Pfu-sso7d DNA聚合酶的制备及反应缓冲液的研究

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作者 刘俊伶 陶倩倩 +2 位作者 李琳钰 姚新欣 张鑫 《赣南医学院学报》 2024年第4期374-382,共9页

目的:制备有高效扩增长片段以及复杂片段能力的Pfu DNA聚合酶。方法:运用基因工程学方法构建重组质粒pET-28a-Pfu-sso7d,采用优化后的诱导条件对pET-28a-Pfu-sso7d实行诱导表达,将菌液超声破碎并提取上清液,应用镍亲和层析洗脱纯化取得... 目的:制备有高效扩增长片段以及复杂片段能力的Pfu DNA聚合酶。方法:运用基因工程学方法构建重组质粒pET-28a-Pfu-sso7d,采用优化后的诱导条件对pET-28a-Pfu-sso7d实行诱导表达,将菌液超声破碎并提取上清液,应用镍亲和层析洗脱纯化取得较纯Pfu-sso7d DNA聚合酶。采用qPCR方法对酶进行酶活力单位定量、确定反应缓冲液组分最佳浓度及检测自制Pfu-sso7d DNA聚合酶酶活性。结果:在1 mmol·L^(-1) IPTG、16℃条件下诱导Pfu-sso7d DNA聚合酶菌液16 h,Pfu-sso7d DNA聚合酶高效表达;用20~100 mmol·L^(-1)咪唑可将蛋白洗脱。Pfu-sso7d DNA聚合酶最终活力单位定量为1 U·μL^(-1)。PCR最佳反应缓冲液为pH9.0、20 mmol·L^(-1) Tris-HCl、0.6 mmol·L^(-1) MgSO_(4)、50 mmol·L^(-1) KCl、5 mmol·L^(-1)(NH_(4))_(2)SO_(4)、0.1%Triton X-100,添加剂组分为3%DMSO、1 mol·L^(-1)甜菜碱。Pfu-sso7d DNA聚合酶能高效扩增3000 bp的目的条带,活性达到商用高保真DNA聚合酶水平。结论:基于基因重组制备的Pfu-sso7d DNA聚合酶可进行高效的PCR反应,节省了实验室PCR成本,为进一步提高Pfu DNA聚合酶活性提供一定技术参考。 展开更多

关键词 聚合酶链式反应 Pfu DNA聚合酶 Sso7d 反应缓冲液

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pH值和缓冲剂对抗坏血酸-半胱氨酸模式反应形成香味化合物的影响 被引量：2

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作者 刘应煊 余爱农 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第6期143-149,共7页

以固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术对抗坏血酸与半胱氨酸的模式反应产物进行鉴定,研究pH值和缓冲剂浓度对模式反应形成香味化合物的影响。依赖于不同的pH值条件,模式反应主要产生呋喃、吡嗪、噻唑、噻吩及含硫脂环化合物,这些化合物... 以固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术对抗坏血酸与半胱氨酸的模式反应产物进行鉴定,研究pH值和缓冲剂浓度对模式反应形成香味化合物的影响。依赖于不同的pH值条件,模式反应主要产生呋喃、吡嗪、噻唑、噻吩及含硫脂环化合物,这些化合物种类及产量的变化形成各具特色的肉香风味,呋喃类化合物主要形成于低pH值条件下,而吡嗪类化合物则易于在碱性条件下生成,噻唑类化合物的形成与pH值的依赖性不太显著,但过高的酸度会抑制其生成,中性偏碱的条件对噻吩和含硫脂环化合物的生成有利;Na2HPO4-NaH2PO4缓冲剂对模式反应没有催化作用,它们对模式反应形成香味化合物的影响体现于其维持反应体系pH值稳定的能力,0.20mol/L Na2HPO4-NaH2PO4缓冲剂对维持反应体系pH值的相对稳定是合适的。 展开更多

关键词 MAILLARD反应 抗坏血酸 香味化合物 固相微萃取 PH值 缓冲剂

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催化剂与碱性缓冲液作用下欢喜岭油田稠油水热裂解反应实验 被引量：1

