转不可翻译PVY^N CP基因烟草的抗病性分析 被引量：8

1

作者 郭兴启 韩宏岩 +1 位作者 张杰道 王洪刚 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2003年第3期176-184,共9页

我们曾报道表达不可翻译PVY^N CP基因的转基因烟草抗病性是由RNA介导的,其抗病性类似于转录后的基因沉默(PTGS)。本研究以这类不同抗性的Tn代转基因烟草植株为材料,对自交后的T1代转基因植株的遗传和抗病性进行了分析,并选取部分T_1代... 我们曾报道表达不可翻译PVY^N CP基因的转基因烟草抗病性是由RNA介导的,其抗病性类似于转录后的基因沉默(PTGS)。本研究以这类不同抗性的Tn代转基因烟草植株为材料,对自交后的T1代转基因植株的遗传和抗病性进行了分析,并选取部分T_1代抗病株系自交留种。对T_2代RNA介导抗病性转基因植株进行了分子分析和一系列抗病性研究。结果表明,含1-2个转基因拷贝的T_0代感病植株,在T_1代中的Km抗性分离符合单位点插入的3∶1的遗传规律;含3个或3个以上转基因拷贝的T_0代中抗或高抗植株,在T_1代中的Km抗性分离符合多位点插入的15∶1或63∶1的遗传规律。大多数T_1、T_2代转基因植株的抗病性与转基因拷贝数成正相关,转基因在T_1、T_2代植株中能够转录表达,且转基因植株之间转基因mRNA在细胞质中的积累水平与转基因植株的抗病性成负相关。转基因植株的抗病性能够在T_1、T_2代中遗传,且T_2代转基因植株的抗病性具有以下特征:1)既抗病毒粒体又抗病毒RNA的侵染,且这种抗病性不受接种物剂量的影响;2)抗病谱较窄,只对PVY的某些株系具有高度抗病性;3)与传毒方式无关,既抗摩擦接种又抗带毒蚜虫接种;4)与植株的发育阶段没有关系。 展开更多

关键词 转基因烟草 遗传 抗病稳定性 rna介导病毒抗性

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CP基因3'端短片段介导的对马铃薯Y病毒的抗性 被引量：19

2

作者 竺晓平 朱常香 +3 位作者 宋云枝 温孚江 刘红梅 李向东 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期1153-1158,共6页

目的探明马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)CP基因3′端序列短片段的不同结构转基因诱导转基因植物产生RNA介导抗性的有效性。方法以PVYN的CP基因cDNA3′端202bp片段构建非翻译的正向重复和反向重复结构的植物表达载体转化烟草。结果攻毒试... 目的探明马铃薯Y病毒脉坏死株系(PVYN)CP基因3′端序列短片段的不同结构转基因诱导转基因植物产生RNA介导抗性的有效性。方法以PVYN的CP基因cDNA3′端202bp片段构建非翻译的正向重复和反向重复结构的植物表达载体转化烟草。结果攻毒试验表明前者没有一例转基因植株表现为抗病,而转化反向重复结构的转基因植株82.8%表现近似免疫的高度抗病型,Southern印迹杂交证明目的基因已整合到烟草基因组,Northern印迹杂交结果显示反向重复结构转基因植物的抗病性与RNA的表达量呈现负相关。结论抗病性是RNA介导的病毒抗性。3′端短片段诱导产生的转基因抗病株比例比5′端短片段诱导产生的高。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 rna介导的病毒抗性 DSrna rna沉默

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转基因植物中RNA介导的病毒抗性研究进展 被引量：15

3

作者 郭兴启 温孚江 朱常香 《生命科学》 CSCD 2000年第4期166-169,161,共5页

利用病毒核酸序列培育抗病毒的转基因植物是一个重要的抗病毒基因工程策略。虽然很多种病毒的不同核酸序列已被使用并证明转基因植物有不同程度的抗病毒效果，但其抗病机制大多不清楚。目前至少有两种明显不同的抗病机制类型：一种是要... 利用病毒核酸序列培育抗病毒的转基因植物是一个重要的抗病毒基因工程策略。虽然很多种病毒的不同核酸序列已被使用并证明转基因植物有不同程度的抗病毒效果，但其抗病机制大多不清楚。目前至少有两种明显不同的抗病机制类型：一种是要求病毒编码的蛋白质的表达；另一种是仅仅依靠转基因的RNA转录。本文综述了这种RNA介导的抗性特点、分子生物学、抗病机制，以及与共抑制的相似性，并对RNA介导的病毒抗性的意义加以讨论。 展开更多

