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OsCtBP-A基因过量表达和RNAi沉默对水稻根系生长和抗性的影响
1
作者 吴茂森 李磊 +2 位作者 吴静 陈华民 何晨阳 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2010年第1期106-110,共5页
为了阐明己克隆的水稻C端结合蛋白家族基因O sC tBP-A的功能,构建了该基因的过量表达和RNA i沉默载体,通过农杆菌介导转化水稻品种日本晴愈伤组织,分别获得了45个过量表达和75个RNA i沉默T0代转基因植株,并进行了PCR和GUS染色鉴定。T1... 为了阐明己克隆的水稻C端结合蛋白家族基因O sC tBP-A的功能,构建了该基因的过量表达和RNA i沉默载体,通过农杆菌介导转化水稻品种日本晴愈伤组织,分别获得了45个过量表达和75个RNA i沉默T0代转基因植株,并进行了PCR和GUS染色鉴定。T1代过量表达株O sC tBP-A基因表达量明显增加,苗期根系生长增加,对水稻白叶枯病抗性无明显变化;而基因沉默株O sC tBP-A基因表达量显著下降,苗期根系发育迟缓,抗旱性明显降低,抗病性减弱。表明O sC tBP-A基因的表达可能对水稻苗期根系发育、抗旱性和抗病性具有不同程度的调控作用。 展开更多
关键词 OsCtBP-A 过量表达 rnai沉默 根系发育 抗性
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RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响
2
作者 段韬 顾应江 张彪 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第16期12-17,共6页
目的探讨RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响。方法分别构建3种靶向c-Met基因的短发卡RNA(sh RNA)序列,以脂质体转染的方式导入人脑胶质瘤U251细胞,并筛选出稳定表达的细胞株。采用PCR和Western blot检测c-Met-... 目的探讨RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响。方法分别构建3种靶向c-Met基因的短发卡RNA(sh RNA)序列,以脂质体转染的方式导入人脑胶质瘤U251细胞,并筛选出稳定表达的细胞株。采用PCR和Western blot检测c-Met-sh RNA转染后U251细胞c-Met的表达情况,以筛选出可有效沉默c-Met基因的sh RNA。c-Met基因沉默后,采用MTT法和流式细胞术检测U521细胞增殖情况,采用Transwell法和细胞划痕实验检测U251细胞侵袭和迁移情况,采用裸鼠荷瘤实验研究U251细胞体内成瘤性。结果成功构建可有效沉默c-Met基因的c-Met-sh RNA1。沉默c-Met后,c-Met m RNA以及蛋白的表达均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);而且可明显抑制U251细胞的增殖、侵袭、迁移以及体内成瘤能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RNAi沉默c-Met基因可有效抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭、迁移以及体内成瘤能力。 展开更多
关键词 rnai沉默 C-MET 人脑胶质瘤U251细胞
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RNAi沉默p53基因对HeLa细胞核转录因子3表达及其对细胞增殖和侵袭能力的影响
3
作者 李慧英 李洋 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2017年第1期46-50,共5页
目的:探讨RNAi沉默p53基因对宫颈癌HeLa细胞核转录因子3(STAT3)的表达,及对HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:构建3种靶向p53基因的shRNA1~3序列,并转染HeLa细胞,采用逆转录PCR和Western blot检测细胞p53 mRNA和蛋白的表达,以筛选有... 目的:探讨RNAi沉默p53基因对宫颈癌HeLa细胞核转录因子3(STAT3)的表达,及对HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:构建3种靶向p53基因的shRNA1~3序列,并转染HeLa细胞,采用逆转录PCR和Western blot检测细胞p53 mRNA和蛋白的表达,以筛选有效沉默p53的shRNA序列。将筛选的序列转染HeLa细胞后,采用逆转录PCR和Western blot检测STAT3 mRNA和蛋白的表达;采用四甲基噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖;采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果:构建的3种p53-shRNA均可沉默宫颈癌HeLa细胞p53的表达,尤以shRNA3的沉默效果最好,转染shRNA3后,HeLa细胞p53 mRNA和蛋白的表达量分别为0.23±0.05和0.41±0.11,显著低于未转染组、空质粒组、p53-shRNA1组和p53-shRNA2组(P均<0.05),故后续试验均以shRNA3转染HeLa细胞。将shRNA3序列转染HeLa细胞沉默p53基因后,p53-shRNA3组STAT3mRNA和蛋白表达量分别为1.09±0.21和1.46±0.25,显著高于未转染组(0.53±0.10和10.74±0.14)及空质粒组(0.55±0.11和0.73±0.15)(P均<0.05)。MTT法分析结果显示,在孵育74、36、48和72h时,p53-shRNA3组HeLa细胞增殖能力均显著大于未转染组和空质粒组(P均<0.05)。Transwell法分析结果显示,转染12 h后p53-shRNA3组穿膜细胞数目(59.36±5.33)显著高于未转染组(15.73±1.29)和空质粒组(16.01±1.34)(P均<0.05)。结论:RNAi沉默p53基因能够上调宫颈癌HeLa细胞STAT3的表达,并促进细胞的增殖及侵袭能力。 展开更多
