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肠道病毒71型的RT-PCR诊断及基因特征 被引量:133
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作者 崔爱利 许文波 +7 位作者 李秀珠 胡家瑜 凌华 唐伟 杨智宏 张燕 陈立 Hiroyuki Shimizu 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期160-165,共6页
2002~2003年从上海市和重庆市手足口病患儿的疱液标本中分离到10株病毒,其中上海9株,重庆1株。利用两对分别针对EV71和Cox.A16病毒VP1区的特异性引物,用RT PCR方法对病毒进行初步鉴别。根据PCR所用引物及PCR扩增出的产物片段大小不同,... 2002~2003年从上海市和重庆市手足口病患儿的疱液标本中分离到10株病毒,其中上海9株,重庆1株。利用两对分别针对EV71和Cox.A16病毒VP1区的特异性引物,用RT PCR方法对病毒进行初步鉴别。根据PCR所用引物及PCR扩增出的产物片段大小不同,可初步判定出EV71和Cox.A16病毒的血清型别。RT PCR结果提示,上海分离到的9株病毒中,有2株为EV71,其余7株病毒为Cox.A16;重庆分离到的1株病毒为EV71。10株病毒的RT PCR产物经序列测定和分析证实,PCR定型结果正确,说明PCR法具有很高的特异性,可作为EV71初步鉴定的首选方法。对所分离的3株EV71病毒进行VP1区编码基因全序列的测定和遗传学分析,通过同源性比较和构建系统发生树发现,此3株EV71病毒和中国大陆已发表的7株EV71病毒(SHZH03、SHZH98、SH F1、SH F2、SH H25、SH H26和CHN 87)全部属于C基因型,与该型代表株比较,同源性为89 3%~94 6%;与A、B基因型代表株比较,同源性为81 3%~84 0%,差异较大。在C基因型中,此3株EV71病毒和中国大陆先前分离的6株病毒(SHZH03、SHZH98、SH F1、SH F2、SH H25、SH H26)的同源性较高,在94 5%~100%范围内。在系统发生树上,这9株病毒形成一个较独立的分支。与CHN 87株的同源性在92 1%~93 6%之间。与已知的C1、C2、C3亚型代表株比较,同源? 展开更多
关键词 肠道病毒71型 rt-pcr 诊断 基因 分子流行病学
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我国广东、福建地区2000~2001年手足口病肠道病毒71型分离株的种系进化分析 被引量:108
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作者 林思恩 章青 +4 位作者 谢华萍 谢健萍 何家鑫 董巧丽 方肇寅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期227-229,共3页
目的 采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测我国广东、福建地区 2 0 0 0~ 2 0 0 1年手足口病 (HFMD)散发病例中的肠道病毒 71型 (EV71) ,进而通过扩增VP1节段的核苷酸序列 ,进行毒株的种系进化分析。方法 以肠道病毒特异引物对EV 1、... 目的 采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测我国广东、福建地区 2 0 0 0~ 2 0 0 1年手足口病 (HFMD)散发病例中的肠道病毒 71型 (EV71) ,进而通过扩增VP1节段的核苷酸序列 ,进行毒株的种系进化分析。方法 以肠道病毒特异引物对EV 1、EV 2进行RT PCR ,经琼脂糖凝胶电泳鉴定为阳性的标本 ,进一步用EV71特异引物对 15 9S、16 2A进行RT PCR ,扩增的VP1节段经纯化后与测序载体pGEM T连接 ,转化大肠埃希菌DH5α ,筛选后测序。所得序列与我国深圳、上海、武汉地区的EV71流行株 ,中国台湾 1998年 4例HFMD暴发分离的EV71毒株 ,及来自美国、日本、匈牙利等国家地区的EV71毒株的核苷酸序列 ,用ClustalX 1 8和PHYLIP 3 5进行比对分析 ,构建种系进化树。结果  2 5份标本检测EV71的阳性率为 2 0 % ,所得序列经种系进化分析 ,与肠道病毒 71型的其他毒株同源 ,与深圳 1998年HFMD散发分离的EV71毒株同源性为 94 % ,与上海 2 0 0 0年HFMD暴发分离株同源性为94 %~ 96 % ,与武汉 1987年HFMD病例中分离的毒株同源性为 91% ,而与国外EV71毒株同源性仅为82 %~ 84 %。结论 EV71是我国南方地区HFMD的主要病原之一 ;我国大陆地区的EV71毒株在种系进化上有较高的同源性 ;与我国台湾地区大部分分离株亦有 90 %~ 91%的核苷酸? 展开更多
关键词 HFMD 肠道病毒71型 种系 手足口病 毒株 暴发 rt-pcr 进化分析 同源性 分离株
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中国淮阳山地区由新蜱传布尼亚病毒引起的出血热 被引量:96
