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210株结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征研究 被引量:15
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作者 黄振宇 范学工 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期548-551,共4页
目的了解结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点。方法对结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区(RRDR)81个碱基在内的286bp的片段进行PCR-SSCP分析,并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌的rpoB基因此扩增区域进行序列... 目的了解结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点。方法对结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区(RRDR)81个碱基在内的286bp的片段进行PCR-SSCP分析,并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌的rpoB基因此扩增区域进行序列测定。结果共对210株结核分枝杆菌临床分离菌株进行了研究,其中利福平耐药株110株,非利福平耐药株40株,敏感株60株。PCR-SSCP检测显示110株利福平耐药株中有75株有突变存在,经测序分析,77.3%(58/75)的菌株发生rpoB基因的单位点突变,主要集中在456位60.3%(35/58)和451位25.9%(15/58);22.7%(25/110)的菌株发生了联合突变。此外,经PCR-SSCP检测,40株非利福平耐药株中有3株发生突变,60株敏感株中有2株发生突变。经直接测序分析突变涉及位点为436位、451位和460位。结论结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因是rpoB基因耐药决定区发生突变,其中456位丝氨酸和451位组氨酸是最常见的突变位点。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 利福平 耐药 rpob 基因突变
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DNA芯片快速检测耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变 被引量:17
2
作者 单万水 单金岚 +8 位作者 詹能勇 黄慧平 余卫业 叶淦湖 蔡佩欣 杨梦甦 向筑 廖生赟 张旭 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期680-682,共3页
目的 开发快速检测耐利福平结核分枝杆菌 (结核菌 )rpoB基因突变的DNA芯片。方法 根据结核菌rpoB基因序列设计探针并制作基因芯片 ,从临床样品中分离出结核菌的基因组DNA ,PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段 ,荧光标记后与芯... 目的 开发快速检测耐利福平结核分枝杆菌 (结核菌 )rpoB基因突变的DNA芯片。方法 根据结核菌rpoB基因序列设计探针并制作基因芯片 ,从临床样品中分离出结核菌的基因组DNA ,PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段 ,荧光标记后与芯片上含有的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交 ,同时与DNA直接测序法测定序列比较。结果  35株耐利福平结核菌中有 91 4 % (32 / 35 )用直接测序法检测出存在rpoB基因突变 ,DNA芯片的检测效率为 71 4 % (2 5 / 35 )。结论 用DNA芯片检测结核菌对利福平的耐药性具有较高的特异性和敏感性 ,可用于临床结核菌耐药性检测。 展开更多
关键词 DNA芯片 检测 耐药性 利福平 结核分枝杆菌 rpob 基因突变 结核病
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22种樟科植物DNA条形码分子鉴定 被引量:13
3
作者 许丹芸 张辉菊 +2 位作者 李可心 杨全 高弘扬 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第16期159-166,共8页
目的:筛选适合樟科植物的DNA条形码,对采集的22种樟科植物进行鉴定分类。方法:以22种樟科植物为实验材料,提取其DNA,使用不同的DNA条形码引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,电泳检测后进行双向测序。采用Codon Code Aligner软件对测序峰... 目的:筛选适合樟科植物的DNA条形码,对采集的22种樟科植物进行鉴定分类。方法:以22种樟科植物为实验材料,提取其DNA,使用不同的DNA条形码引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,电泳检测后进行双向测序。采用Codon Code Aligner软件对测序峰图和序列进行校对、拼接并去除正反向引物序列。将序列导入DNAMAN,进行多序列对比,查看并分析碱基变异位点。用MEGA计算不同种植物的遗传距离(K2P),根据遗传距离分析变异程度,基于邻接法构建系统进化树。结果:采用3对DNA条形码通用引物对22种樟科植物的DNA进行扩增测序后通过比较基因序列的特异碱基位点成功鉴别出其中20种植物。结论:matK序列能鉴定4个木姜子属植物;rbcL除粗脉桂外,对实验材料中楠属的3个物种都能进行区分;matK+rbcL+rpoB序列结合可鉴别20种樟科植物。其中matK序列对樟科植物鉴定效果最好,结果也表明将DNA条形码对植物进行组合鉴定,效果更佳。从分子角度研究樟科植物之间的亲缘关系,同时也为药用植物资源调查、栽培种植、开发保护利用提供依据。 展开更多
