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RNA干涉与基因沉默 被引量：39
1
作者 汤富酬 薛友纺 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期167-172,共6页
：双链RNA介导的遗传干涉的机制是1998年发现的。它通过双链RNA的介导特异性地降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默。到目前为止在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水螅、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等真核生物中都发现存在这一... ：双链RNA介导的遗传干涉的机制是1998年发现的。它通过双链RNA的介导特异性地降解相应序列的mRNA，从而导致转录后水平的基因沉默。到目前为止在真菌、拟南芥、线虫、锥虫、水螅、涡虫、果蝇、斑马鱼、小鼠等真核生物中都发现存在这一基因沉默机制。目前的研究表明，RNA干涉与植物中的共抑制（cosuppression）、真菌中的基因压制（quelling）很可能具有共同的基本分子机制。这也说明，很可能在进化的很早期阶段，生物就获得了这种机制。RNA干涉对于抵抗病毒入侵、抑制转座子活动等具有重要作用，对于生物体的发育和基因调控可能也有重要作用。 展开更多
关键词 rna干涉 双链rna 基因沉默 遗传干涉
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Waxy基因的RNA沉默使转基因小麦种子中直链淀粉含量下降(英文) 被引量：41
2
作者 李加瑞 赵伟 +4 位作者 李全梓 叶兴国 安宝燕 李祥 张宪省 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期846-854,共9页
通过RNAi策略转化小麦,以降低小麦种子中直链淀粉的含量。小麦中直链淀粉合成的关键酶是颗粒结合型淀粉合成酶(GranuleboundstarchsynthaseI,GBSSI,即WAXY蛋白),通过RTPCR方法从小麦种子中分离出Waxy基因。Southern杂交分析表明,在基因... 通过RNAi策略转化小麦,以降低小麦种子中直链淀粉的含量。小麦中直链淀粉合成的关键酶是颗粒结合型淀粉合成酶(GranuleboundstarchsynthaseI,GBSSI,即WAXY蛋白),通过RTPCR方法从小麦种子中分离出Waxy基因。Southern杂交分析表明,在基因组中存在3个Waxy基因。Northern杂交分析显示出在授粉后的小麦种子中检测到WaxymRNA。利用RNA沉默策略,将Waxy编码区683bp的正向和反向片段以及150bp内含子,连接于表达载体pCAMBIA3300中玉米ubi1启动子下游。以扬麦10号授粉后15d的幼胚为外植体,利用农杆菌介导的方法进行转化。通过PCR、RTPCR和叶片离体褪绿实验鉴定出4株转基因植株。小麦胚乳I2KI染色和直链淀粉含量测定表明这4株转基因植株直链淀粉含量明显下降。研究结果表明Waxy基因的RNA沉默使转基因小麦种子直链淀粉的含量下降。 展开更多
关键词 小麦 WAXY rna干涉 农杆菌介导的转化 直链淀粉
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RNA干涉的最新研究进展 被引量：31
3
作者 吴元明 陈苏民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期411-417,共7页
RNA干涉 (RNAi)是将双链RNA(dsRNA)导入细胞引起特异基因mRNA降解的一种细胞反应过程 .它是转录后基因沉默 (PTGS)的一种 .RNAi在生物界中广泛存在 .RNAi发生过程主要分为 3个阶段 :起始阶段 ,扩增阶段 ,效应阶段 .RNAi在维持基因组稳... RNA干涉 (RNAi)是将双链RNA(dsRNA)导入细胞引起特异基因mRNA降解的一种细胞反应过程 .它是转录后基因沉默 (PTGS)的一种 .RNAi在生物界中广泛存在 .RNAi发生过程主要分为 3个阶段 :起始阶段 ,扩增阶段 ,效应阶段 .RNAi在维持基因组稳定、保护基因组免受外源核酸侵入、基因表达调控等方面发挥重要生物学作用 .RNAi作为基因沉默的一个工具 ,已被广泛用于基因功能研究、基因治疗和新药研究与开发等方面 . 展开更多
关键词 rna干涉 基因功能 转录后基因沉默 基因治疗
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RNA干涉及其应用前景 被引量：20
4
作者 张利生 陈大元 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期341-344,共4页