关键词 转基因植物 rna介导的病毒抗性 共抑制

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利用RNA介导的抗病性获得抗2种病毒的转基因烟草 被引量：17

4

作者 白庆荣 朱俊华 +3 位作者 刘晓玲 朱常香 宋云枝 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期148-154,共7页

RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX... RNA介导的病毒抗性(RMVR)是近年发展起来的一种新的植物抗病毒基因工程策略,具有抗病性强、抗性持久、生物安全性高等特点。利用该策略培育多抗病毒植株具有广阔的应用前景和重要的实践意义。本研究将非翻译的马铃薯X病毒的衣壳蛋白(PVX-CP)基因和非翻译的马铃薯Y病毒的衣壳蛋白(PVY-CP)基因组成嵌合基因,构建植物表达载体pROKXY,利用农杆菌介导法转化烟草NC89,获得6株对PVX和PVY的混合侵染表现为免疫的转基因植株。分子分析表明,这种抗性为RNA介导的病毒抗性。这一研究结果为利用RMVR进行植物多抗病毒育种提供了重要数据和资料。 展开更多

关键词 rna介导的病毒抗性 马铃薯X病毒 马铃薯Y病毒坏死株系 嵌合基因 转基因烟草

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马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因和外壳蛋白基因介导的抗病性研究 被引量：9

5

作者 刘晓玲 宋云枝 +3 位作者 刘红梅 温孚江 朱常香 白庆荣 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期827-832,共6页

以马铃薯X病毒(potatovirusX,PVX)的RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法分别扩增出长度为681bp的非翻译马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因(PVX p25)和长度为714bp的非翻译马铃薯X病毒外壳蛋白基因(PVX CP)。并分别构建植物表达... 以马铃薯X病毒(potatovirusX,PVX)的RNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT PCR)方法分别扩增出长度为681bp的非翻译马铃薯X病毒25kD运动蛋白基因(PVX p25)和长度为714bp的非翻译马铃薯X病毒外壳蛋白基因(PVX CP)。并分别构建植物表达载体pROKⅡp25和pROKⅡCP。利用农杆菌介导方法转化烟草NC89。经卡那霉素筛选、PCR检测,共获得转非翻译PVX p25的转基因植株78株,转非翻译PVX CP的转基因植株83株。抗病性试验表明,转非翻译PVX p25的78株中有31株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为39.7%;转非翻译PVX CP的83株中有11株对PVX的侵染表现高度抗病,抗性比例为13.3%。分子生物学检测和抗病性分析表明,抗病性均为RNA介导的病毒抗性。研究结果初步证明,转非翻译PVX p25可以更有效地获得抗PVX转基因植株。 展开更多

关键词 马铃薯X病毒 运动蛋白 外壳蛋白 rna介导的病毒抗性

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hpRNA的茎环比例对RNA介导的病毒抗性产生的影响 被引量：7

6

作者 李云 宋云枝 +1 位作者 朱常香 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期468-477,共10页

以马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因3′端50bp片段为hpRNA的茎,以pUC19不同长度的序列为hpRNA的环,构建了茎环比例分别为4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4和1∶8的植物表达载体。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC... 以马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因3′端50bp片段为hpRNA的茎,以pUC19不同长度的序列为hpRNA的环,构建了茎环比例分别为4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4和1∶8的植物表达载体。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC89,获得了多种转基因植株。室内抗病性检测发现:不同茎环比例的hpRNA介导的病毒抗性效率不同;茎环比例为4∶1、2∶1和1∶1时效率较高,抗性植株的比例达60%左右;随着环长度的逐渐增加,抗性植株的比例逐渐降低;当茎环比例为1∶8时,抗性植株的比例仅为9.52%。Southern blot分析结果表明:外源基因已整合于烟草的基因组中,且转基因植株的抗病性与转基因的拷贝数之间无明显的相关性。Northern blot分析结果表明:目的片段转录产物的积累量与植株的抗病性呈负相关,证明所获得的抗病性是RNA介导的。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒坏死株系(PVY^N) rna介导的病毒抗性 HPrna 茎环比例