关键词 樟科 DNA条形码 鉴别 MATK RBCL rpob
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44株甘肃疑似非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定 被引量:12
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作者 连璐璐 姜元 +7 位作者 赵秀芹 同重湘 余琴 张敬蕊 董海燕 张媛媛 吴移谋 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期343-348,共6页
目的对甘肃44株疑似非结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定。方法收集2010年甘肃省兰州市胸科医院从结核病患者痰标本中分离的、抗酸染色阳性和改良罗氏培养基,TCH和PNB鉴别培养基培养鉴定为非结核分枝杆菌(non-tuberculosis Mycobacter... 目的对甘肃44株疑似非结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定。方法收集2010年甘肃省兰州市胸科医院从结核病患者痰标本中分离的、抗酸染色阳性和改良罗氏培养基,TCH和PNB鉴别培养基培养鉴定为非结核分枝杆菌(non-tuberculosis Mycobacteria,NTM),采用rpoB-PRA和PCR产物DNA测序等分子生物学方法进行细菌种的鉴定。结果共对44株疑似非结核分枝杆菌临床分离株进行了鉴定。经rpoB-PRA、rpoB和hsp65基因DNA测序分析,其中非结核分枝杆菌13株(29.55%),包括龟分枝杆菌(M.chelonae)5株,戈登分枝杆菌(M.gordonae)4株,胞内分枝杆菌(M.intracellulare)2株,赛特分枝杆菌(M.setense)1株,耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)1株;诺卡菌(Nocardia)31株(70.45%),其中鼻疽诺卡菌(N.farcinica)30株,卡尔涅亚诺卡菌(N.carnea)1株。结论抗酸染色阳性、PNB/TCH鉴定为非结核分枝杆菌临床分离株中包含不同种类的非结核分枝杆菌和诺卡菌,应开展进一步菌种鉴定,以便于临床正确诊断和合理治疗。 展开更多
关键词 非结核分枝杆菌 诺卡菌 鉴定 rpob PRA
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草鱼铜绿假单胞菌的鉴定及药物敏感性分析 被引量:10
5
作者 崔来宾 叶星 +4 位作者 邓国成 江小燕 田园园 白俊杰 黎坚平 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2010年第6期488-494,共7页
从患病草鱼C tenopharyngodon idella体表病灶上分离到一株优势菌,经分离纯化培养制成细菌悬液,分别以腹腔注射和浸泡两种方式感染草鱼。结果表明:该菌株能感染草鱼,且具较强毒力,腹腔注射0.2mL该菌液(3×109cfu/mL),可导致受试草鱼... 从患病草鱼C tenopharyngodon idella体表病灶上分离到一株优势菌,经分离纯化培养制成细菌悬液,分别以腹腔注射和浸泡两种方式感染草鱼。结果表明:该菌株能感染草鱼,且具较强毒力,腹腔注射0.2mL该菌液(3×109cfu/mL),可导致受试草鱼100%死亡;创伤浸泡感染(3×108cfu/mL),死亡率也达100%,受感染鱼出现与自然感染相似的类似赤皮病症状。对该病菌进行形态特征观察和主要理化特性分析,初步鉴定为铜绿假单胞菌Pseudom onas aeruginosa。进一步对该菌进行分子鉴定,共选用16S rRNA、RNA聚合酶β亚单位(rpoB)和促旋酶亚单位蛋白(gyrB)3个基因进行鉴定分析。序列克隆与BLAST分析结果显示,这3个基因均与GenBank上登录的铜绿假单胞菌的相应序列具有很高的同源性,16S rRNA、rpoB和gyrB基因与已知铜绿假单胞菌相应序列的同源性分别在99%、98%和93%以上。综合生理生化与分子鉴定结果,可判定所分离的菌株为铜绿假单胞菌。药敏试验结果显示:该菌对阿米卡星、菌必治、氟哌酸和妥布霉素等11种药物高度敏感,对链霉素和庆大霉素中度敏感,对罗红霉素、红霉素、四环素、苯唑青霉素、新霉素和头孢氨苄等16种药物具有耐药性。 展开更多
关键词 草鱼 铜绿假单胞菌 生化鉴定 16S RRNA rpob gyrB基因 药物敏感性
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河南省耐多药结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征 被引量:10
6
作者 赵玉玲 杨洪毅 +3 位作者 马晓光 石洁 李辉 赵东阳 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第2期166-169,共4页