3

作者 史国蕊 《东北石油大学学报》 CAS 北大核心 2012年第6期71-75,10,共5页

模拟注蒸气油藏条件,开展催化剂与碱性缓冲液作用下欢喜岭油田稠油的水热裂解反应模拟实验,向高温高压反应釜中加入稠油、水、催化剂、碱性缓冲液和油层矿物,在160～300℃温度下反应24～240h,测定反应前后稠油黏度、SARA族组成和元素组... 模拟注蒸气油藏条件,开展催化剂与碱性缓冲液作用下欢喜岭油田稠油的水热裂解反应模拟实验,向高温高压反应釜中加入稠油、水、催化剂、碱性缓冲液和油层矿物,在160～300℃温度下反应24～240h,测定反应前后稠油黏度、SARA族组成和元素组成,考察催化剂、反应时间、反应温度、油层矿物及铵盐碱性缓冲液等因素的影响.结果表明:在油溶性催化剂FeA2作用下,欢喜岭油田稠油在水热裂解反应后黏度显著降低,添加0.010mol/L的催化剂FeA2在240℃下反应24h可使稠油黏度降低62.4%;铵盐碱性缓冲液对稠油水热裂解反应具有协同催化作用,添加0.010mol/L的催化剂FeA2和质量分数为3.0%的铵盐碱性缓冲液在240℃下反应24h可使稠油黏度降低90.1%.稠油井经过水热裂解处理后周期产油量明显增加,周期油气比大幅提高,并且催化剂与碱性缓冲液协同处理的开采效果要明显好于催化剂处理的.添加催化剂与碱性缓冲液的水热裂解开采技术可应用于提高蒸气吞吐和蒸气驱等热采井的产量和采收率. 展开更多

关键词 稠油 油溶性催化剂 水热裂解反应 碱性缓冲液 欢喜岭油田

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缓冲溶液离子强度和组成对亚氯酸盐氧化硫代硫酸盐反应的影响

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作者 徐丽 黄海清 +1 位作者 潘悦 龙丽梅 《东华理工大学学报（自然科学版）》 CAS 2019年第3期285-290,共6页

在化学反应动力学机理的研究过程中,某些环境因素如缓冲液组成和离子强度的影响常会被忽略。采用高效液相色谱法,对ClO2^-氧化S2O3^2-受缓冲溶液离子强度以及种类的影响进行研究。结果表明,在同一类型的缓冲溶液中,反应中间物的物种并... 在化学反应动力学机理的研究过程中,某些环境因素如缓冲液组成和离子强度的影响常会被忽略。采用高效液相色谱法,对ClO2^-氧化S2O3^2-受缓冲溶液离子强度以及种类的影响进行研究。结果表明,在同一类型的缓冲溶液中,反应中间物的物种并不受缓冲溶液离子强度的影响,但反应速率随其离子强度的增加而加快。在四个不同的缓冲溶液中测试的反应动力学表明,缓冲物组分对反应速率和反应途径均存在显著的影响,尤其是NH4^+-NH3·H2O缓冲溶液对S2O3^2-的氧化反应和中间物(S4O6^2-)的分解都有明显的促进作用。在对ClO2^--S2O3^2-氧化反应进行动力学机理的研究中,应严格控制反应溶液中离子强度和缓冲溶液中缓冲物的组成,并将其考虑到动力学模型中。 展开更多

关键词 反应动力学 离子强度 缓冲溶液组成 ClO2^--S2O3^2-

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基于化学反应算法的配电网重构 被引量：20

5

作者 王淳 《电网技术》 EI CSCD 北大核心 2012年第5期209-214,共6页

化学反应(chemical reaction optimization,CRO)算法是从化学反应过程中得到的启发式算法,模拟了化学反应过程中分子相互作用最终到达稳定的低能量状态的过程。基于此,提出了配电网络重构方法。根据配电网络的特征,采用独立环路构造分... 化学反应(chemical reaction optimization,CRO)算法是从化学反应过程中得到的启发式算法,模拟了化学反应过程中分子相互作用最终到达稳定的低能量状态的过程。基于此,提出了配电网络重构方法。根据配电网络的特征,采用独立环路构造分子的结构,各环路中的开关编号作为分子结构中各特性的取值集合。结合所构造的分子结构的特点,设计了用于配电网重构的分子与容器壁之间无效碰撞、分子之间无效碰撞、分子分解、分子合成的详细规则。算例结果验证了该方法的有效性。 展开更多

关键词 配电网络 重构 化学反应算法 分子结构 中心能量缓冲器

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葡萄浆果中β-葡萄糖苷酶活性测定条件的研究 被引量：9

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作者 李华 高丽 《酿酒科技》 北大核心 2007年第8期146-149,共4页