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作者 张永振 周敦金 +23 位作者 熊衍文 陈小萍 贺永文 孙强正 余滨 李娟 代永安 田俊华 覃新程 金东 崔志刚 罗雪莲 李伟 卢珊 王文 彭劲松 郭文平 李明慧 李振军 张少敏 陈晨 王艳 Menno D.de Jong 徐建国 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期209-220,共12页
研究背景 2009-2010年4月至7月,我国淮阳山地区农民中出现不明原因的严重出血热样病例.方法 采集疑似病例的临床标本(血液、尿液、粪便和咽拭子),在患者所在地采集蚊和蜱.从2例患者的血液样本中分离到2株病毒,并进行全基因组测序分析... 研究背景 2009-2010年4月至7月,我国淮阳山地区农民中出现不明原因的严重出血热样病例.方法 采集疑似病例的临床标本(血液、尿液、粪便和咽拭子),在患者所在地采集蚊和蜱.从2例患者的血液样本中分离到2株病毒,并进行全基因组测序分析.采用病毒特异的RT-PCR对其他病例及节肢动物进行病毒检测,对RT-PCR阳性病例的临床和流行病学资料进行分析.结果 从2例患者的血液及从犬身上采集到的长角血蜱中分离到1种未知病毒.全基因组测序分析发现该病毒为布尼亚病毒科的一个新成员,与白蛉病毒属最接近,是其中的一个新分支.58例疑似病例中33例RT-PCR结果阳性.病例临床特征主要表现为发热、乏力、恶心、呕吐和腹泻.主要实验室结果包括白细胞及血小板减少,凝血时间异常和肝酶升高.3例患者出现出血症状,5例死亡(死亡率15%).结论 我国淮阳山地区存在着一种严重威胁生命健康的新蜱传布尼亚病毒.对于该病毒的流行病学、地理分布,以及脊椎动物宿主的生态学等需要作进一步的研究. 展开更多
关键词 布尼亚病毒 出血热 蜱传 山地 rt-pcr 流行病学资料 疑似病例 中国
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长春市儿童医院1998~2001年婴幼儿杯状病毒腹泻流行病学研究 被引量:75
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作者 谢华萍 方肇寅 +9 位作者 王光 孙利炜 吕红霞 Zhong WM Tai JH 林思恩 童志礼 章青 Glass RI Jiang X 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期332-336,共5页
人类杯状病毒(humancalicivirus,HuCV)是引起儿童和成人非菌性胃肠炎的主要病原之一。为了掌握HuCV在我国的流行情况,1998年7月至2001年6月,从长春市儿童医院2343例5岁以下腹泻患儿中共收集粪便标本1264份,其中1056份来自2135例住院患... 人类杯状病毒(humancalicivirus,HuCV)是引起儿童和成人非菌性胃肠炎的主要病原之一。为了掌握HuCV在我国的流行情况,1998年7月至2001年6月,从长春市儿童医院2343例5岁以下腹泻患儿中共收集粪便标本1264份,其中1056份来自2135例住院患儿。对轮状病毒检测为阴性的588份标本,经多价酶免疫试验(EIA)和两组引物反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HuCV,202份为阳性,其中住院患儿标本178份,HuCV检出率为16 9%。HuCV腹泻以2岁以下儿童为主(占96%),流行高峰季节为11月至次年3月。选择17株HuCV进行分子鉴定,15株属GⅡ 4群,1株属GⅡ 3群,另1株属GⅠ 2群,表明GⅡ 4群HuCV是我国流行的优势株。根据HuCV住院患儿的监测资料初步估计,HuCV腹泻住院率约为0 5‰~2 4‰。讨论了长春地区HuCV的流行趋势和疾病负担。以上结果为我国HuCV腹泻的预防和控制提供了科学依据。 展开更多
关键词 长春市 儿童医院 1998-2001年 婴幼儿 杯状病毒 腹泻 流行病学研究
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人参、藜芦合用对大鼠肝P450酶活性及mRNA表达的调控作用 被引量:73
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作者 王宇光 高月 +6 位作者 柴彪新 陈鹏 谭洪玲 赵永红 肖成荣 孙圆媛 朱力军 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期366-370,共5页
目的 :研究中药十八反中人参与藜芦合用对P4 5 0同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法 :采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P4 5 0与细胞色素b5含量及氨基比林N 脱甲基酶 (APND)、对硝基苯酚羟化酶 (pNPH)活性。采用RT PC... 目的 :研究中药十八反中人参与藜芦合用对P4 5 0同工酶在酶活性及mRNA水平的调控作用。方法 :采用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素P4 5 0与细胞色素b5含量及氨基比林N 脱甲基酶 (APND)、对硝基苯酚羟化酶 (pNPH)活性。采用RT PCR技术检测大鼠肝中 5种P4 5 0同工酶CYP1A1,CYP2B1/ 2 ,CYP2C11,CYP2E1及CYP3A1mRNA的表达。结果 :人参与藜芦合用可明显降低P4 5 0蛋白含量 ,可降低细胞色素b5的含量 ,单药及其与藜芦配伍都能使APND活性下降。在mRNA水平上 ,藜芦可诱导CYP2C11的基因表达 ,与人参合用后却使得CYP2C11的表达下降。藜芦与人参配伍诱导了CYP1A1的表达。人参可抑制CYP2B1/ 2的基因表达 ,与藜芦合用后却明显诱导了CYP2B1/ 2的表达 ,人参与藜芦合用后也明显诱导了CYP3A1的表达。结论 :人参与藜芦配伍前后对一些CYP亚型调控作用发生明显变化 ,可能存在基于药物代谢酶机理的相反作用 ,需进一步结合代谢研究加以综合分析 。 展开更多