目的:分析河南省耐多药(MDR)结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法:收集150株MDR结核分枝杆菌,应用PCR扩增利福平耐药相关基因rpoB编码区全长并测序,以结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA序列为参比序列,分析菌株的突变特征。结... 目的:分析河南省耐多药(MDR)结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法:收集150株MDR结核分枝杆菌,应用PCR扩增利福平耐药相关基因rpoB编码区全长并测序,以结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA序列为参比序列,分析菌株的突变特征。结果:MDR菌株rpoB基因编码区存在突变者占97.2%(140/144),突变在利福平耐药决定区(RRDR)内者占96.5%(139/144),RRDR内和RRDR外同时存在突变者占99.3%(139/140);突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB516。发现未被记录的15个突变位点和4个突变类型,其中rpoB1284位点突变可能是多态性位点,与利福平耐药无关。结论:检测河南地区结核分枝杆菌rpoB基因RRDR内位点的突变可预测MDR结核分枝杆菌的耐药性。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐多药 利福平 rpob 突变
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耐利福平结核分枝杆菌rpoA、rpoB、rpoC和rpoZ突变的研究 被引量:8
7
作者 廖小琴 刘梅 +5 位作者 彭章丽 彭文锋 刘倩倩 张建勇 张泓 陈玲 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2013年第22期38-40,共3页
目的了解结核分枝杆菌rpoA、rpoB、rpoC和rpoZ突变特征及其与利福平耐药的关系。方法对140株临床分离结核分枝杆菌进行利福平敏感性试验,并对耐利福平株分别进行rpoB耐药决定区及rpoA、rpoB、rpoC及rpoZ全基因测序。结果 140株结核分枝... 目的了解结核分枝杆菌rpoA、rpoB、rpoC和rpoZ突变特征及其与利福平耐药的关系。方法对140株临床分离结核分枝杆菌进行利福平敏感性试验,并对耐利福平株分别进行rpoB耐药决定区及rpoA、rpoB、rpoC及rpoZ全基因测序。结果 140株结核分枝杆菌中57株对利福平耐药。57株耐利福平结核分枝杆菌中,52株(91.2%)存在突变,其中50株为rpoB基因突变,2株为rpoC突变。在rpoB 765、1001、1156位及rpoC 51位发现新的突变位点。结论结核分枝杆菌对利福平耐药主要与rpoB和rpoC基因突变有关。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 利福平 突变 rpob rpoC
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吉林省耐多药结核分枝杆菌rpoB及katG基因突变特征分析 被引量:8
8
作者 张炜煜 杨修军 +2 位作者 王慧 张立夫 李可维 《中国实验诊断学》 2017年第10期1731-1735,共5页
目的分析吉林省耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB、katG基因突变特点,为建立本省快速耐多药检测方法提供参考。方法对吉林省耐多药结核分枝杆菌菌株扩增rpoB、katG基因测序后比对分析。结果耐多药结核分枝杆菌rpoB、katG基因的突变率... 目的分析吉林省耐多药结核分枝杆菌临床分离株rpoB、katG基因突变特点,为建立本省快速耐多药检测方法提供参考。方法对吉林省耐多药结核分枝杆菌菌株扩增rpoB、katG基因测序后比对分析。结果耐多药结核分枝杆菌rpoB、katG基因的突变率分别为83.53%和70.6%,突变类型包括点突变、联合突变和缺失。在rpoB基因中,82.30%突变发生在RRDR区域,最常见突变位点为rpoB 531、rpoB 526、rpoB 516。KatG基因突变率为70.6%,最常见突变位点为katG315,占所有突变的68.55%。结论吉林省耐多药结核分枝杆菌最常见突变位点为rpoB531、rpoB 526、rpoB 516和katG 315。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 耐多药 rpob KATG 基因突变
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Rapid Detection of rpoB Gene Mutations in Rif-resistant M.tuberculosis Isolates by Oligonucleotide Microarray 被引量:8
9
作者 AI-HUA SUN XING-LI FAN +3 位作者 LI-WEI LI LI-FANG WANG WEN-YING AN JIE YAN 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2009年第3期253-258,共6页
