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题名兔出血症病毒基因组的克隆及克隆基因的酶切图谱
被引量：3
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作者
袁世山
徐为燕
杜念兴
高谦
陈章良
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机构
南京农业大学兽医微生物教研室
北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室
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出处
《病毒学报》
CAS
CSCD
北大核心
1992年第3期245-251,共7页
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文摘
本试验用甘油-酒石酸钾密度梯度离心纯化了兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV),所得病毒制剂实心颗粒占90％,没有宿主核酸污染。在常规SDS-蛋白酶K法的基础上,建立了一种耗时短、重复性高的RHDV核酸抽提程序。按照细小病毒基因组的特性,在体外合成了RHDV dsDNA,证明兔出血症病毒基因组是具有3′端发夹结构的ssDNA。以核酸酶S1修饰RHDV dsDNA,将其克隆入BS质粒载体,转化大肠杆菌DH5株。经筛选鉴定,共得RHDV DNA克隆23个,其中最大者(pYC-2)为4.6kb。选用18种限制性内切酶作酶谱分析,结果表明,12种酶在pYC-2克隆基因上不存在切点;以双酶法,用Cla Ⅰ、HincⅡ,Pvu Ⅰ、Bgl Ⅱ和Hpa Ⅰ绘制出pYC-2DNA的酶切图谱。
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关键词
兔出血症病毒
基因组克隆
酶切图谱
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Keywords
rabbit hemorrhagic disease virus ssdna genomecloning physical mapping
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分类号
S852.65
[农业科学—基础兽医学]
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