原文传递

植物中转录后基因沉默的启动、传导与抑制 被引量：7

7

作者 郭兴启 于大胜 +1 位作者 陈红 竺晓平 《生命科学研究》 CAS CSCD 2001年第z1期129-133,共5页

转录后基因沉默 (post-transcriptionalgenesilencing,PTGS)首次在转基因植物中被发现 ,后来在自然植物和其他生物中如动物、线虫、真菌等都有相关的报道 ,这表明PTGS是生物界中普遍存在的现象 .由于PTGS与植物中RNA介导的病毒抗性具有... 转录后基因沉默 (post-transcriptionalgenesilencing,PTGS)首次在转基因植物中被发现 ,后来在自然植物和其他生物中如动物、线虫、真菌等都有相关的报道 ,这表明PTGS是生物界中普遍存在的现象 .由于PTGS与植物中RNA介导的病毒抗性具有相似性 ,以及PTGS在植物基因组功能分析中的应用 ,因此 ,近年来PTGS在植物中特别是在转基因植物中得到了广泛的研究 .为了深入对PTGS进行研究 ,就植物中PTGS启动的因子、启动的机制 ,PTGS系统传导的信号物质。 展开更多

关键词 转录后基因沉默 植物病毒 传导信号 rna介导的病毒抗性

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马铃薯Y病毒HC-Pro、CI、NIb和CP基因介导的病毒抗性比较研究 被引量：7

8

作者 刘静 陈雪梅 +3 位作者 宋云枝 吴斌 朱常香 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期57-65,共9页

根据已克隆的马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的基因组序列设计引物,利用PCR扩增HC-Pro、CI、NIb和CP4个基因的3′端400bpcDNA区段,分别反向插入含有査尔酮合成酶基因(Chalcone synthase,CHS)内含子的双元载体pRCHS中,构建了含内含子的发夹结... 根据已克隆的马铃薯Y病毒坏死株系(PVYN)的基因组序列设计引物,利用PCR扩增HC-Pro、CI、NIb和CP4个基因的3′端400bpcDNA区段,分别反向插入含有査尔酮合成酶基因(Chalcone synthase,CHS)内含子的双元载体pRCHS中,构建了含内含子的发夹结构RNA(intron splicing hpRNA,ihpRNA)表达载体pRCHS-HC-Pro、pRCHS-CI、pRCHS-NIb和pRCHS-CP。利用农杆菌介导法转化烟草品种NC89,获得了多种转基因植株。病毒抗性检测的结果显示:转pRCHS-HC-Pro、pRCHS-CI、pRCHS-NIb和pRCHS-CP的烟草中,抗性植株的比例分别为55.34%、73.69%、61.54%和84.21%。大分子RNA和siRNA的Northern blot分析表明,目的片段转录产物的积累量与转基因植株的抗病性呈负相关,转基因植株中可检测到siRNA,说明所获得的抗病性是RNA沉默介导的。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 rna介导的病毒抗性 ihprna表达载体

原文传递

马铃薯Y病毒复制酶基因不同位置cDNA区段介导对PVY的不同抗性 被引量：7

9

作者 徐丽 宋云枝 +2 位作者 王文俊 朱常香 温孚江 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期227-233,共7页

为探究靶序列位置对RNA介导的病毒抗性产生的影响，利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术扩增马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）复制酶基因（nuclear inclusion b，NIb）不同位置的cDNA区段，反向插入双元载体pR... 为探究靶序列位置对RNA介导的病毒抗性产生的影响，利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术扩增马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）复制酶基因（nuclear inclusion b，NIb）不同位置的cDNA区段，反向插入双元载体pROKII中，构建了发夹RNA（hairpin RNA，hpR—NA）结构的植物表达载体。将构建的植物表达载体采用冻融法转入农杆菌LBA4404，叶盘法转化烟草NC89，获得转基因植株。攻毒试验表明：PVYNIb基因不同位置cDNA区段介导的对PVY的抗性存在显著差异；3’端1／2处和中间位置的序列可介导高水平的病毒抗性，抗性植株的比例在50％以上，而5‘端、5’端1／2处和3’端的序列介导的抗性效率较低，抗性植株的比例仅为10％～30％。Northern杂交显示：抗病植株中RNA的积累量明显低于同类型的感病植株，抗性与RNA积累量呈负相关；抗病转基因植株中有siRNA存在，表明病毒抗性是由RNA介导的。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 复制酶基因 rna介导的病毒抗性

原文传递

基因沉默番木瓜环斑病毒复制酶基因(PRSV-Nib)获得抗病毒病番木瓜的研究

10

作者 吴清铧 贾瑞宗 +5 位作者 郭静远 杨牧之 胡玉娟 郝志刚 赵辉 郭安平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期837-846,共10页