Objective To detect the specific mutations in rpoB gene of Mycobacterium tuberculosis by oligonucleotide microarray. Methods Four wild-type and 8 mutant probes were used to detect rifampin resistant strains. Target DN... Objective To detect the specific mutations in rpoB gene of Mycobacterium tuberculosis by oligonucleotide microarray. Methods Four wild-type and 8 mutant probes were used to detect rifampin resistant strains. Target DNA of M. tuberculosis was amplified by PCR, hybridized and scanned. Direct sequencing was performed to verify the results of oligonucleotide microarray Results Of the 102 rifampin-resistant strains 98 (96.1%) had mutations in the rpoB genes. Conclusion Oligonucleotide microarray with mutation-specific probes is a reliable and useful tool for the rapid and accurate diagnosis of rifampin resistance in M. tuberculosis isolates. 展开更多
关键词 Mycobacterium tuberculosis Rifampin resistance rpob gene / site mutation Oligonucleotide microarray/detection
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rpoB基因突变与结核分枝杆菌利福平耐药相关性研究 被引量:7
10
作者 周志红 王华洪 《实用预防医学》 CAS 2013年第10期1189-1191,共3页
目的探讨临床患者痰标本中分离的结核分枝杆菌rpoB基因突变与利福平耐药之间的关系。方法对115株结核分枝杆菌应用L-J药敏培养法,检测对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的耐药情况;根据rpoB基因序列设计包含利福平耐药决定... 目的探讨临床患者痰标本中分离的结核分枝杆菌rpoB基因突变与利福平耐药之间的关系。方法对115株结核分枝杆菌应用L-J药敏培养法,检测对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的耐药情况;根据rpoB基因序列设计包含利福平耐药决定区(RRDR)的扩增引物,PCR法进行扩增,运用生物信息学方法对耐药决定区扩增产物序列进行比对分析,对耐药株与非耐药株基因突变率进行统计学分析。结果 115株结核分枝杆菌经比例法药敏试验,RIF耐药株53株,占所有菌株的46.09%;53株RIF耐药株中39株rpoB基因存在不同位点的变异,突变率为73.58%,突变位点包括531、526、522、516、513、511,最主要的突变位点集中在531位,引起氨基酸呈Ser531Gln、Ser531Leu、Ser531Trp 3种形式改变;RIF敏感株62株,其中有2株检测到rpoB基因的突变,敏感株与耐药株突变率经McNemar统计检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结论岳阳地区rpoB基因变异与利福平耐药呈高度相关,rpoB基因最主要的突变位点位于531位和526位。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 利福平耐药 rpob 基因突变
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植生拉乌尔菌在院内感染中的分布特点与耐药性研究 被引量:10
11
作者 朱以军 单小云 +1 位作者 应华永 马闪珊 《中华危重症医学杂志(电子版)》 CAS 2014年第4期28-31,共4页
拉乌尔菌属以前被认为是克雷伯菌属的成员,由于16SrRNA基因和rpoB基因分析表明与克雷伯菌属不一致,2001年Drancourt等[1]学者提议将拉乌尔菌独立成属。目前拉乌尔菌属包括解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)、植生拉乌尔菌... 拉乌尔菌属以前被认为是克雷伯菌属的成员,由于16SrRNA基因和rpoB基因分析表明与克雷伯菌属不一致,2001年Drancourt等[1]学者提议将拉乌尔菌独立成属。目前拉乌尔菌属包括解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)、植生拉乌尔菌(Raoultella planticola)和土生拉乌尔菌(Raoultella terrigena),代表菌种为植生拉乌尔菌。 展开更多
关键词 院内感染 耐药性 16SRRNA基因 克雷伯菌属 基因分析 rpob 解鸟氨酸
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牦牛源干燥棒状杆菌的分离与鉴定 被引量:6
12
作者 温峰琴 项海涛 +3 位作者 郝宝成 邢小勇 包世俊 胡永浩 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期227-232,共6页