关键词 人参 藜芦 大鼠 P450酶 紫外分光光度法 肝微粒体 药物代谢酶
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猪繁殖与呼吸道综合征RT-PCR诊断方法的建立 被引量:54
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作者 娄高明 杜伟贤 +3 位作者 谢明权 李雪梅 林绍荣 黄毓茂 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期141-144,共4页
根据猪繁殖与呼吸道综合征病毒 ( PRRSV)核衣壳蛋白 ORF7的序列 ,设计了 1套引物 ,建立了检测 PRRSV核酸的 RT-PCR方法。通过对猪繁殖与呼吸道综合征 ( PRRS)标准毒株的检测 ,证明该方法不仅能够扩增出特异性的核酸片段 ,同时可从基因... 根据猪繁殖与呼吸道综合征病毒 ( PRRSV)核衣壳蛋白 ORF7的序列 ,设计了 1套引物 ,建立了检测 PRRSV核酸的 RT-PCR方法。通过对猪繁殖与呼吸道综合征 ( PRRS)标准毒株的检测 ,证明该方法不仅能够扩增出特异性的核酸片段 ,同时可从基因水平上区分 PRRSV美洲型和欧洲型。使用该方法对国内临床上疑似为 PRRS的送检样品进行检测 ,结果为阳性 ,并确定其基因型均为美洲型。该研究建立的从组织中直接提取细胞总 RNA进行 RT-PCR的方法 ,为 PRRS的快速。 展开更多
关键词 核酸检测 rt-pcr PRRS 诊断
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低分子质量地黄多糖体外对Lewis肺癌细胞p53基因表达的影响 被引量:42
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作者 魏小龙 茹祥斌 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期245-248,共4页
目的研究低分子质量地黄多糖(LRPS)体外给药对Lewis肺癌细胞p53基因表达的影响。方法利用竞争性逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测p53基因表达的水平。结果LRPS在剂量0.1和0.5g·L-1条... 目的研究低分子质量地黄多糖(LRPS)体外给药对Lewis肺癌细胞p53基因表达的影响。方法利用竞争性逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测p53基因表达的水平。结果LRPS在剂量0.1和0.5g·L-1条件下,体外给药12h,Lewis肺癌细胞内p53基因的表达水平为0.790和0.718,对照组为0.483,体外给药24h,p53基因的表达水平为0.957和0.590,对照组为0.226。结果表明,LRPS能使Lewis肺癌细胞内的p53基因表达明显增加。结论LRPS可能通过调控p53基因的表达而影响肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡。 展开更多
关键词 地黄多糖 肺肿瘤 细胞培养 P53基因 rt-pcr
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猪繁殖 - 呼吸道综合征病毒(PRRSV)CH-1a株基因型鉴定 被引量:57
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作者 仇华吉 郭宝清 +2 位作者 童光志 刘文兴 于力 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期118-121,共4页
根据猪繁殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株和欧洲型毒株的基因组序列设计合成了2对引物,即1008PS/1009PR和1010PLS/1011PLR。我国分离的CH-1a株用这2对引物均能扩增出与预期大小相符... 根据猪繁殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株和欧洲型毒株的基因组序列设计合成了2对引物,即1008PS/1009PR和1010PLS/1011PLR。我国分离的CH-1a株用这2对引物均能扩增出与预期大小相符的RT-PCR产物,分别与美洲型代表株(VR-2332)的RT-PCR产物大小相当。特异性试验表明,这2对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的RNA或DNA以及未感染的MARC-145细胞RNA。间接免疫荧光试验也证明,CH-1a株与PRRSV核衣壳蛋白特异性单克隆抗体以及美洲型毒株抗血清均呈阳性反应。因此初步证实CH-1a株为美洲型PRRSV。 展开更多