RNA干涉是指由特定双链RNA(dsRNA)引起的转录后基因沉默现象。研究表明,Dicer断裂dsRNA产生的小干涉RNA可以抑制哺乳动物体细胞和胚胎中的基因的表达。RdRP在扩增RNAi中起着关键性的作用,RdRP活性复制较长的触发性dsRNA或以一种非引物... RNA干涉是指由特定双链RNA(dsRNA)引起的转录后基因沉默现象。研究表明,Dicer断裂dsRNA产生的小干涉RNA可以抑制哺乳动物体细胞和胚胎中的基因的表达。RdRP在扩增RNAi中起着关键性的作用,RdRP活性复制较长的触发性dsRNA或以一种非引物的方式复制短的siRNA,即以siRNA为引物的RdRP反应使靶mRNA转变为dsRNA,同时复制触发性dsRNA。所有的产物又可作为Dicer的底物,起始RdRP级联反应。本文综述了RNAi可能的作用机制,并对RNAi在分析功能基因组、药物治疗等方面的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 rna干涉 双链rna DSrna 转录 基因沉默 DICER酶 RdRP活性 功能基因组 作用机制 rnaI
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RNA干涉分子机制研究进展 被引量：15
5
作者 孙建国 廖荣霞 陈正堂 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第5期678-681,共4页
RNA干涉 (RNAinterference ,RNAi)是生物体内的一种通过双链RNA (dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制 .双链RNA与同源mRNA互补结合而使特定基因失活 ,这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示 .近... RNA干涉 (RNAinterference ,RNAi)是生物体内的一种通过双链RNA (dsRNA)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制 .双链RNA与同源mRNA互补结合而使特定基因失活 ,这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示 .近来研究表明 ,2 1～ 2 5nt的小干涉RNA (smallinterferenceRNA ,siRNA)可介导哺乳动物细胞特异性基因沉默 .RNAi具有高效性和高度特异性 。 展开更多
关键词 rna干涉 分子机制 研究进展 基因沉默
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基因功能的研究方法 被引量：12
6
作者 纪宗玲 刘继中 陈苏民 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期117-120,共4页
人类基因组计划的顺利进行使基因功能研究成为生命科学领域中的重大课题 ,基因转导、反义技术、转基因和基因剔除、染色体转导、RNA干涉等是目前研究基因功能的主要方法 ,新的技术不断涌现 。
关键词 基因功能 研究方法 基因转导 反义核苷酸 转基因 基因剔除 染色体转导 rna干涉
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水稻高效RNA干涉体系的建立及其功能分析 被引量：24
7
作者 彭昊 翟英 +8 位作者 张芊 张治国 宛淑艳 郭玉朋 吴金霞 孙学辉 孙颖 孙大业 路铁刚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1729-1735,共7页
【目的】在水稻中建立高效RNA干涉(RNAi)技术体系。【方法】构建适合水稻转化的RNAi诱导载体pCADS1341;为检测其有效性,使用它构建针对GUS基因的RNAi载体,并利用基因枪转化法导入GUS基因稳定表达的转基因水稻愈伤组织;为探讨影响水稻中... 【目的】在水稻中建立高效RNA干涉(RNAi)技术体系。【方法】构建适合水稻转化的RNAi诱导载体pCADS1341;为检测其有效性,使用它构建针对GUS基因的RNAi载体,并利用基因枪转化法导入GUS基因稳定表达的转基因水稻愈伤组织;为探讨影响水稻中转基因诱导的RNAi效率的因素,针对水稻基因AK121286进行系统的RNAi分析:通过Southern和Northern杂交从T0代RNAi植株中筛选出T-DNA为单拷贝插入,且基因的表达被高效抑制的株系,对来源于该株系的T1代植株进行半定量RT-PCR检测。【结果】GUS染色分析结果表明RNAi诱导元件的瞬时表达可显著抑制GUS基因的表达;RT-PCR结果表明RNAi效应可以遗传给后代,但是不同个体中的RNAi效率存在差异。【结论】RNAi系统的表达量可能是决定RNAi效率的最关键因素;本研究建立的高效RNAi技术体系对于水稻功能基因组学研究具有重要意义。 展开更多
关键词 rna干涉 T-DNA 水稻
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RNAi的抗病毒作用及其机制 被引量：14
8