以对-硝基苯酚β-D-葡萄糖苷为底物,对霞多丽葡萄浆果中β-葡萄糖苷酶活性测定条件进行了研究。结果表明,酶反应底物在405nm处有最大的吸光值,霞多丽葡萄浆果粗酶提取液PVP添加量为3%最理想,在37℃酶促反应曲线线性最好,在40℃和柠檬酸... 以对-硝基苯酚β-D-葡萄糖苷为底物,对霞多丽葡萄浆果中β-葡萄糖苷酶活性测定条件进行了研究。结果表明,酶反应底物在405nm处有最大的吸光值,霞多丽葡萄浆果粗酶提取液PVP添加量为3%最理想,在37℃酶促反应曲线线性最好,在40℃和柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液pH6.0中酶活性较高。通过正交试验确定霞多丽葡萄酒浆果的β-葡萄糖苷酶最佳检测条件是37℃,在磷酸-柠檬酸pH6.0缓冲液中反应90min。 展开更多

关键词 Β-葡萄糖苷酶 反应温度 反应时间 缓冲液pH

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中韩野生软枣猕猴桃种质资源遗传多样性分析 被引量：12

7

作者 赵成日 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1043-1051,共9页

【目的】利用RAPD分子标记技术研究国内长白山地区和韩国由来野生软枣猕猴桃种质资源的遗传多样性。【方法】以长白山地区和韩国由来的28个野生软枣猕猴桃的叶片为材料,利用RAPD分子标记技术进行了遗传多样性分析,并明确了它们之间的亲... 【目的】利用RAPD分子标记技术研究国内长白山地区和韩国由来野生软枣猕猴桃种质资源的遗传多样性。【方法】以长白山地区和韩国由来的28个野生软枣猕猴桃的叶片为材料,利用RAPD分子标记技术进行了遗传多样性分析,并明确了它们之间的亲缘关系。【结果】利用131个随机引物进行PCR,从中筛选出了多态性高、重复性好且扩增条带清晰的24个引物。24个引物在28个野生软枣猕猴桃中共扩增出191条带,其中多态性条带为186条,占97.4%。平均每个引物产生7.75个多态性条带。应用NTSYSpc 2.10e软件进行遗传一致度和遗传距离分析后用UPGMA方法进行聚类分析。28个野生软枣猕猴桃种质资源之间的遗传距离为0.020 2~0.934 2。遗传距离0.58时可将28个野生种划分成2大类。在遗传距离最小的0.02处,有蛟河2号和3号2个野生种,其RAPD分子标记相似性为98%。【结论】来自不同地理区域的野生软枣猕猴桃之间存在较高的遗传多样性,而在同一地理区域内遗传多样性较低。韩国野生软枣猕猴桃之间的遗传多样性较低,且与二道白河、汪清、左家等地的野生软枣猕猴桃亲缘关系较近。即具有同一地理区域聚类趋势,且不同地理区域间存在较高的遗传多样性。 展开更多

关键词 软枣猕猴桃 遗传多样性 RAPD 长白山地区 韩国

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酸性条件下H^+Ca^(2+)在红壤表面反应的能量特征 被引量：8

8

作者 王代长 蒋新 +2 位作者 贺纪正 卞永荣 王芳 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期536-543,共8页

用自行设计的动力学装置研究了酸性条件下H+ -Ca2 + 在红壤表面的反应动力学能量特征。结果表明 ,酸性条件下Ca2 + 吸附分为快反应和慢反应。用一级动力学方程拟合的Ca2 + 最大吸附量随酸度增加显著下降 ,随温度升高提前达到平衡。用双... 用自行设计的动力学装置研究了酸性条件下H+ -Ca2 + 在红壤表面的反应动力学能量特征。结果表明 ,酸性条件下Ca2 + 吸附分为快反应和慢反应。用一级动力学方程拟合的Ca2 + 最大吸附量随酸度增加显著下降 ,随温度升高提前达到平衡。用双常数方程描述Ca2 + 在吸附点位能量分布的不均匀性 ,用扩散速率常数计算的活化能 (Eb )随酸度的增加而增加 ,Ca2 + 扩散需克服的能障加大 ;ΔH 值为正 ,温度升高可促进Ca2 + 的扩散 ;ΔS 值均为负 ,说明吸附反应使体系有序度增加。原液pH为 4 .5和 5 .6时 ,流出液的pH急剧下降 ,H+ 表观释放量用一级动力学和双常数方程拟合为最佳模型 ,其次是Elovich方程、扩散方程和零级方程 ;pH5 .6处理时H+ 、Al3 + 扩散进入溶液克服的能障比pH 4 .5处理的小 ,后者质子扩散需热能较大而不易进行 ;H+ 扩散活化焓变为正 ,其扩散是吸热过程。pH 3.5时流入液比流出液的pH高 ,是由于土壤的缓冲作用、土壤表面质子化和硫酸根专性吸附释放羟基 ;当溶液中H+ 超过一定数量后 ,向颗粒表面扩散的H+ 量比向外释放的多 ,反应初期的H+ 消耗是快反应过程。H+ 消耗的活化能及热焓比其释放的低 ,更有利于H+ 的吸附 ,因H+ 对矿物的溶蚀成为速率控制步骤 ,H+ 展开更多