番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistanc... 番木瓜是重要的热带经济水果。番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)是番木瓜的重要病毒病,经常导致严重的产量损失和质量恶化。自从1998年第一例转基因番木瓜问世以来,使得基于“致病菌衍生的抗病性(pathogen-derived resistance,PDR)”的抗病育种策略获得成功广泛应用。然而依赖于序列同源性的抗病性与病毒突变导致多样性增加之间的矛盾成为番木瓜育种科学家的新挑战。本研究拟采用RNAi策略针对复制酶(nuclear inclusion b.Nib)获得广谱抗PRSV番木瓜新种质。通过团队已建立的胚性愈伤诱导-农杆菌介导转化-再生苗诱导的番木瓜遗传转化体系,共获得经过抗性筛选的再生苗52株,通过特异性PCR进行筛选共计获得24株转基因阳性植株。通过对T0代田间自然发病试验中,转基因番木瓜株系抗病性明显高于非转基因对照,其中NibB5-2田间抗病性最优。通过hiTAIL-PCR方法确定NibB5-2插入位点位于第2号染色体supercontig_30的1976766的位置。T1代接种试验中,无病毒积累且无发病症状,初步确认具有良好的病毒抗性,为番木瓜抗病育种提供新思路。 展开更多

关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 Nib基因 rna介导的病毒抗性

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利用人工ta-siRNA策略培育抗PVY烟草 被引量：1

11

作者 吴斌 姜珊珊 +3 位作者 张眉 徐德坤 辛志梅 王升吉 《山东农业科学》 2018年第12期86-90,共5页

人工ta-siRNA基因沉默技术具有同时表达多个ta-siRNA和产生ta-siRNA位置固定等特点,在精确性和高效性等方面有明显优势。本研究以马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)外壳蛋白(coat protein,CP)为靶基因,选取不同位置的3个siRNA为靶序列,烟... 人工ta-siRNA基因沉默技术具有同时表达多个ta-siRNA和产生ta-siRNA位置固定等特点,在精确性和高效性等方面有明显优势。本研究以马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)外壳蛋白(coat protein,CP)为靶基因,选取不同位置的3个siRNA为靶序列,烟草TAS3a作为ta-siRNA表达的骨架,分别构建植物表达载体PVY-CP5'、PVY-CPM和PVY-CP3',并利用叶盘法转化烟草NC89。瞬时表达检测结果显示,3个syn-tasiRNA植物表达载体均能在植物体内成功表达siRNA;抗病性鉴定发现,转PVY-CP5'、PVY-CPM和PVY-CP3'的转基因株系中抗病株系的比率分别为45. 08%、27. 21%、61. 90%;Northern杂交分析显示,目的片段转录产物(总RNA)的积累量与植株的抗病性呈负相关,转基因植株中均有siRNA存在,表明植株的病毒抗性是由RNA介导的。 展开更多

关键词 人工ta-sirna 马铃薯Y病毒(PVY) rna介导的病毒抗性 转基因烟草

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RNA介导的病毒抗性在转基因烟草中的遗传分析 被引量：13

12

作者 朱常香 刘红梅 +1 位作者 宋云枝 温孚江 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期94-103,共10页

以含非翻译马铃薯Y病毒外壳蛋白 (PVY MCP)基因的抗病和感病T0 代转基因烟草为材料 ,对转基因及RNA介导的病毒抗性在T1～T4代转基因植株中的遗传进行了研究。结果表明 ,在含低拷贝 (1～ 2个 )转基因的感病植株后代中 ,转基因是作为一个... 以含非翻译马铃薯Y病毒外壳蛋白 (PVY MCP)基因的抗病和感病T0 代转基因烟草为材料 ,对转基因及RNA介导的病毒抗性在T1～T4代转基因植株中的遗传进行了研究。结果表明 ,在含低拷贝 (1～ 2个 )转基因的感病植株后代中 ,转基因是作为一个单显性遗传位点 ,遵循孟德尔遗传分离规律 ,各世代转基因植株仍表现感病。含多拷贝 (4～ 6个 )转基因的抗病植株 ,转基因在T1代的分离虽符合多位点插入的 15∶1和 6 3∶1遗传规律 ,但转基因发生了重排 ,RNA介导的病毒抗性表现为不稳定遗传。从含多拷贝转基因的抗病植株的T1代株系中 ,分离获得了两株含 2个拷贝转基因的抗病植株 ;其后代中 ,转基因及抗性遗传遵循孟德尔遗传分离规律 ,可稳定遗传和表达 ,获得纯合的抗病转基因株系。对转基因在不同抗病类型植株中整合方式分析显示 。 展开更多

关键词 rna介导的病毒抗性的遗传 马铃薯Y病毒 转基因烟草 转基因整合方式

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