一只牦牛屠宰后肝有干酪样结节,为了探究其形成原因,本研究对该牦牛肝进行细菌的分离培养,对所分离可疑致病菌的16SrRNA以及rpoB基因序列进行扩增和序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验。结... 一只牦牛屠宰后肝有干酪样结节,为了探究其形成原因,本研究对该牦牛肝进行细菌的分离培养,对所分离可疑致病菌的16SrRNA以及rpoB基因序列进行扩增和序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验。结果显示,经细菌分离培养得到一株革兰阳性、棒状、可疑致病菌;其16S rRNA扩增片段大小1 483bp,GenBank序列编号为MH000696,该菌的16SrRNA与干燥棒状杆菌GD34株(KF928790.1)等的相似性最高,序列一致性为99%,系统进化树显示,本菌与干燥棒状杆菌在同一进化分支上;rpoB基因扩增片段大小434bp,GenBank序列编号为MH006608;Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为变异库克菌,可信度为93%。该菌对妥布霉素、氨曲南、头孢哌酮、米诺环素等多种药物高度敏感。综上所述,分离的细菌为干燥棒状杆菌,但基因序列,如rpoB等以及生化表型均存在一定程度的变异,本研究为兽医临床上该菌的分离和鉴定提供了依据,且为该菌的致病性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 干燥棒状杆菌 16SrRNA rpob 生化试验 药敏试验
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DNA芯片联合检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌及其临床应用 被引量:6
13
作者 叶淦湖 麦宝媛 +3 位作者 刘芳 欧阳新根 李健青 廖生赟 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1045-1047,1057,共4页
目的开发快速检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因突变的DNA芯片。方法根据结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核分枝杆菌的基因组DNA,PCR扩增含有上述几个基因突变... 目的开发快速检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因突变的DNA芯片。方法根据结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核分枝杆菌的基因组DNA,PCR扩增含有上述几个基因突变位点的特异DNA片段,并事先在PCR引物的5′端作生物素标记,然后与膜条芯片上的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,通过生物素-链霉亲和素-过氧化物酶体系显色,直接观察突变情况,以此来判断耐药结果。结果35个利福平和异烟肼单耐药或多药耐药的结核分枝杆菌中有82.9%用芯片法检出的结果与药敏培养法一致;其中利福平耐药样品突变检出率为100.0%;有20.0%异烟肼耐药的样品芯片未检出突变,可能是突变发生在芯片检测位点范围之外。结论用DNA芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核分枝杆菌耐药性检测。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 rpob KATG inhA基因 利福平 异烟肼 DNA芯片
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浙江地区耐多药结核分枝杆菌基因突变特征分析 被引量:6
14
作者 赵刚 贾庆军 +3 位作者 吴亦斐 黄银燕 唐磊明 曾美纯 《中华疾病控制杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期66-71,共6页
目的分析浙江地区耐多药结核分枝杆菌(M.tuberculosis complex, MTBC)异烟肼(isoniazid, INH)和利福平(rifampicin, RIF)耐药相关基因突变特征。方法对患者痰标本阳性培养物进行菌种鉴定,提取耐多药菌株DNA,应用PCR法对inhA、katG和rpoB... 目的分析浙江地区耐多药结核分枝杆菌(M.tuberculosis complex, MTBC)异烟肼(isoniazid, INH)和利福平(rifampicin, RIF)耐药相关基因突变特征。方法对患者痰标本阳性培养物进行菌种鉴定,提取耐多药菌株DNA,应用PCR法对inhA、katG和rpoB RRDR区进行扩增,并将扩增产物直接进行基因测序。结果共鉴定出3 317株MTBC,对应的患者中初治为3 009例,复治为308例,耐多药结核病(multidrug-resistant tuberculosis, MDR-TB)为84例,占比为2.53%(84/3 317)。其中,在INH耐药方面,47株分别在katG(315)或inhA(-15/-8)发生单位点突变,19株同时出现katG(315)和inhA(-15/-8)突变,18株未检测出上述基因突变,基因型同表型的符合率为78.57%(66/84),突变频率最高的位点是Ser315Thr,占47.62%(40/84)。在RIF耐药方面,79株在rpoB(511、512、513、516、522、526和531位点)出现突变,2株同时出现511/513和511/516突变,突变频率最高的位点是Ser531Leu,占58.33%(49/84),3株未检测出rpoB突变,基因型同表型的符合率为96.43%(81/84)。结论浙江地区MDR-TB流行株基因突变仍然集中在常见的基因位点,表明在本地区利用Xpert MTB/RIF筛查MDR-TB患者仍具有较高的应用价值。 展开更多
