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拟南芥AtGrp7 RRM结构域的纯化及其结构与结合的初步分析(英文)
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作者 迟秀娟 乔晓亚 +4 位作者 刘颖 刘惠丽 陈雷 王际辉 艾选军 《波谱学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期1-14,共14页
富含甘氨酸的RNA结合蛋白AtGrp7是拟南芥(Arabidopsis thaliana)调节生物钟负反馈回路的组分.在使用常规方法纯化AtGrp7 RRM结构域的初始试验中,观察到烟草蚀纹病毒(TEV)酶切后AtGrp7 RNA识别基序(RRM)结构域的紫外吸收峰为蛋白和杂质... 富含甘氨酸的RNA结合蛋白AtGrp7是拟南芥(Arabidopsis thaliana)调节生物钟负反馈回路的组分.在使用常规方法纯化AtGrp7 RRM结构域的初始试验中,观察到烟草蚀纹病毒(TEV)酶切后AtGrp7 RNA识别基序(RRM)结构域的紫外吸收峰为蛋白和杂质的混合信号峰.为解决常规纯化中的杂质问题,对AtGrp7_(1-90)应用了变性-复性两步纯化方法. AtGrp7 RRM结构域的~1H-^(15)N HSQC指纹谱和CS-Rosetta模型结构表明快速稀释重折叠后其结构完全恢复.等温滴定量热法(ITC)和核磁共振(NMR)滴定实验进一步证实,重折叠后AtGrp7_(1-90) RRM结构域具有正确结合RNA/DNA的功能. 展开更多
关键词 变性-复性 快速稀释 核磁共振(NMR) AtGrp7 rna识别基序(rrm)结构域 结合分析
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