关键词 PRRSV rt-pcr 基因型
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柑橘组织RNA提取方法研究 被引量:62
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作者 徐昌杰 陈昆松 +2 位作者 张波 王钱洁 叶薇佳 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期136-140,共5页
从操作耗时、所得RNA产量和质量等方面比较了5种RNA提取方法提取甜橙叶片、幼果、成熟果实果皮和汁囊组织RNA的效果。结果表明,改良Bugos法能从上述4种组织中获得较高产量和质量的RNA。用该方法提取的温州蜜柑成熟果实果皮RNA经RT-PCR... 从操作耗时、所得RNA产量和质量等方面比较了5种RNA提取方法提取甜橙叶片、幼果、成熟果实果皮和汁囊组织RNA的效果。结果表明,改良Bugos法能从上述4种组织中获得较高产量和质量的RNA。用该方法提取的温州蜜柑成熟果实果皮RNA经RT-PCR扩增成功得到了蔗糖磷酸合成酶cDNA片段。该方法还可适用于猕猴桃、梨、甜瓜、龙眼、苹果和桃果肉RNA的提取。 展开更多
关键词 柑橘果实 RNA 提取 电泳 rt-pcr
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立 被引量:62
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作者 郝晓芳 周艳君 +5 位作者 田志军 韦天超 安同庆 彭金美 华荣虹 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期704-709,共6页
2006年5月以来,我国部分猪场暴发了一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的、对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory ... 2006年5月以来,我国部分猪场暴发了一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的、对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定的PRRSV的nsp2基因序列,在nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物,建立了一种PRRSV的RT-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组时可获得230bp的片段,扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段,根据RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测,并配合PCR产物测序验证,结果表明该方法简便、快速、特异,可以鉴别高致病性PRRSV,为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因缺失 rt-pcr 鉴别诊断
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禽流感RT-PCR诊断法的建立 被引量:54
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作者 崔尚金 陈化兰 +3 位作者 唐秀英 邓国华 田国斌 于康震 《中国畜禽传染病》 CSCD 1998年第2期105-107,共3页
根据禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Breslin/1902(H7N7)株的血凝素(HA)基因参考序列设计合成一对H7HA特异引物,并应用SDS-蛋白酶K法提取病毒RNA,建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-... 根据禽流感病毒(AIV)A/Chicken/Breslin/1902(H7N7)株的血凝素(HA)基因参考序列设计合成一对H7HA特异引物,并应用SDS-蛋白酶K法提取病毒RNA,建立了逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AIVRNA的方法。应用此法对鸡胚培养的AIV尿囊液、SPF感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、减蛋综合征病毒(EDS-76V)等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,AIV尿囊液RT-PCR全部阳性,SPF感染鸡粪便87份,RT-PCR检出69份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出11份,电镜检测了23份样品,仅检出2份阳性。非特异性对照样品经RT-PCR检测全部阴性。将AIV感染鸡胚尿囊液作10倍系列连续稀释,可检出稀释度为10-2的病毒尿囊液。RT-PCR最早检出时间为感染后第3天,而琼扩和电镜均是7天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间(只需8小时左右)。 展开更多
关键词 rt-pcr 诊断 流行性感冒