关键词 浙江 结核 INHA KATG rpob 基因突变
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基于16S rRNA和rpoB基因的分子系统发育分析在铜绿假单胞菌鉴定中的应用 被引量:6
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作者 何艳霞 向诗非 +6 位作者 李浇 何金蕾 张俊荣 袁冬梅 秦翰霄 陈达丽 陈建平 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第4期27-35,共9页
为对比16S rRNA和rpo B基因分子系统发育分析与传统表型分类法对铜绿假单胞菌的鉴定,评估16S rRNA和rpo B基因序列分析在铜绿假单胞菌鉴定中的应用,用表型分类方法对临床自动微生物鉴定系统鉴定为铜绿假单胞菌的23株分离株进行再鉴定,PC... 为对比16S rRNA和rpo B基因分子系统发育分析与传统表型分类法对铜绿假单胞菌的鉴定,评估16S rRNA和rpo B基因序列分析在铜绿假单胞菌鉴定中的应用,用表型分类方法对临床自动微生物鉴定系统鉴定为铜绿假单胞菌的23株分离株进行再鉴定,PCR扩增23株分离株16S rRNA和rpo B基因片段,并测序进行系统发育分析。结果表明,表型再鉴定结果与自动微生物鉴定系统鉴定结果一致。基于两个基因的系统发育分析均显示分离株p22与不动杆菌属序列聚为一枝,其余22株分离株与铜绿假单胞菌序列聚为一枝。因此p22应鉴定为不动杆菌,16S rRNA和rpo B基因序列分析均能准确鉴定铜绿假单胞菌并能较好建立假单胞菌属内种间关系。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 16S RRNA rpob
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贵州省2株牛种布鲁氏菌分子流行病学特征分析 被引量:2
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作者 谭勤琴 王月 +5 位作者 刘英 营夏 杨幸贵 马青 胡勇 李世军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期51-57,共7页
目的分析贵州省牛种布鲁氏菌分子流行病学特征,为牛种布鲁氏菌病疫情的防控提供科学依据。方法采用BCSP31-PCR及AMOS-PCR技术对经传统方法鉴定为牛种布鲁氏菌的2株分离株进行属/种复核,采用基于布鲁氏菌rpoB基因的单核苷酸多态性分析了... 目的分析贵州省牛种布鲁氏菌分子流行病学特征,为牛种布鲁氏菌病疫情的防控提供科学依据。方法采用BCSP31-PCR及AMOS-PCR技术对经传统方法鉴定为牛种布鲁氏菌的2株分离株进行属/种复核,采用基于布鲁氏菌rpoB基因的单核苷酸多态性分析了解其rpoB基因型,采用MLVA-16技术进行MLVA分型,了解其与国内牛种布鲁氏菌的聚类关系,采用MLST技术分析其序列型及其与国内菌株间的遗传进化关系。结果2株分离株经BCSP31-PCR和AMOS-PCR技术被鉴定为布鲁氏菌属细菌,未能明确其具体种型;其rpoB基因型相同;MLVA分型与新疆牛种布鲁氏菌共享同一MLVA-16型(4-5-3-12-2-2-3-1-6-43-8-5-5-5-3-3);MLST分析鉴定2株菌均为ST2型,最小间距图显示2株菌与布鲁氏菌属内的牛种布鲁氏菌遗传距离最近,属同一个遗传复合体。结论贵州省2株牛种布鲁氏菌分离株间的遗传距离近,与新疆牛种3型布鲁氏菌为同一MLVA型,提示分离株引起的感染可能为外省输入。 展开更多
关键词 牛种布鲁氏菌 rpob MLVA MLST 贵州省
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高通量测定技术检测结核分枝杆菌耐利福平的研究 被引量:5
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作者 赵锦荣 白玉杰 +3 位作者 王琰 张庆华 罗明 闫小君 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期297-300,共4页
目的基于焦磷酸测序(pyrosequencing)技术,建立耐利福平结核分枝杆菌快速检测方法,并探讨其临床应用价值。方法设计一对聚合酶链反应(PCR)引物,其中一引物经生物素化修饰,PCR扩增含耐药决定区一297bp长的rpoB基因片段,借用链亲和素包被... 目的基于焦磷酸测序(pyrosequencing)技术,建立耐利福平结核分枝杆菌快速检测方法,并探讨其临床应用价值。方法设计一对聚合酶链反应(PCR)引物,其中一引物经生物素化修饰,PCR扩增含耐药决定区一297bp长的rpoB基因片段,借用链亲和素包被磁珠纯化单链PCR产物。设计2个正向测序引物,运用pyrosequencing技术对耐药决定区进行序列测定。通过对一系列10倍稀释的结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA进行分析,评价所建立方法的检测敏感性。通过对已知耐药表型的结核分枝杆菌临床分离株进行分析,评价所建立方法的检测特异性。结果PCR扩增后,可在2h内得到耐药决定区序列。所建立方法的检测灵敏度为50fgDNA/反应。在所分析的利福平敏感株中均未检测到耐药决定区突变,而在耐利福平菌株中均检测到耐药决定区突变。结论所建立的方法具有自动化程度高和结果准确等特点,适用于对耐利福平结核分枝杆菌进行快速高通量检测。 展开更多