关键词 rnai沉默 P53 HELA细胞 核转录因子3 增殖 侵袭
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玉米大斑病菌StSte12基因对H_2O_2氧化胁迫的应激调节
4
作者 张运峰 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期144-149,共6页
通过比较野生型菌株Wt01-23与StSte12基因RNAi沉默突变体菌株StRNAi9-10和StRNAi3-6在H_2O_2胁迫下生长和发育方面的差异,分析转录因子基因StSte12对玉米大斑病菌氧化胁迫的调节能力。在不同浓度H_2O_2胁迫条件下,测定野生型菌株和突变... 通过比较野生型菌株Wt01-23与StSte12基因RNAi沉默突变体菌株StRNAi9-10和StRNAi3-6在H_2O_2胁迫下生长和发育方面的差异,分析转录因子基因StSte12对玉米大斑病菌氧化胁迫的调节能力。在不同浓度H_2O_2胁迫条件下,测定野生型菌株和突变体菌株的菌落生长速度、菌丝形态、产孢量和菌丝萌发率。结果表明,随着H_2O_2浓度的增加,玉米大斑病菌野生型菌株和突变体菌株的菌落生长速度、产孢量和菌丝萌发率均显著降低,但突变体菌株的降低程度显著高于野生型菌株,表明StSte12基因对玉米大斑病菌的氧化应激调节具有重要的调控功能。 展开更多
关键词 玉米 氧化应激调节 大斑病菌 StSte12基因 rnai沉默突变体
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RNAi介导SMV-P3基因沉默增强大豆对花叶病毒病的抗性 被引量：5
5
作者 杨向东 牛陆 +6 位作者 张伟 杨静 杜茜 邢国杰 郭东全 李启云 董英山 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1647-1655,共9页
大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus,SMV）病是我国各大豆主产区最重要的病害之一,严重影响大豆产量和籽粒外观品质。培育抗病品种是防治该病害最经济有效的措施。本研究基于植物介导RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术,将编码参与... 大豆花叶病毒（Soybean mosaic virus,SMV）病是我国各大豆主产区最重要的病害之一,严重影响大豆产量和籽粒外观品质。培育抗病品种是防治该病害最经济有效的措施。本研究基于植物介导RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术,将编码参与SMV运动和影响宿主域范围的P3蛋白基因RNAi片段导入栽培大豆品种,研究RNAi介导SMV-P3基因沉默对大豆抗SMV的影响。Southern杂交检测结果表明,外源RNAi片段以低拷贝的形式（1~4个）整合至大豆基因组中。对T_1~T_3代转基因大豆喷施除草剂和PCR鉴定结果表明,外源T_-DNA插入片段在转基因大豆不同代际间能够稳定遗传。对T_2和T_3代转基因大豆接种SMV鉴定结果表明,转基因大豆对我国大豆产区主要流行SMV株系SC-3较非转基因对照受体品种Williams 82和SN9的抗性水平显著提高,病情指数降低至4.37~18.51,且抗性能够稳定遗传。综上所述,RNAi介导SM-P3基因沉默能够显著提高转基因大豆对SMV的抗性水平。 展开更多
关键词 大豆 大豆花叶病毒病 SMV-P3 rnai介导基因沉默
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互作蛋白Nbnrp1参与真菌蛋白激发子PevD1诱导烟草抗病性的功能研究 被引量：1
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作者 崔仕春 唐小丽 +1 位作者 邱德文 杨秀芬 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期92-100,共9页
Pev D1是大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)分泌的蛋白激发子,能引起烟草细胞坏死、免疫防御反应和系统抗病性。本实验室前期鉴定了Pev D1的一个互作蛋白Nbnrp1,本研究在此基础上,分析了Nbnrp1在烟草中的表达特征及其亚细胞定位。用RNA... Pev D1是大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)分泌的蛋白激发子,能引起烟草细胞坏死、免疫防御反应和系统抗病性。本实验室前期鉴定了Pev D1的一个互作蛋白Nbnrp1,本研究在此基础上,分析了Nbnrp1在烟草中的表达特征及其亚细胞定位。用RNAi技术获得了Nbnrp1基因沉默株,研究了互作蛋白Nbnrp1在Pev D1诱导烟草抗病性中的功能。结果表明,Nbnrp1在烟草根、茎和叶以及不同生长发育阶段均有表达,定位在烟草细胞核和细胞质中。与野生型植株比较,Nbnrp1沉默植株对Pev D1诱导的细胞坏死反应的程度降低,抗病性减弱,抗病基因PR1-a,PR1-b转录表达水平降低,说明Nbnrp1蛋白参与了蛋白激发子Pev D1诱导的烟草免疫反应和系统抗病性。研究结果为进一步揭示Pev D1诱导烟草抗病机制以及大丽轮枝菌与寄主互作机制奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白激发子PevD1 互作蛋白Nbnrp1 rnai基因沉默 抗病性
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siRNA检测芯片：RNAi基因沉默新技术
7
《生物加工过程》 CAS CSCD 2004年第3期72-72,共1页
关键词 分子生物学 基因芯片 RNA干扰 rnai基因沉默 核糖核酸
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