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盐胁迫下棉花基因组DNA表观遗传变化的MSAP分析 被引量:56
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作者 李雪林 林忠旭 +2 位作者 聂以春 郭小平 张献龙 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期588-596,共9页
盐胁迫是非生物逆境中对作物危害比较严重的自然灾害之一,严重影响和制约作物的产量和种植面积。本研究以陆地棉品系YZ1为材料,调查不同NaCl浓度下棉花幼苗生长及根基因组DNA的甲基化水平和变化模式。结果表明,对棉花幼苗的株高和根长生... 盐胁迫是非生物逆境中对作物危害比较严重的自然灾害之一,严重影响和制约作物的产量和种植面积。本研究以陆地棉品系YZ1为材料,调查不同NaCl浓度下棉花幼苗生长及根基因组DNA的甲基化水平和变化模式。结果表明,对棉花幼苗的株高和根长生长100mmolL-1NaCl有促进作用,200mmolL-1NaCl有显著抑制作用;100~200mmolL-1NaCl胁迫严重抑制棉花幼苗的侧根数量。甲基化敏感扩增多态性(methylation-sensitive amplification poly-morphism,MSAP)分析表明,经100、150和200mmolL-1NaCl处理后根基因组DNA甲基化比率分别为38.1%、35.2%和34.5%,均低于对照(41.2%),同时棉花幼苗根DNA的甲基化水平与NaCl处理浓度呈显著负相关(r=-0.986)。与对照相比,100、150和200mmolL-1NaCl胁迫下棉花幼苗根基因组DNA的甲基化和去甲基化分别为6.4%、7.6%、11.3%和12.7%、11.1%、8.2%。此外,序列和RT-PCR分析表明,与MSAP差异片段高度同源的基因的表达在处理与对照间差异显著。 展开更多
关键词 棉花 盐胁迫 DNA甲基化 甲基化敏感扩增多态性 rt-pcr
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一种有效的花瓣总RNA的提取方法 被引量:55
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作者 孟丽 周琳 +1 位作者 张明姝 戴思兰 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第1期38-40,共3页
利用CTAB法以富含花青素类物质的紫蓝色花瓣为材料提取总RNA,经紫外光谱分析A260/A280比值为1.9—2.0,A260/A230比值约为2.0;电泳检测到了28S、18S和5SrRNA清晰的条带;通过RT—PCR扩增出了目的基因的cDNA片段,说明分离的总RNA... 利用CTAB法以富含花青素类物质的紫蓝色花瓣为材料提取总RNA,经紫外光谱分析A260/A280比值为1.9—2.0,A260/A230比值约为2.0;电泳检测到了28S、18S和5SrRNA清晰的条带;通过RT—PCR扩增出了目的基因的cDNA片段,说明分离的总RNA能去除色素干扰,纯度和反转录活性较高符合RNA相关实验的要求,是一种经济、有效的花瓣总RNA的提取方法。 展开更多
关键词 花瓣 RNA提取 CTAB rt-pcr
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猪圆环病毒2型及猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速检测 被引量:53
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作者 芦银华 许立华 +4 位作者 华修国 谈国蕾 黄伟坚 陈德胜 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2003年第2期184-186,共3页
According to the published genome sequences of Porcine circovirus type 2 (PCV2) and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), primers were designed and PCR, RT-PCR were set up for the detection of P... According to the published genome sequences of Porcine circovirus type 2 (PCV2) and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), primers were designed and PCR, RT-PCR were set up for the detection of PCV2 and PRRSV, respectively. With the established methods, 38 clinical samples from the respiratory disease pigs were detected for the presence of PCV2 and PRRSV. The results demonstrated that 22 samples were positive for PCV2, 27 samples were positive for PRRSV and among the above positive samples, 18 samples were positive for both viruses. The data obtained in the present study indicated that PCV2 and PRRSV maybe play an important role in the course of the development of respiratory diseases. 