关键词 高通量 耐利福平结核分枝杆菌 技术检测 聚合酶链反应(PCR) 耐药决定区 PCR扩增 快速检测方法 临床应用价值 建立方法 焦磷酸测序 PCR产物 H37RV 临床分离株 检测灵敏度 自动化程度 生物素化 基因片段 rpob 链亲和素 序列测定
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Mycorrhizal symbiosis modulates the rhizosphere microbiota to promote rhizobia–legume symbiosis 被引量:8
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作者 Xiaolin Wang Huan Feng +15 位作者 Yayu Wang Mingxing Wang Xingguang Xie Huizhong Chang Like Wang Jicheng Qu Kai Sun Wei He Chunyan Wang Chuanchao Dai Zhaohui Chu Changfu Tian Nan Yu Xuebin Zhang Huan Liu Ertao Wang 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2021年第3期503-516,共14页
Plants establish symbioses with mutualistic fungi,such as arbuscular mycorrhizal(AM)fungi,and bacteria,such as rhizobia,to exchange key nutrients and thrive.Plants and symbionts have coevolved and represent vital comp... Plants establish symbioses with mutualistic fungi,such as arbuscular mycorrhizal(AM)fungi,and bacteria,such as rhizobia,to exchange key nutrients and thrive.Plants and symbionts have coevolved and represent vital components of terrestrial ecosystems.Plants employ an ancestral AM signaling pathway to establish intracellular symbioses,including the legume–rhizobia symbiosis,in their roots.Nevertheless,the relationship between the AM and rhizobial symbioses in native soil is poorly understood.Here,we examined how these distinct symbioses affect root-associated bacterial communities in Medicago truncatula by performing quantitative microbiota profiling(QMP)of 16S rRNA genes.We found that M.truncatula mutants that cannot establish AM or rhizobia symbiosis have an altered microbial load(quantitative abundance)in the rhizosphere and roots,and in particular that AM symbiosis is required to assemble a normal quantitative root-associated microbiota in native soil.Moreover,quantitative microbial co-abundance network analyses revealed that AM symbiosis affects Rhizobiales hubs among plant microbiota and benefits the plant holobiont.Through QMP of rhizobial rpoB and AM fungal SSU rRNA genes,we revealed a new layer of interaction whereby AM symbiosis promotes rhizobia accumulation in the rhizosphere of M.truncatula.We further showed that AM symbiosis-conditioned microbial communities within the M.truncatula rhizosphere could promote nodulation in different legume plants in native soil.Given that the AM and rhizobial symbioses are critical for crop growth,our findings might inform strategies to improve agricultural management.Moreover,our work sheds light on the co-evolution of these intracellular symbioses during plant adaptation to native soil conditions. 展开更多