作者 康洁 刘福林 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期439-440,F003,共3页
RNAi,指通过反义RNA与正链RNA形成双链RNA特异性地抑制靶基因表达的现象 ,是广泛存在于植物、线虫、果蝇、真菌和动物中的一种基因沉默机制 ,如同脊椎动物体内的免疫 ,能特异地抵抗病毒的感染。本文从转录水平、转录后水平、翻译水平上... RNAi,指通过反义RNA与正链RNA形成双链RNA特异性地抑制靶基因表达的现象 ,是广泛存在于植物、线虫、果蝇、真菌和动物中的一种基因沉默机制 ,如同脊椎动物体内的免疫 ,能特异地抵抗病毒的感染。本文从转录水平、转录后水平、翻译水平上阐述了RNAi的抗病毒作用机制 ,以及在抗病毒方面的研究进展和抗病毒感染的途径和方法 ,说明RNAi在基因水平上对机体的保护作用。由于RNAi具有高效性、特异性、易构性等特点 。 展开更多
关键词 rna干涉 小双链rna 抗病毒机制 特异效应
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miRNA^＊生物合成及其功能研究的新发现 被引量：23
9
作者 马圣运 白玉 +4 位作者 韩凝 王君晖 翁晓燕 边红武 朱睦元 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期383-388,共6页
miRNA*是在miRNA加工成熟过程中与其互补的大约22个核苷酸的RNA序列。传统观点认为miRNA*是miRNA生物合成中形成的没有功能的副产品。然而最近的研究发现miRNA*s与miRNA一样,主要介导转录后的基因调控网络;但不同的是,miRNA与Argonaute... miRNA*是在miRNA加工成熟过程中与其互补的大约22个核苷酸的RNA序列。传统观点认为miRNA*是miRNA生物合成中形成的没有功能的副产品。然而最近的研究发现miRNA*s与miRNA一样,主要介导转录后的基因调控网络;但不同的是,miRNA与Argonaute1蛋白(AGO1)结合形成RNA诱导的沉默复合体(RISC),而miRNA*却在AGO2的帮助下形成RISC复合体进行RNA干涉,这点与siRNA的作用方式类似。文章从miRNA*的生物合成、生物学特性和功能等方面综述了miRNA*最新研究进展。 展开更多
关键词 mirna＊ MIrna rna干涉 AGO miR/miR＊复合体
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茶树咖啡因合成酶基因RNA干涉表达载体构建 被引量：19
10
作者 张广辉 梁月荣 +1 位作者 陆建良 董俊杰 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期243-248,共6页
咖啡因合成酶(TCS)是茶树咖啡因生物合成途径中的一个关键酶,催化7-甲基黄嘌呤转变为可可碱和可可碱转变为咖啡因。抑制TCS基因表达是培育低咖啡因茶树的最有效途径。用RT-PCR方法扩增茶树TCS基因的两个cDNA片段,并克隆入T-载体中。干... 咖啡因合成酶(TCS)是茶树咖啡因生物合成途径中的一个关键酶,催化7-甲基黄嘌呤转变为可可碱和可可碱转变为咖啡因。抑制TCS基因表达是培育低咖啡因茶树的最有效途径。用RT-PCR方法扩增茶树TCS基因的两个cDNA片段,并克隆入T-载体中。干涉载体和TCS基因片段的T克隆经限制性内切酶两次双酶切与连接,将两个TCS基因片段分别反向重复插入到干涉载体pFGC5941,构建了TCS基因的RNA干涉载体,分别命名为pFGC5941-TCS02和pFGC5941-TCS03。经PCR和DNA测序获得验证。TCS基因RNA干涉载体的构建为培育低咖啡因茶树奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树 咖啡因合成酶基因 rna干涉 PCR
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hTERT双链RNA对肺癌细胞端粒酶的抑制作用 被引量：13
11
作者 田凤军 王智勇 +2 位作者 马俊义 赵云霞 卢炜 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期257-261,共5页