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪繁殖呼吸综合症病毒 共感染 检测 呼吸道疾病 pcr rt-pcr
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丹参酮对人皮脂腺细胞增殖、脂质合成及雄性激素受体mRNA表达的影响 被引量:57
15
作者 鞠强 尹兴平 +6 位作者 石继海 辛燕 康晓静 陈沄 崔盘根 曹元华 夏隆庆 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期98-101,共4页
目的探讨丹参酮治疗痤疮的机制。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的隐丹参酮、丹参酮ⅡΑ在作用24、48及72h对SZ95细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测尼罗河红荧光染色的SZ95细胞中脂质含量的变化;用半定量逆转录PCR(RT-PCR)检... 目的探讨丹参酮治疗痤疮的机制。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的隐丹参酮、丹参酮ⅡΑ在作用24、48及72h对SZ95细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测尼罗河红荧光染色的SZ95细胞中脂质含量的变化;用半定量逆转录PCR(RT-PCR)检测药物对SZ95细胞中AR mRNA表达的影响。结果隐丹参酮浓度在0.5~12.5μmol/L之间呈时间和剂量依赖性抑制SZ95细胞增殖,其半数抑制浓度为7.473μmol/L(48h)和2.146μmol/L(72h);丹参酮ⅡΑ浓度在1.25μmol/L~12.5μmol/L呈时间和剂量依赖性抑制SZ95细胞增殖,其半数抑制浓度为6.021μmol/L(48h)和2.250mol/L(72h)。0.125μmol/L丹参酮ⅡΑ作用SZ95细胞48h后,尼罗河红荧光染色的平均荧光强度较对照组明显下降(P<0.05);此外,1μmol/L和0.1μmol/L隐丹参酮以及1μmol/L丹参酮ⅡΑ对SZ95细胞AR mRNA的表达显示出抑制作用(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。结论隐丹参酮、丹参酮ⅡΑ可能通过直接抑制皮脂腺细胞的增殖、脂质合成或间接下调皮脂腺细胞雄激素受体mRNA的表达而具有抗皮脂腺活性的作用,这可能是丹参酮治疗痤疮的机制之一。 展开更多
关键词 隐丹参酮 皮脂腺细胞 治疗 表达 HA 细胞增殖 脂质 RNA 荧光染色 rt-pcr
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百合无症病毒的RT-PCR和IC-RT-PCR检测 被引量:43
16
作者 王继华 瞿素萍 +2 位作者 孔宝华 陆琳 余朝秀 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第2期148-150,173,共4页
应用DAS-ELISA,RT-PCR和IC-RT-PCR技术检测百合无症病毒(LSV)。结果表明:RT-PCR和IC-RT-PCR分别可从2ng和200ng百合叶片组织中检测出LSV,分别是DAS-ELISA敏感度的1000倍和10倍。百合鳞茎的不同取样部位对PCR检测结果的影响较大,RT-PCR... 应用DAS-ELISA,RT-PCR和IC-RT-PCR技术检测百合无症病毒(LSV)。结果表明:RT-PCR和IC-RT-PCR分别可从2ng和200ng百合叶片组织中检测出LSV,分别是DAS-ELISA敏感度的1000倍和10倍。百合鳞茎的不同取样部位对PCR检测结果的影响较大,RT-PCR难以从鳞片和根部检测出病毒,但IC-RT-PCR可以检测出病毒。 展开更多
关键词 百合 无症病毒 rt-pcr IC-rt-pcr DAS—ELISA 检测技术 切花
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猪病毒性腹泻分子流行病学调查 被引量:55
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作者 刘云波 赵洪翠 +2 位作者 王志成 武刚 何启盖 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第2期204-207,共4页