关键词 arbuscular mycorrhizae RHIZOBIA SYMBIOSIS rhizosphere microbiota quantitative microbiota profiling rpob
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包装饮用水中检出铜绿假单胞菌的同源性分析 被引量:4
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作者 田国梁 雷柳冰 +2 位作者 李发俊 张琼丹 黄慧思 《标准科学》 2022年第5期128-134,共7页
【目的】为研究包装饮用水中检出铜绿假单胞菌种群特征,同时验证各方法在包装饮用水铜绿假单胞菌检验分析中的适用效果。【方法】采用飞行质谱(MALDI TOF MS)、16S rRNA基因序列测定、rpo B基因序列测定3种方法,对30株广东省东莞市包装... 【目的】为研究包装饮用水中检出铜绿假单胞菌种群特征,同时验证各方法在包装饮用水铜绿假单胞菌检验分析中的适用效果。【方法】采用飞行质谱(MALDI TOF MS)、16S rRNA基因序列测定、rpo B基因序列测定3种方法,对30株广东省东莞市包装饮用水食品安全监督抽检中检出的铜绿假单胞菌进行同源性分析。同时与国标GB 8538-2016中生化鉴定方法结果和菌株表型进行比对,确认常规检验结果。【结果】东莞地区包装饮用水中污染的铜绿在CN平板上菌落形态主要为浅绿色,其次为深绿色,极少数为黄色。飞行质谱法、16S rRNA法都能100%符合生化鉴定结果。飞行质谱结果与表型存在一定相关性,深绿色菌株基本集中在进化树的上方,且10株深绿色菌株中有8株集中在一个分支上。16S rRNA分型结果能识别到独特的黄色菌落菌株18A3074-1,其与其他菌株区别明显,处在进化树的最边缘位置。rpo B基因序列分型在菌株亲缘关系较近时具备一定的分辨率,来源于同一生产企业的4株菌株呈现聚集状态。【结论】质谱和16S rRNA同源分析结果都与菌株表型相关,初步积累了本地包装饮用水中的铜绿菌株库,为监管和污染溯源调查提供数据基础。3种方法各自具备独特优势:质谱法适用于日常检验鉴定,16S rRNA法适合疑难菌株鉴定,rpo B基因法可以用于近亲缘关系菌株的分型和溯源调查。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 包装饮用水 飞行质谱 16S rRNA rpob 同源性分析
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克雷伯菌16S rDNA和rpoB基因系统进化及序列特征分析 被引量:5
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作者 郭晓琳 王多春 +5 位作者 阚飙 张燕敏 张怡 左颖 魏来 高燕 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期97-102,共6页
目的比较分析克雷伯菌属的种之间16S rDNA和rpoB系统进化发育关系和序列进化特征。方法选取经生化鉴定的克雷伯菌18株,提取菌株染色体作为模板,分别使用16S rDNA和rpoB通用引物扩增并测序16S rDNA和rpoB序列。与GenBank中目前已公布的... 目的比较分析克雷伯菌属的种之间16S rDNA和rpoB系统进化发育关系和序列进化特征。方法选取经生化鉴定的克雷伯菌18株,提取菌株染色体作为模板,分别使用16S rDNA和rpoB通用引物扩增并测序16S rDNA和rpoB序列。与GenBank中目前已公布的8种克雷伯属菌株16S rDNA和rpoB序列各8条、除克雷伯菌外其他肠道菌株的16S rDNA和rpoB序列各9条一起,共计各35条16S rDNA和rpoB序列,在MEGA4.0中建立进化树并进行分群分析,使用DNAStar/MegAlign程序比较分析8种克雷伯菌的种间16S rDNA和rpoB序列变异碱基位点,并做分歧度分析。结果在所有受试的16SrDNA和rpoB的各35条序列中,16S rDNA和rpoB进化发育树都将克雷伯菌区分为3个群:分离的18株克雷伯菌中,15株肺炎亚种与GenBank中除产酸克雷伯菌和运动克雷伯菌外的其余6种克雷伯菌聚为一群(Ⅰ),其余3株克雷伯菌(FX246、FX280和FX286),经生化鉴定为产酸克雷伯菌,与GenBank中产酸克雷伯菌(DQ835530)聚为一群(Ⅱ);而GenBank中的运动克雷伯菌单独聚为一群(Ⅲ);进一步的分析,在rpoB进化发育树中,无论是Ⅰ群和Ⅱ群,还是Ⅰ群内的两个亚群,rpoB进化发育树的结点处自引导值都明显高于16S rDNA进化发育树;而且rpoB对产酸克雷伯菌的分群优于16S rDNA。对克雷伯菌的序列分析发现,16S rDNA序列存在41个碱基变异位点,有4个易变区,rpoB序列存在63个碱基变异位点,有1个易变区;克雷伯菌16S rDNA和rpoB的相似性分别为95.9%~100%和90.2%~100%。进一步的克雷伯菌种间序列分歧值分析,rpoB分歧值(0~10.6)高于16S rDNA(0~4.0)。结论克雷伯菌rpoB比16S rDNA具有更高的分歧度,在克雷伯菌属内种的分子分类和鉴定中,rpoB比16S rDNA基因更具优越性。 展开更多
关键词 克雷伯菌 16S RDNA rpob 系统进化发育 序列特征
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