关键词 红壤 表面反应动力学 能量特征 土壤酸化 离子扩散 土壤缓冲机制 钙离子 氢离子

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森林生态系统水化学效应研究综述 被引量：7

9

作者 雷丽群 韦菊玲 +3 位作者 农友 杨桂芳 卢立华 何远 《林业调查规划》 2016年第6期24-29,共6页

综述了国内有关森林生态系统水化学效应的主要研究成果,概述了pH值和SO_4^(2-)、NO_3^-、K^+、Na^+、Ca^(2+)、Mg^(2+) 6种离子在森林林冠层、枯落物层和土壤层3个层次的变化特征及响应机制。指出在今后的工作中应继续深化有关作用机理... 综述了国内有关森林生态系统水化学效应的主要研究成果,概述了pH值和SO_4^(2-)、NO_3^-、K^+、Na^+、Ca^(2+)、Mg^(2+) 6种离子在森林林冠层、枯落物层和土壤层3个层次的变化特征及响应机制。指出在今后的工作中应继续深化有关作用机理的研究,特别是需要在系统层面上进行多因子的探讨,加强如何应对环境酸化问题以及恢复措施的相关研究,重视森林生态系统水化学效应研究成果的运用。 展开更多

关键词 水化学效应 森林生态系统 盐基离子 PH值 酸缓冲能力 淋溶效应

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新戊二醇合成工艺研究 被引量：5

10

作者 刘丽秀 孟宪兴 +2 位作者 鲁琳琳 胡波 王灏 《山东化工》 CAS 2008年第8期1-3,6,共4页

对新戊二醇的缩合歧化工艺进行了改进,缩合反应采用碱性缓冲盐作催化剂,同时优化了反应条件,新戊二醇合成收率高达96%以上;创新性地选取低碳醇类溶剂溶解新戊二醇而不溶解甲酸钠,有效地解决了甲酸钠与新戊二醇分离困难的问题,同时大大... 对新戊二醇的缩合歧化工艺进行了改进,缩合反应采用碱性缓冲盐作催化剂,同时优化了反应条件,新戊二醇合成收率高达96%以上;创新性地选取低碳醇类溶剂溶解新戊二醇而不溶解甲酸钠,有效地解决了甲酸钠与新戊二醇分离困难的问题,同时大大减少了新戊二醇的损失;在减压脱水工段,增加了吸收塔以回收水蒸汽夹带的新戊二醇,新戊二醇总收率达到88%以上。 展开更多

关键词 新戊二醇 缩合 歧化反应 催化剂 溶剂析盐

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对短跑途中跑着地瞬间地面支撑反作用力的再认识

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作者 于红妍 《湖北体育科技》 2005年第2期186-188,共3页

从肌肉的生理特性、力学原理、运动学等理论角度分析,指出支撑脚在着地瞬间应该增大地面支撑反作用力而不是减小或克服它;增大地面支撑反作用力有利于重心水平速度的提高。

关键词 反作用力 短跑途中跑 地面 瞬间 认识 生理特性 力学原理 角度分析 水平速度 运动学 支撑脚

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鸡白痢沙门氏菌直接-多重PCR检测体系的建立 被引量：2

12

作者 程玲玲 严伟 +3 位作者 侯若彤 帅培强 张彪 白林含 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期149-154,共6页

通过对鸡白痢沙门氏菌毒力质粒pSPUV上入侵质粒抗原J蛋白和质粒共转移调控因子的编码基因ipaJ和traJ的序列分析,在特异区域设计PCR引物,经沙门氏菌属不同种及常见肠道致病菌的交叉验证,筛选出三对鸡白痢沙门氏菌特异检测引物ipaJ-417、t... 通过对鸡白痢沙门氏菌毒力质粒pSPUV上入侵质粒抗原J蛋白和质粒共转移调控因子的编码基因ipaJ和traJ的序列分析,在特异区域设计PCR引物,经沙门氏菌属不同种及常见肠道致病菌的交叉验证,筛选出三对鸡白痢沙门氏菌特异检测引物ipaJ-417、traJ-387、traJ-476.并且调试出一种利用两种DNA聚合酶的直接三重PCR检测体系:invA-211/traJ-387/16S-495,可以对鸡白痢沙门氏菌进行快速准确的鉴定. 展开更多