为了解近年来中国猪病毒性腹泻的发生现状,于2011年4月至2012年4月利用多重RT-PCR方法对采集于13个省市的猪腹泻样品和临床健康的样品进行了检测,结果显示,腹泻猪群样品中TGEV阳性率为2.65%,PEDV阳性率为24.49%,ARV阳性率为3.20%;在肠... 为了解近年来中国猪病毒性腹泻的发生现状,于2011年4月至2012年4月利用多重RT-PCR方法对采集于13个省市的猪腹泻样品和临床健康的样品进行了检测,结果显示,腹泻猪群样品中TGEV阳性率为2.65%,PEDV阳性率为24.49%,ARV阳性率为3.20%;在肠道组织样品中,TGEV的阳性率为3.11%,PEDV为14.83%,ARV为1.67%;粪便样品中,TGEV的阳性率为2.80%,PEDV为28.42%,ARV为4.86%;母猪(所产仔猪腹泻)乳汁中,TGEV阳性率为1.08%,PEDV为31.89%,ARV为0.54%。健康猪群样品中,保育与育肥阶段猪中PEDV阳性率为2.13%,ARV阳性率为1.42%;哺乳仔猪中ARV阳性率为12.86%。由此可知,目前中国猪病毒性腹泻以PED为主要病因,PEDV和TGEV在幼龄猪群中存在隐性感染现象,且3种病毒性腹泻均可通过母乳传播病毒。 展开更多
关键词 猪病毒性腹泻 rt-pcr 分子流行病学 调查
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适于葡萄不同组织RNA提取方法的筛选 被引量:54
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作者 张彦苹 王晨 +2 位作者 于华平 蔡斌华 房经贵 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期135-140,共6页
比较了CTAB法、改良CTAB法、Trizol法、SDS-苯酚法和改良SDS法5种RNA提取方法提取葡萄叶片、花序、茎尖、卷须和果实组织RNA的效果。并进一步从总RNA中分离出了高质量的低分子量RNA(LMWRNA),建立了葡萄LMWRNA提取的方法。改进后的改良SD... 比较了CTAB法、改良CTAB法、Trizol法、SDS-苯酚法和改良SDS法5种RNA提取方法提取葡萄叶片、花序、茎尖、卷须和果实组织RNA的效果。并进一步从总RNA中分离出了高质量的低分子量RNA(LMWRNA),建立了葡萄LMWRNA提取的方法。改进后的改良SDS法能够克服果实中RNA提取难度大的问题,能够从果实中提取到质量和产量都很高的RNA。结果表明,改良SDS法适用于葡萄叶片、花序、茎尖、卷须组织中总RNA的提取,改进的改良SDS法是从果实中提得LMWRNA较佳选择。在总RNA提取的基础上建立的葡萄LMWRNA提取方法能够达到研究的要求。 展开更多
关键词 葡萄 总RNA LMWRNA 提取 rt-pcr
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小儿肠套叠与肠道病毒感染 被引量:54
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作者 步星耀 金百祥 +1 位作者 沈兆忠 王淑萱 《中华小儿外科杂志》 CSCD 1995年第6期346-348,共3页
采用逆转录聚合酶链式反应分别对原发性肠套叠患儿和健康小儿的粪便标本进行肠道病毒核糖核酸(RNA)检测,结果4岁以上年龄组两者肠道病毒阳性率差异无显著性意义(P>0.05),4岁以下年龄组原发性肠套叠肠道病毒阳性率37... 采用逆转录聚合酶链式反应分别对原发性肠套叠患儿和健康小儿的粪便标本进行肠道病毒核糖核酸(RNA)检测,结果4岁以上年龄组两者肠道病毒阳性率差异无显著性意义(P>0.05),4岁以下年龄组原发性肠套叠肠道病毒阳性率37.04%,显著高于健康小儿阳性率11.11%(P<0.01),提示肠道病毒感染可能是部分原发性肠套叠的病因之一。 展开更多
关键词 肠道病毒 肠套叠 聚合酶链反应 rt-pcr
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茶树S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆和序列分析 被引量:45
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作者 冯艳飞 梁月荣 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期21-25,共5页
从茶树叶片中提取总RNA ,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板 ,分别用三对PCR引物扩增SAM合成酶基因的中间主片段、 3 端和 5 端片段 ,最后经BLAST比较及重叠区域拼接得到完整的SAM基因序列。所得序列长 130 3bp ,编码 394个... 从茶树叶片中提取总RNA ,经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板 ,分别用三对PCR引物扩增SAM合成酶基因的中间主片段、 3 端和 5 端片段 ,最后经BLAST比较及重叠区域拼接得到完整的SAM基因序列。所得序列长 130 3bp ,编码 394个氨基酸。与中华猕猴桃、番茄、长春花SAM合成酶基因的核苷酸序列的同源性分别为 87% ,83 %和 83%。氨基酸序列与三角杨、猕猴桃、番茄、长春花等的SAM氨基酸序列的同源性为 92 %~ 90 %。证实所获得的基因序列为茶树SAM合成酶基因。该基因的克隆为今后进一步开展茶树逆境生理。 展开更多
关键词 茶树 SAM合成酶 基因克隆 rt-pcr
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