背景与目的:RNA干涉(RNAinterference,RNAi)是基因功能研究新技术,其机制是通过双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)与靶RNA结合并将其降解。本实验探讨dsRNA对肺癌细胞端粒酶逆转录酶组分(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)... 背景与目的:RNA干涉(RNAinterference,RNAi)是基因功能研究新技术,其机制是通过双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)与靶RNA结合并将其降解。本实验探讨dsRNA对肺癌细胞端粒酶逆转录酶组分(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)抑制的可能性和特异性,了解其对肺癌细胞增殖的影响,观察其是否对真核细胞有非特异杀伤作用,探讨其在肿瘤研究和治疗方面应用的可能性。方法:RT-PCR和PCR扩增hTERT基因两个外显子和一个内含子部分序列,采用正、反义cDNA链串联形式构建dsRNA真核表达载体,转染肺癌A549细胞。RT-PCR检测hTERTmRNA表达,Westernblot检测hTERT蛋白表达,TRAP法检测端粒酶活性,倒置显微镜观察细胞形态变化,绘制细胞生长曲线了解细胞增殖情况。结果:hTERT外显子的两段dsRNA作用肺癌A549细胞后,都表现出hTERT基因表达抑制、端粒酶活性下降、细胞增殖受到抑制,而且,dsRNA未引起细胞非特异死亡。结论:hTERTdsRNA能特异使hTERT基因沉默,对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞生长具有明显的抑制作用,有可能成为肺癌基因治疗的新方法。 展开更多
关键词 双链rna rna干涉 人端粒酶逆转录酶 肺肿瘤
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水稻穗发芽调控基因OsVP1的RNA干涉载体构建及遗传转化研究 被引量：21
12
作者 高永峰 刘继恺 +4 位作者 范晶 彭奕 黄科 张敦房 刘永胜 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期1321-1327,共7页
【目的】穗发芽是种子在收获前遇到阴雨潮湿环境时,在田间母体植株上发芽的现象,是水稻生产中的一个重要限制因素。水稻穗发芽的表现性状和玉米种子特异的viviparous1(vp1)突变体表型非常相似。VP1是种子成熟和休眠所必须的脱落酸信号... 【目的】穗发芽是种子在收获前遇到阴雨潮湿环境时,在田间母体植株上发芽的现象,是水稻生产中的一个重要限制因素。水稻穗发芽的表现性状和玉米种子特异的viviparous1(vp1)突变体表型非常相似。VP1是种子成熟和休眠所必须的脱落酸信号转导途径中的重要转录因子,因此利用转基因技术研究水稻同源基因OsVP1的生物学功能对有效控制杂交水稻穗发芽的发生和危害具有重要意义。【方法】将水稻OsVP1片段导入到植物表达载体pHB,构建OsVP1的RNA干涉植物表达载体pHB-OsVP1RNAi;通过根癌农杆菌介导转入水稻品种日本晴,并获得阳性植株。【结果】半定量RT-PCR分析显示,转基因植株胚中的OsVP1表达量明显低于野生型日本晴植株;萌发试验表明,转基因植株T1种子的萌发速率与野生型日本晴相比有明显的提高。并且在外加不同浓度的脱落酸(ABA)处理的溶液中,与野生型日本晴相比转基因种子萌发速率所受到的抑制较小;同时,在转基因植株T2新收获的稻穗的萌发试验表明,转基因的稻穗出现了明显的穗发芽现象。【结论】水稻OsVP1的RNA干涉能够提高种子的萌发速率以及诱发稻穗的穗发芽。 展开更多
关键词 OsVP1 rna干涉 农杆菌 水稻
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利用siRNA阻抑survivin基因表达诱导乳腺癌细胞系MCF-7细胞凋亡的研究(英文) 被引量：16
13
作者 李继霞 周克元 +1 位作者 梁统 张月飞 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第3期268-272,共5页
背景与目的:survivin属IAP基因家族成员,表达于多种肿瘤组织中,能促使细胞逃避凋亡,并促进细胞的异常有丝分裂。本研究旨在探讨敲除survivin基因后,癌细胞的增殖和凋亡情况。方法:利用RNAi阻抑人乳腺癌细胞内survivin基因的表达,RT-PCR... 背景与目的:survivin属IAP基因家族成员,表达于多种肿瘤组织中,能促使细胞逃避凋亡,并促进细胞的异常有丝分裂。本研究旨在探讨敲除survivin基因后,癌细胞的增殖和凋亡情况。方法:利用RNAi阻抑人乳腺癌细胞内survivin基因的表达,RT-PCR和Westernblot法分析survivin基因mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞生长增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:survivinsiRNA转染组,survivin基因表达水平与未转染组比较下调了64%。随着siRNA浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐增高,200nmol/L剂量组细胞增殖抑制率最高,可达60.9%。不同浓度的siRNA可不同程度地诱导细胞凋亡,200nmol/L剂量组凋亡率最高,可达29.0%。结论:survivinsiRNA有可能成为治疗乳腺癌的新药物。 展开更多
关键词 基因治疗 细胞凋亡 rna干涉 小干扰rna 乳腺肿瘤
