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PMA及乏氧诱导VEGF上调的细胞模型构建及用于RNAi研究
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作者 杨艳 吕国军 +5 位作者 郭昕 张德蒙 于炜婷 张英 刘袖洞 马小军 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第2期265-269,共5页
目的:探讨佛波酯(PMA)与乏氧诱导对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达量的影响,构建适合RNA干扰(RNAi)的体外细胞模型。方法:通过酶联免疫吸附试验(ELISA法)在蛋白质水平上检测细胞分泌的VEGF量,并用激光共聚焦... 目的:探讨佛波酯(PMA)与乏氧诱导对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达量的影响,构建适合RNA干扰(RNAi)的体外细胞模型。方法:通过酶联免疫吸附试验(ELISA法)在蛋白质水平上检测细胞分泌的VEGF量,并用激光共聚焦显微镜观察小干扰RNA(siRNA)转染的细胞胞吞及细胞形态。结果:1 M PMA处理细胞2 h能明显上调B16-F10细胞中VEGF蛋白的合成及分泌,与常规培养相比,细胞可增加50%的VEGF水平。再经乏氧诱导48 h,稳定释放到培养液里的VEGF浓度大幅提高200%,范围在55-65 pg/mL/h。结论:经PMA和乏氧诱导后,B16-F10细胞稳定的VEGF分泌量与一定时间内分泌的稳定性均表明其适合作为RNAi的体外细胞模型。初步的RNAi结果表明,TKO/siRNA纳米粒与壳聚糖/siRNA纳米粒对于VEGF的沉默效率达40%。 展开更多
关键词 小鼠黑色素瘤细胞 血管内皮细胞生长因子 PMA诱导 乏氧诱导 rnai模型
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宫颈癌细胞代谢调控异常与HPV16编码基因表达的关系
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作者 努尔满古力·肉孜 彭敏 张玲 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2022年第12期902-905,910,共5页
目的:探讨人乳头瘤病毒16(HPV16)感染及宫颈癌发生与宫颈癌细胞内代谢调控异常的关系。方法:利用HPV16编码基因E6或E7序列特异性发夹结构RNA(shRNA)和绿色荧光蛋白质(GFP)的慢病毒表达载体,感染HPV16阳性SiHa宫颈癌细胞,建立RNA干扰(RN... 目的:探讨人乳头瘤病毒16(HPV16)感染及宫颈癌发生与宫颈癌细胞内代谢调控异常的关系。方法:利用HPV16编码基因E6或E7序列特异性发夹结构RNA(shRNA)和绿色荧光蛋白质(GFP)的慢病毒表达载体,感染HPV16阳性SiHa宫颈癌细胞,建立RNA干扰(RNAi)宫颈癌细胞模型。通过激光共聚焦显微成像和定量RT-PCR分析,评价细胞感染和抑制效率。采用高分辨魔角旋转联合核磁共振技术(HRMAS-1HNMR)和生物信息学方法,对干预前后的宫颈癌细胞进行代谢谱分析,明确差异表达的候选小分子代谢物。结果:建立选择性抑制HPV16编码基因E6或E7表达的RNAi细胞模型,通过代谢组学研究,明确HPV16编码基因表达可能影响细胞内13种小分子化合物表达水平变化,涉及糖脂和氨基酸代谢调控,其中α和β-葡萄糖、乙酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸含量显著上升,乳酸、丙氨酸、甲酸含量下降。结论:HPV16感染引起宫颈癌细胞代谢调控异常,其中HPV16编码基因E6和E7表达可能是重要因素。 展开更多
关键词 宫颈癌 HPV感染 代谢组学 rnai细胞模型
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