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O型口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1的可溶表达及抗原活性鉴定
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作者 王闰年 张纯 +5 位作者 吴佳奇 张耀 张宇翔 张路瑶 余蓉 刘永东 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期472-479,共8页
口蹄疫(Foot-and-mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth Disease Virus,FMDV)引起的急性、高度传染性疾病,一旦大规模爆发会给畜牧业造成巨大的经济损失。接种灭活病毒疫苗是目前防控口蹄疫的最有效手段,但传统灭活疫苗存... 口蹄疫(Foot-and-mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth Disease Virus,FMDV)引起的急性、高度传染性疾病,一旦大规模爆发会给畜牧业造成巨大的经济损失。接种灭活病毒疫苗是目前防控口蹄疫的最有效手段,但传统灭活疫苗存在病毒逃逸、生产成本高等诸多局限。重组亚单位蛋白疫苗免疫原性好且安全性高,是发展新型口蹄疫疫苗的重要方向。口蹄疫病毒结构蛋白VP1因含主要抗原表位,而成为口蹄疫亚单位疫苗及诊断试剂的开发热点。与真核系统相比,原核表达系统生产周期短、易于放大生产、成本低廉,更适于动物疫苗的开发,但VP1采用原核系统表达会形成无活性的不溶包涵体。本工作中首次同时融合小分子泛素相关修饰物(Small Ubiquitin-related Modifier,SUMO)和RNA作用结构域(RNA-interacting Domain,RID)两种助溶标签来实现FMDV VP1(O型/MYA/98)在原核系统中的高效可溶表达。首先采用PCR(聚合酶链反应)重叠技术,以p ET-28a(+)为载体构建了RID-SUMO-VP1重组质粒,将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3),在18℃下通过1 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导4 h后,融合蛋白RID-SUMO-VP1高效表达,可溶表达比例达79%,而融合SUMO或RID单一标签的VP1仍主要表达为不溶的包涵体。然后采用硫酸铵两步沉淀法对工程菌的破碎上清进行纯化,得到纯度为93%的RID-SUMO-VP1,酶联免疫吸附测定(ELISA)实验表明其能够与O型FMDV阳性小鼠血清反应。研究结果表明,采用RID及SUMO双标签融合策略能极大提高VP1在原核系统中的可溶表达效率,且表达的VP1具备良好的抗原性,这为开发新型FMDV免疫诊断试剂和安全高效的亚单位疫苗奠定了良好基础。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 结构蛋白VP1 小分子泛素相关修饰物(SUMO) rna作用结构域(rid) 可溶表达 免疫反应
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