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应用Gateway技术构建水稻OsDAD1基因的RNA干涉载体 被引量：16
14
作者 徐化学 熊建华 傅彬英 《分子植物育种》 CAS CSCD 2007年第1期133-136,共4页
近年来,RNA干涉广泛应用于植物基因功能研究。Gateway技术是通过采用多重载体高效构建目标基因及任何DNA片段克隆和表达载体的研究平台,该技术以λ噬菌体的位点特异性重组体系为基础,两端具有重组位点的DNA片段或目标基因可以非常容易... 近年来,RNA干涉广泛应用于植物基因功能研究。Gateway技术是通过采用多重载体高效构建目标基因及任何DNA片段克隆和表达载体的研究平台,该技术以λ噬菌体的位点特异性重组体系为基础,两端具有重组位点的DNA片段或目标基因可以非常容易地被重组克隆到含同源重组位点的载体上。这种以重组为基础的克隆体系目前已被广泛应用于分子生物学中来分析基因的功能。本文应用Gateway技术体系替代传统载体构建方法,构建了水稻基因OsDAD1的RNA干涉载体,从而证明了Gateway技术的可行性。 展开更多
关键词 rna干涉 载体 Gateway OsDAD1基因
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RNAi及其在植物遗传改良中的应用 被引量：18
15
作者 朱龙付 张献龙 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期472-477,共6页
RNAi(RNAinterfering)是由与靶基因同源的双链RNA引发的、在动植物中普遍存在的序列特异的转录后基因沉默。这种现象在动物、植物和真菌中广泛存在并被证实 ,因此可能是生物的发育调控及抗外源或内源侵染的一种普遍的生理机制。对RNAi... RNAi(RNAinterfering)是由与靶基因同源的双链RNA引发的、在动植物中普遍存在的序列特异的转录后基因沉默。这种现象在动物、植物和真菌中广泛存在并被证实 ,因此可能是生物的发育调控及抗外源或内源侵染的一种普遍的生理机制。对RNAi的研究是目前生物学领域研究的热点之一 ,近几年来该技术已经在功能基因组学、遗传学和医学等诸学科得到大量应用。本文将就RNAi的机制研究及其在植物遗传改良中的应用进行综述。 展开更多
关键词 rnaI 植物 遗传改良 基因沉默 rna干涉
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Livin异构体特异性基因沉默诱导肺腺癌SPC-A1细胞凋亡 被引量：11
16
作者 孙建国 廖荣霞 +3 位作者 陈正堂 王志新 张青 胡义德 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2005年第6期505-509,共5页
目的:利用基因转染和RNA干涉(RNAi)技术,在SPC-A1细胞中建立Livin异构体α和β特异的基因沉默体系,探讨其在诱导SPC-A1细胞凋亡效应中的不同作用及价值。方法:在肺腺癌SPC-A1细胞中稳定表达Livinα+β、Livinα和Livinβ特异性小干涉RNA... 目的:利用基因转染和RNA干涉(RNAi)技术,在SPC-A1细胞中建立Livin异构体α和β特异的基因沉默体系,探讨其在诱导SPC-A1细胞凋亡效应中的不同作用及价值。方法:在肺腺癌SPC-A1细胞中稳定表达Livinα+β、Livinα和Livinβ特异性小干涉RNA(siRNA),观察SPC-A1细胞形态、增殖等生物学行为的改变,TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:Livinα+β、Livinα和Livinβ基因沉默后,SPC-A1细胞克隆形成能力较对照组显著下降(P<0.05);转染后SPC-A1细胞发生凋亡,TUNEL法显示细胞凋亡指数分别为(9.20±1.90)%、(6.75±1.20)%和(4.82±1.20)%,(流式细胞仪检测)细胞凋亡率分别为(7.48±1.30)%、(5.50±0.90)%和(4.16±0.70)%。结论:Livinα和β两种异构体均能作为诱导肺癌细胞凋亡的分子靶点,Livin基因沉默靶向诱导肺癌细胞凋亡可能作为手术、化疗、放疗等传统治疗的辅助手段。 展开更多
关键词 凋亡抑制蛋白 LIVIN 凋亡 基因沉默 rna干涉 非小细胞肺癌
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植物RNA干涉载体的构建及其在水稻基因表达沉默中的应用 被引量：17
17
作者 胡旭霞 刘耀光 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第5期621-626,共6页
