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TgAMA1和TgRON2抗原表位合成肽鼻内免疫抗小鼠弓形虫病的作用 被引量：1
1
作者 钱学成 张铁娥 +1 位作者 孟晓丽 刘红丽 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第2期189-194,206,共7页
目的观察含弓形虫顶膜抗原1(TgAMA1)和棒状体颈部蛋白2(TgRON2)T、B细胞抗原表位的多肽鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫病免疫保护作用。方法化学方法合成含有经生物信息学预测的TgAMA1和TgRON2T细胞和B细胞表位多肽。5周龄BALB/c小鼠48只... 目的观察含弓形虫顶膜抗原1(TgAMA1)和棒状体颈部蛋白2(TgRON2)T、B细胞抗原表位的多肽鼻内免疫小鼠诱导的抗弓形虫病免疫保护作用。方法化学方法合成含有经生物信息学预测的TgAMA1和TgRON2T细胞和B细胞表位多肽。5周龄BALB/c小鼠48只随机分为AMA1组、RON2组、A1+R2组和对照组(n=12),分别用AMA1 30μg、RON2 30μg或(A1+R2)各15μg鼻内免疫,对照组用20μl生理盐水滴鼻,共免疫3次,间隔2周。末次免疫后2周,采用ELISA法检测血清抗体水平;处死小鼠,取鼻、膀胱和肠道洗液,ELISA法检测SIgA水平;无菌取脾,制备脾细胞悬液,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测淋巴细胞培养上清细胞因子水平;取肝、脑组织,计数速殖子虫荷,以评价免疫诱导的黏膜及系统免疫应答和抗弓形虫感染保护作用。结果用AMA1和RON2多肽免疫小鼠可诱导产生高水平的特异性抗体反应和淋巴增殖反应。肽免疫小鼠血清特异性IgA、总IgG、IgG1和IgG2a水平均高于对照组(P<0.05或P<0.01),其中A1+R2组最高。小鼠脾淋巴细胞刺激指数(SI)显示,AMA1组(1.171±0.116)、RON2组(1.362±0.110)和A1+R2组(1.941±0.162)高于PBS组(0.743±0.081)(P<0.05或P<0.01),A1+R2组亦高于单肽组(P<0.05)。肽免疫小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-2和IL-4水平显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。肽免疫诱导了小鼠高水平的黏膜免疫应答,肽免疫小鼠鼻腔、膀胱和小肠冲洗液SIgA水平均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。肽免疫小鼠获得部分抗弓形虫感染保护作用,与对照组比较,肽免疫小鼠肝和脑中速殖子负荷显著降低,减虫率分别为A1+R2组55.79%和55.68%、AMA1组52.36%和46.46%、RON2组40.02%和47.33%(P<0.05或P<0.01)。结论含有T和B细胞表位的AMA1和RON2肽是一种有效的抗弓形虫病候选抗原,鼻内免疫小鼠可诱导强烈的黏膜和系统免疫应答,两种抗原表位肽联合使用的免疫效应比单用AMA1或RON2更强,抗弓� 展开更多
关键词 刚地弓形虫 抗原表位 顶膜抗原1 棒状体颈部蛋白2 肽疫苗 鼻内免疫
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柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白Et RON2 L1-2特性与功能初步分析
2
作者 陈烺 刘曼玉 +6 位作者 赵其平 朱顺海 王丽慧 郭慧琳 韩红玉 董辉 郝力力 《复旦学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期389-397,共9页
为研究柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2(RON2)同源分子——Et RON2 L1-2的分子特性与功能,利用实时荧光定量PCR、Western blot、入侵抑制试验、间接免疫荧光试验以及双分子荧光互补实验(BiFC)等方法分析其生物学特征。结果发现Et RON2 L... 为研究柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2(RON2)同源分子——Et RON2 L1-2的分子特性与功能,利用实时荧光定量PCR、Western blot、入侵抑制试验、间接免疫荧光试验以及双分子荧光互补实验(BiFC)等方法分析其生物学特征。结果发现Et RON2 L1-2蛋白序列与Et RON2仅有29.69%的同源性,转录水平和蛋白水平均在第二代裂殖子阶段最高。抗r Et RON2 L1-2抗体对子孢子入侵细胞有明显抑制作用。Et RON2 L1-2蛋白主要分布于经PBS孵育子孢子的胞质和表面,并分布于经完全培养基孵育或入侵DF-1细胞后2 h子孢子的顶端;其表达量在滋养体和未成熟裂殖体增加,且在带虫空泡膜也有分布;在第二代裂殖子中主要分布于整个胞质。Et RON2 L1-2与柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原4(AMA4)之间存在互作关系。 展开更多
关键词 球虫 柔嫩艾美耳球虫 棒状体颈部蛋白2同源分子 入侵
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马泰勒虫RON2基因真核表达及互作蛋白预测分析
3
作者 芦星 范士龙 +7 位作者 刘明明 王水怡 刘雨桐 李思媛 王金明 巴音查汗 刘丹丹 张伟 《动物医学进展》 北大核心 2023年第7期23-30,共8页
为探究马泰勒虫入侵宿主细胞关键蛋白RON2的功能及其互作蛋白,并尝试解析马泰勒虫入侵关键结构--移动连接体,以马泰勒虫新疆分离株为研究对象,在课题组前期获得马泰勒虫RON 2基因的基础上,设计特异性引物,构建重组蛋白真核表达载体pmche... 为探究马泰勒虫入侵宿主细胞关键蛋白RON2的功能及其互作蛋白,并尝试解析马泰勒虫入侵关键结构--移动连接体,以马泰勒虫新疆分离株为研究对象,在课题组前期获得马泰勒虫RON 2基因的基础上,设计特异性引物,构建重组蛋白真核表达载体pmcherry-TeRON2。融合表达重组蛋白,制备His-TeRON2多克隆抗体,通过间接免疫荧光和Western blot鉴定蛋白的表达情况,最后对RON 2基因编码蛋白的互作蛋白进行预测分析。成功构建pmcherry-TeRON2真核表达质粒,获得的马泰勒虫TeRON2重组蛋白分子质量为37 ku,间接免疫荧光和Western blot结果显示,重组蛋白能够被抗体特异性识别,大小正确。间接ELISA结果显示,当抗原包被量为2μg/mL时,His-TeRON2小鼠多克隆抗体效价为1∶409600,多克隆抗体真核重组蛋白发生特异性反应。TeRON2蛋白互作网络预测显示,共有10种蛋白与马泰勒虫TeRON2蛋白发生相互作用关系,大部分蛋白都与虫体入侵宿主细胞的关键结构移动连接体相关,包括顶膜抗原1、棒状体颈部蛋白4及棒状体颈部蛋白11、棒状体相关蛋白和滑行相关蛋白等,另外与鸟苷酸环化酶和钙依赖激酶也有相互作用关系。推测TeRON2蛋白可能与入侵关键结构移动连接体(MJ)形成有关,参与虫体对宿主细胞的入侵过程,为进一步深入研究马泰勒虫TeRON2蛋白作为疫苗候选抗原以及在虫体入侵宿主过程中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 马泰勒虫 ron 2基因 真核表达 互作蛋白预测 多克隆抗体制备
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