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奶牛RORα基因的生物信息学分析与组织表达谱检测
1
作者 刘薇 王博 +8 位作者 王逢博 张粉丽 杨王浩 赵泓淙 高登科 张海森 李超 靳亚平 陈华涛 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期13-24,共12页
本研究旨在克隆奶牛(Bos taurus)维甲酸相关孤儿受体α(retinoic acid-related orphan receptor alpha,RORα)的蛋白编码序列(coding sequence,CDS),预测分析其结构与功能特征并验证其真核表达载体在HEK293T细胞中的过表达效果,进一步检... 本研究旨在克隆奶牛(Bos taurus)维甲酸相关孤儿受体α(retinoic acid-related orphan receptor alpha,RORα)的蛋白编码序列(coding sequence,CDS),预测分析其结构与功能特征并验证其真核表达载体在HEK293T细胞中的过表达效果,进一步检测RORα基因在奶牛不同组织的表达谱。本研究提取了奶牛肝脏组织的总RNA,反转录得到cDNA,经过PCR扩增后获得奶牛RORα基因的CDS区片段,随后将其与pcDNA3.1-Puro-N-3HA线性化载体进行同源重组连接。转化感受态细胞DH5α后,对初步鉴定为阳性克隆的重组质粒进行测序。结合测序结果,利用ExPASy、Protscale和DNAstar等生物信息学软件,对奶牛RORα蛋白的理化性质和功能特性进行预测分析。将对照组空质粒pcDNA3.1-Puro-N-3HA和试验组重组质粒pcDNA-3.1-3HA-RORα分别转染至HEK293T细胞,借助实时定量PCR和蛋白质印迹法检测奶牛RORα基因的过表达效果。借助半定量RT-PCR技术检测奶牛RORα基因在肝脏、脾脏和肌肉等7个组织的相对表达量。PCR结果显示,成功克隆了奶牛RORα基因的CDS区片段;酶切及测序结果表明重组质粒pcDNA3.1-3HA-RORα构建成功;生物信息学软件预测分析结果表明,奶牛RORα蛋白三级结构与山羊(Capra hircus)、小鼠(Mus musculus)的高度相似;不同物种间同源性比对显示,奶牛RORα基因与山羊的相似性最高;实时定量PCR和蛋白印迹法结果表明,与对照组相比,试验组HEK293T细胞中奶牛RORα基因的mRNA和蛋白表达水平均显著升高;半定量RT-PCR结果表明,在所检测的7个组织中,奶牛RORα基因在肝脏表达量最高,在脾脏表达量最低。本研究成功克隆了奶牛RORα基因的CDS区片段,在HEK293T细胞中验证了其真核表达载体在mRNA和蛋白水平的表达效果,并分析了其结构与功能特征,检测了其在不同组织的表达谱,为深入探究其在奶牛生殖与代谢调控中的作用机制提供了前期基础。 展开更多
关键词 奶牛 表达谱 rorα基因 生物钟 生物信息学分析
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绒山羊RORα基因2种亚型的结构与进化分析
2
作者 吴江鸿 刘永志 +1 位作者 孙海莲 张文广 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期110-117,共8页
为深入研究绒山羊RORα基因的结构及功能,利用cDNA末端快速扩增法(RACE)结合转录组获得了绒山羊(Capra hircus)维甲酸相关孤核受体(retinoic acid receptor-related orphan receptorα,RORα)基因的2个亚型:RORα1和RORα2(GenBank登录... 为深入研究绒山羊RORα基因的结构及功能,利用cDNA末端快速扩增法(RACE)结合转录组获得了绒山羊(Capra hircus)维甲酸相关孤核受体(retinoic acid receptor-related orphan receptorα,RORα)基因的2个亚型:RORα1和RORα2(GenBank登录号分别是HM_061155和HM_358053)。序列分析表明,RORα1序列全长1 620bp,包括5′端非翻译区(untranslated region,UTR)29bp、3′端非翻译区211bp和开放阅读框(open reading frame,ORF)1 380bp,共编码459个氨基酸,分子质量约为52.3ku,理论等电点6.25。RORα2序列全长1 694bp,包括5′UTR 76bp、3′UTR 211bp和ORF 1 407bp,共编码468个氨基酸;与人RORα4的长度相同,相似性达99%,分子质量约为53.4ku,理论等电点为6.37。结果显示:1)RORα1氨基酸序列缺少大多数核受体具有的调节区(A/B区),预测的二级结构少一个β-折叠基序(YFV);2)RORα的DNA结合区到配体结合区部分属于纯化选择,A/B区在长度和序列方面变异都很大。 展开更多
