次实验室的能力验证结果为"满意",验证了实验室沙门氏菌的检测能力。实时荧光LAMP法快速、简便、特异性强,可与国家标准法配合使用,以确保实验结果的准确快速。 展开更多

关键词 沙门氏菌 鉴定 能力验证 实时荧光环介导等温扩增法

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非洲猪瘟病毒实时荧光环介导等温扩增方法的建立 被引量：2

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作者 王宏燕 杨作丰 +4 位作者 李秀梅 杨利敏 边际 董娜 张立国 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期27-30,F0002,共5页

本文采用实时荧光环介导等温扩增方法建立一种快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的方法。根据GenBank中公布的非洲猪瘟病毒编码主要衣壳蛋白p72的B 646 L基因序列,针对其6个保守区段设计3对引物和1条环介导等温扩增(LAMP)TaqMan探针,对其特异... 本文采用实时荧光环介导等温扩增方法建立一种快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的方法。根据GenBank中公布的非洲猪瘟病毒编码主要衣壳蛋白p72的B 646 L基因序列,针对其6个保守区段设计3对引物和1条环介导等温扩增(LAMP)TaqMan探针,对其特异性、灵敏性进行评估,进行临床样本检测试验,并与OIE推荐的实时荧光定量PCR检测结果进行比较分析。结果显示,该检测方法能够特异性地检出ASFV的存在,具有良好的特异性;灵敏度达到1 pg/μL。本方法的特异性、灵敏性及临床样品检测结果与OIE推荐的实时荧光定量PCR检测结果高度一致。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 B646L基因 实时荧光环介导等温扩增

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实时荧光环介导等温扩增技术检测熏肉中单增李斯特氏菌的研究 被引量：2

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作者 李森 贾丽娜 +5 位作者 王鑫 杨倩 马晓燕 魏丹 袁耀武 张伟 《食品科技》 CAS 北大核心 2018年第8期319-324,共6页

建立一种实时荧光环介导等温扩增方法(Real-Time Fluorescence Loop-mediated Isothermal Amplification,RTF-LAMP)来快速、灵敏地检测熏肉中单增李斯特氏菌。针对单增李斯特氏菌的特异性基因inl B设计4条LAMP引物,并建立一套最优的RTF-... 建立一种实时荧光环介导等温扩增方法(Real-Time Fluorescence Loop-mediated Isothermal Amplification,RTF-LAMP)来快速、灵敏地检测熏肉中单增李斯特氏菌。针对单增李斯特氏菌的特异性基因inl B设计4条LAMP引物,并建立一套最优的RTF-LAMP反应体系。对该方法进行特异性验证,同时对灵敏度和人工污染熏肉的检出限进行测定。3株单增李斯特氏菌被检测为阳性,17株非单增李斯特氏菌为阴性。表明引物具有良好的特异性。RTF-LAMP和传统LAMP检测单增李斯特氏菌的灵敏度分别为1.1×10~1、1.1×10~2 CFU/m L。通过对熏肉进行人工污染,得出RTF-LAMP的检出限为3.5×10~1 CFU/g。通过与国标方法GB 4789.30—2016进行对比并计算RTF-LAMP反应的敏感性,特异性和准确度,结果分别为100.00%、98.44%和98.46%。研究建立的RTF-LAMP能够实时、快速地检测熏肉中单增李斯特氏菌,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 实时荧光环介导等温扩增 单增李斯特氏菌 inlB 检测 熏肉

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白斑综合症病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用 被引量：15

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作者 李红梅 江晓 +5 位作者 刘助红 赵哲 任春华 胡超群 石磊 王广军 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期142-148,共7页

研究利用ESE-Quant tube scanner检测平台,建立了一套基于环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)的实时荧光检测方法,用于白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的检测;并在此基础上,与巢式PCR、R... 研究利用ESE-Quant tube scanner检测平台,建立了一套基于环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)的实时荧光检测方法,用于白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的检测;并在此基础上,与巢式PCR、Real-time PCR和其他已发表的4种LAMP方法在检测灵敏度、实际应用方面进行比较。结果显示,研究建立的实时荧光LAMP检测方法在63℃恒温反应30min可检测到最低为105倍稀释的基因组DNA模板,与Real-time PCR检测方法的灵敏度相当,高于巢式PCR和其他已发表的4种LAMP方法的检测灵敏度;而且特异性较好,与传染性皮下及造血组织坏死病毒等5种常见对虾病原DNA均无交叉反应。通过构建质粒进一步进行灵敏度测试显示,本研究建立的实时荧光LAMP检测方法最低检测限度为24个拷贝质粒DNA,检出时间亦为30min。通过对66份待检样品的检测结果显示,实时荧光LAMP检测方法的检出阳性率为7.57%,准确率为100%,高于其他WSSV的检测方法。因此,研究建立的WSSV实时荧光LAMP检测方法,操作简单,反应速度快,特异性好,灵敏度高,成本低廉,可以直观、实时地观察反应的进行情况,适合对虾养殖现场及诊断实验室的WSSV快速检测。 展开更多

关键词 白斑综合症病毒 实时荧光LAMP ESE-Quant TUBE SCANNER

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