关键词 鸡白痢沙门氏菌 毒力质粒pSPUV 特异检测引物 DNA聚合酶共用反应缓冲液 直接三重PCR检测体系

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铜的显色反应研究及应用 被引量：2

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作者 李德良 邱锋利 黄念东 《光谱实验室》 CAS CSCD 1999年第2期186-188,共3页

本文研究了ＯＰ存在下，５－Ｂｒ－ＰＡＤＡＰ与铜的灵敏显色反应。结果表明，在ｐＨ９的硼酸－硼砂缓冲溶液中，铜与５－Ｂｒ－ＰＡＤＡＰ生成红色配合物，在５５０ｎｍ处测得表观摩尔吸光系数为１．６７×１０５Ｌ·ｍｏｌ－... 本文研究了ＯＰ存在下，５－Ｂｒ－ＰＡＤＡＰ与铜的灵敏显色反应。结果表明，在ｐＨ９的硼酸－硼砂缓冲溶液中，铜与５－Ｂｒ－ＰＡＤＡＰ生成红色配合物，在５５０ｎｍ处测得表观摩尔吸光系数为１．６７×１０５Ｌ·ｍｏｌ－１·ｃｍ－１。铜量在０－８μｇ／２５ｍＬ符合比耳定律。用于测定铅样中微量铜，结果满意。 展开更多

关键词 铜 PADAP 显色反应 OP 光度法 测定

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基因甲基化聚合酶链反应检测体系的优化

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作者 揣征然 黄庆 +1 位作者 黄君富 府伟灵 《检验医学与临床》 CAS 2014年第21期2945-2946,2949,共3页

目的优化甲基化敏感限制性内切酶的聚合酶链反应(PCR)检测体系。方法用甲基化敏感限制性内切酶-PCR技术对10例健康未孕女性的RASSF1A基因进行甲基化检测,并对反应的缓冲体系进行优化。结果未经纯化的酶切产物直接进行PCR时,PCR反应特异... 目的优化甲基化敏感限制性内切酶的聚合酶链反应(PCR)检测体系。方法用甲基化敏感限制性内切酶-PCR技术对10例健康未孕女性的RASSF1A基因进行甲基化检测,并对反应的缓冲体系进行优化。结果未经纯化的酶切产物直接进行PCR时,PCR反应特异性降低,出现众多非特异PCR产物;纯化酶切产物或用PCR缓冲液替代酶切缓冲液后,PCR反应特异性变高。结论酶切缓冲液可影响后续PCR反应的特异性,采取纯化措施或以PCR缓冲液替代酶切缓冲液能够有效提高后续PCR特异性,首选PCR缓冲液替代更为简便。 展开更多

关键词 限制性内切酶缓冲液 聚合酶链反应缓冲液 纯化 基因甲基化检测

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质子自递反应常数(ks)是酸碱平衡的重要参数

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作者 郭瑞华 张志斐 潘海宇 《河北理工学院学报》 2001年第1期78-81,共4页

论述了 ks在酸碱平衡中的重要作用。具体讨论了 ks与 K a、Kb的关系 ;ks决定了酸碱滴定反应完全度 ,为实现混合酸碱的连续滴定和极弱酸碱的滴定寻找出区分效应范围较大的非水溶剂 ;将 kw与〔H+ 〕、〔OH- 〕关系引入 PBE中 ,导出酸碱水... 论述了 ks在酸碱平衡中的重要作用。具体讨论了 ks与 K a、Kb的关系 ;ks决定了酸碱滴定反应完全度 ,为实现混合酸碱的连续滴定和极弱酸碱的滴定寻找出区分效应范围较大的非水溶剂 ;将 kw与〔H+ 〕、〔OH- 〕关系引入 PBE中 ,导出酸碱水溶液〔H+ 〕、酸碱滴定曲线方程、终点误差和缓冲容量计算式。提出了溶剂的 pks只决定溶剂对酸碱的区分和拉平范围 。 展开更多

关键词 质子自递反应常数 酸碱平衡 滴定完全度 酸碱滴定曲线方程 终点误差 缓冲容量

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