关键词 绒山羊 rorα基因 RACE 编码蛋白 进化
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母体埋植褪黑激素对子一代獭兔内脏组织中RORα基因表达的影响
3
作者 康景 封洋 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2020年第1期86-89,94,共5页
本研究旨在探讨獭兔母体埋植褪黑激素(MT)对RORα基因在子一代獭兔内脏组织中的表达及影响,选择110只相近月龄的健康母獭兔同日配种,第5日后选出已确定妊娠的母兔76只,随机平均分为2组,对照组母兔不做处理,试验组母兔埋植10 mg MT。在... 本研究旨在探讨獭兔母体埋植褪黑激素(MT)对RORα基因在子一代獭兔内脏组织中的表达及影响,选择110只相近月龄的健康母獭兔同日配种,第5日后选出已确定妊娠的母兔76只,随机平均分为2组,对照组母兔不做处理,试验组母兔埋植10 mg MT。在仔兔出生第1天时每组选15只宰杀,取皮肤、肌肉、肺脏、心脏、肝脏、肾脏及十二指肠组织样品,测定仔兔组织样品中RORα基因的表达量,结果表明:RORα基因在子一代獭兔各组织中的表达量与表达模式均不同,该基因在子一代獭兔皮肤组织中的表达水平极显著上调,在肌肉、肺脏组织中显著上调,在肝脏组织中极显著下调,在心脏、肾脏组织中显著下调,在十二指肠中的表达与对照组相比无显著变化。 展开更多
关键词 獭兔 褪黑激素 rorα基因 内脏组织
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鸡RORα真核表达载体的构建及其在MSB1细胞中的表达
4
作者 尤钊 左珂朦 +5 位作者 余祖华 丁轲 王垚垚 刘彤 张梦珂 邱静静 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第7期1791-1797,共7页
为构建鸡维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)的真核表达载体,并检测其在MSB1细胞中的表达效果,本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列(登录号:NM_001289887.1)设计特异性引物,从鸡肝脏组织中... 为构建鸡维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)的真核表达载体,并检测其在MSB1细胞中的表达效果,本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列(登录号:NM_001289887.1)设计特异性引物,从鸡肝脏组织中提取总RNA,经反转录合成cDNA,以此为模板进行PCR扩增,将扩增的特异性RORα基因片段连接pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-RORα,再用SalⅠ和BamHⅠ双酶切克隆载体pMD18-T-RORα和真核表达载体pEGFP-N1,将酶切回收的RORα与pEGFP-N1片段进行连接,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-RORα,经PCR、酶切和测序验证准确性后,将其转染MSB1细胞,于转染后48h荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,并采用实时荧光定量PCR检测鸡RORα在MSB1细胞中的表达水平。结果显示,从构建的重组质粒pEGFP-N1-RORα中可扩增出大小约1 600bp的特异性片段,用SalⅠ和BamHⅠ可切出大小约4 700和1 600bp的两条带。实时荧光定量PCR结果显示,转染MSB1细胞48h后,与对照组相比,重组真核表达载体转染组中鸡RORα基因mRNA水平显著增加(P<0.05)。表明本试验成功构建了鸡RORα的真核表达载体,该载体可在MSB1细胞中表达鸡RORα,为进一步研究鸡RORα对MSB1细胞增殖的影响奠定基础。 展开更多
关键词 鸡 甲酸相关孤核受体α(rorα)基因 真核表达载体 MSB1细胞 表达
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