为了方便利用RNA干涉(RNAinterference,RNAi)研究植物基因的功能,本研究构建了2个用于RNAi的植物转化载体pRNAi-35S和pRNAi-Ubi。这两个载体以pCAMBIA双元载体为骨架,含有2个多克隆位点区进行目的基因片段的正向和反向克隆,并分别由CAMV... 为了方便利用RNA干涉(RNAinterference,RNAi)研究植物基因的功能,本研究构建了2个用于RNAi的植物转化载体pRNAi-35S和pRNAi-Ubi。这两个载体以pCAMBIA双元载体为骨架,含有2个多克隆位点区进行目的基因片段的正向和反向克隆,并分别由CAMV35S启动子和玉米泛素基因启动子控制发夹结构RNA的产生。为了验证该载体的有效性,用PCR扩增了1个水稻转录因子(ArabidopsisAP2/EREBP同源基因)基因片段组装入pRNAi-Ubi,转化水稻获得转化体。在所检测的7株转化株中,5株的内源目标基因的mRNA被降低至RNAblot检测不到的水平。这些结果说明本研究构建的RNAi载体对基因表达沉默是有效的。 展开更多
关键词 基因功能 rna干涉 转录因子 水稻
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MAPK级联途径在植物信号转导中的研究进展 被引量：11
18
作者 陈娅斐 冯斌 +2 位作者 赵小明 白雪芳 杜昱光 《植物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期357-365,共9页
促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)在植物的胁迫反应应答方面占有重要地位。本文就MAPK的基本组成、分类、激发子和两种可能的机理的最新进展作了综述。并介绍了近年来此领域中的研究方法,包括MAPK活性测定的... 促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)在植物的胁迫反应应答方面占有重要地位。本文就MAPK的基本组成、分类、激发子和两种可能的机理的最新进展作了综述。并介绍了近年来此领域中的研究方法,包括MAPK活性测定的方法、免疫沉淀法、酵母双杂交、基因突变、RNA干涉和网络模式法。 展开更多
关键词 MAPK级联途径 研究进展 信号转导 植物 促分裂原活化蛋白激酶 免疫沉淀法 酵母双杂交 rna干涉 胁迫反应 基本组成 研究方法 活性测定 基因突变 激发子 模式法
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基于DNA载体的RNAi抑制家蚕核型多角体病毒复制 被引量：12
19
作者 薛仁宇 曹广力 +3 位作者 王崇龙 沈卫德 魏育红 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期362-367,共6页
基于DNA载体的RNA i技术可以较长时间高效地抑制基因的活性。利用家蚕核型多角体病毒ie-1基因启动子,构建了在细胞内能转录形成与ie-1基因+19^+446区域互补同源的发夹状dsRNA的RNA i DNA载体。研究结果表明,该载体DNA在体外、体内均能... 基于DNA载体的RNA i技术可以较长时间高效地抑制基因的活性。利用家蚕核型多角体病毒ie-1基因启动子,构建了在细胞内能转录形成与ie-1基因+19^+446区域互补同源的发夹状dsRNA的RNA i DNA载体。研究结果表明,该载体DNA在体外、体内均能较好地抑制家蚕核型多角体病毒在细胞中的复制。 展开更多
关键词 DNA载体 rna干涉 家蚕核型多角体病毒 极早期基因
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siRNA抑制丙型肝炎病毒IRES介导的基因表达 被引量：12
20
作者 饶林 詹林盛 +1 位作者 彭剑淳 王全立 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期38-43,共6页
以HCVIRES为靶位 ,应用T7RNA多聚酶体外转录合成了 5条小干扰RNA(siRNA) .脂质体转染法将其导入HCVIRES介导萤光素酶表达的转基因细胞 (HepG2 .970 6 )中 ,通过测定萤光素酶的量 ,评价T7siRNA对HCV介导基因表达的抑制作用 .结果表明 ,... 以HCVIRES为靶位 ,应用T7RNA多聚酶体外转录合成了 5条小干扰RNA(siRNA) .脂质体转染法将其导入HCVIRES介导萤光素酶表达的转基因细胞 (HepG2 .970 6 )中 ,通过测定萤光素酶的量 ,评价T7siRNA对HCV介导基因表达的抑制作用 .结果表明 ,所合成的 5条T7siRNAs ,均能特异性地抑制萤光素酶基因的表达 ,抑制率分别为 94 31%、80 0 1%、78 0 1%、80 33%、85 6 4% ,其中以靶向HCVIRES第二茎环结构的T7siRNA1抑制率最高 ,且对HCV基因的抑制作用有剂量依赖性 ,随T7siRNA1量的增加 ,抑制率逐渐增强 .siRNA抑制HCV基因的作用具有良好的特异性 ,改变其中 1个核苷酸即无显著抑制作用 . 展开更多
关键词 rna干涉 T7 sirna 萤光素酶 内部核糖体进入位点 丙型肝炎病毒
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