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抗水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的双价RNA沉默载体的构建 被引量：4
1
作者 徐秋芳 张金凤 +2 位作者 张晓霞 熊如意 周益军 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期290-295,共6页
为利用RNAi技术获取抗水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)植株,分别针对两种病毒的S6和S10基因构建RNA沉默载体。采用重组PCR方法将RBSDV S6基因片段(R6)和SRBSDVS6基因片段(SR6)进行融合,获得600 bp的R6-SR6融合基... 为利用RNAi技术获取抗水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)植株,分别针对两种病毒的S6和S10基因构建RNA沉默载体。采用重组PCR方法将RBSDV S6基因片段(R6)和SRBSDVS6基因片段(SR6)进行融合,获得600 bp的R6-SR6融合基因;将RBSDV S10基因片段(R10)和SRBSDV S10基因片段(SR10)进行融合,获得600 bp的R10-SR10融合基因。融合基因以反向重复的方式连入pBS载体,并定向插入到pCAMBIA1301载体上,获取了含有发夹结构的植物表达载体pCAMBIA1301-hp(R6-SR6)和pCAMBIA1301-hp(R10-SR10)。抗RBSDV和SRBSDV RNA沉默载体的构建为利用RNA沉默进行植物抗病毒研究奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻黑条矮缩病毒 南方水稻黑条矮缩病毒 重组PCR 融合基因 rna沉默载体
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番茄独脚金内酯合成关键基因CCD7、CCD8 RNA沉默载体的构建 被引量：3
2
作者 田芳 姚兆群 +2 位作者 陈美秀 徐瑛 赵思峰 《湖北农业科学》 2016年第21期5668-5671,共4页
根据已知的番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)CCD7和CCD8基因的序列设计特异性引物,采用RT-PCR克隆CCD7和CCD8基因片段,通过特定酶切将2个基因进行拼接,再将串联基因以反向重复的方式连入p UCCRNAi载体,并定向插入到p35植物表达载体... 根据已知的番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)CCD7和CCD8基因的序列设计特异性引物,采用RT-PCR克隆CCD7和CCD8基因片段,通过特定酶切将2个基因进行拼接,再将串联基因以反向重复的方式连入p UCCRNAi载体,并定向插入到p35植物表达载体上。结果表明,克隆获得了大小约为400 bp的CCD7和CCD8基因片段,基因片段拼接后获得800 bp左右的串联片段CCD7-8;将该基因片段插入p UCCRNAi载体后得到1 700 bp大小的含Intron的反向重复序列In-7-8,并成功插入到植物表达载体p35中,通过酶切分析,RNAi载体构建正确。最终成功构建了番茄CCD7和CCD8 2个串联基因的RNA沉默表达载体p35-In-7-8。 展开更多
关键词 番茄(Lycopersicon ESCULENTUM Mill.) 独脚金内酯 列当 类胡萝卜素裂解双加氧酶7(CCD7)和8(CCD8) rna沉默载体
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番木瓜环斑病毒CP基因dsRNA原核表达载体的快速构建 被引量：2
3
作者 陈瑶 沈文涛 +2 位作者 言普 黎小瑛 周鹏 《热带生物学报》 2011年第2期113-116,共4页
重点介绍了一种快速构建dsRNA原核表达载体的方法。以番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)3'端-279 bp保守区段为基础,通过OZ-LIC法构建861 bp,432 bp和279 bp 3种不同长度的发卡结构,再通过XhoⅠ和ClaⅠ双酶切,将其连接到pSP73原... 重点介绍了一种快速构建dsRNA原核表达载体的方法。以番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因(PRSV-CP)3'端-279 bp保守区段为基础,通过OZ-LIC法构建861 bp,432 bp和279 bp 3种不同长度的发卡结构,再通过XhoⅠ和ClaⅠ双酶切,将其连接到pSP73原核表达载体上,构建成PRSV-CP基因dsRNA原核表达载体。 展开更多
关键词 番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因 DSrna rna沉默 OZ-LIC法 原核表达载体
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TMV、CMV双价抗性RNA沉默表达载体的构建 被引量：2
4
作者 陈瑜欣 高玉龙 +1 位作者 丁灿 徐照丽 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第5期317-321,共5页
本研究以在植物体内转录出RNA沉默的高效诱导因子双链RNA(dsRNA)为目标,根据已报道的TMVΔMP和CMVΔRep的核苷酸序列设计特异性引物,分别从质粒pBIN-TMVΔMP(i/r)、pBIN-CMVΔRep(i/r)扩增MP基因、Rep基因,并在pGEM-TEasy载体上将2片段... 本研究以在植物体内转录出RNA沉默的高效诱导因子双链RNA(dsRNA)为目标,根据已报道的TMVΔMP和CMVΔRep的核苷酸序列设计特异性引物,分别从质粒pBIN-TMVΔMP(i/r)、pBIN-CMVΔRep(i/r)扩增MP基因、Rep基因,并在pGEM-TEasy载体上将2片段串联起来,再用PCR扩增串联好的正反向MP-Rep基因。正向MP-Rep基因用BamHI和KpnI切下,将所得基因片段与用同样酶切开的含内含子的pKAN-In相连,取名+pKAN;用同样的方法,将反向MP-Rep基因用XbaI切下,将所得基因片段与用同样酶切开的+pKAN相连,取名pKAN-In-MP-Rep,再用NotI将包括Intron和正反向MP-Rep基因在内的片段切下,将其定向插入同样酶切开的pART27上,获得重组质粒pART27-In-MP-Rep。获得的载体可以应用于植物转基因抗病毒育种工程中。 展开更多
关键词 rna沉默载体 烟草花叶病毒 黄瓜花叶病毒
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西瓜抗病毒RNAi植物表达载体的构建 被引量：2
5
作者 吴会杰 刘丽锋 +3 位作者 彭斌 田莉莉 田延平 古勤生 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期525-531,共7页
为了研究转化同一种病毒的不同基因在转基因西瓜中引发RNA沉默的效果以及利用RNA沉默培育抗多种病毒的策略,以pFGC5941为骨架质粒,分别构建了ZYMV cp、nib和Hc-Pro基因的反向重复植物表达载体pFIRZYMVCP、pFIRZYMVNIb和pFIRZYMVHc-Pro;... 为了研究转化同一种病毒的不同基因在转基因西瓜中引发RNA沉默的效果以及利用RNA沉默培育抗多种病毒的策略,以pFGC5941为骨架质粒,分别构建了ZYMV cp、nib和Hc-Pro基因的反向重复植物表达载体pFIRZYMVCP、pFIRZYMVNIb和pFIRZYMVHc-Pro;利用重叠延伸PCR的方法,首先构建了含有CMV cp、WMV cp和ZYMV cp部分基因片段的CWZ cp三价基因,采用该三价基因构建了CWZ cp基因的反向重复植物表达载体pFIRCWZ CP。研究首次在国际上构建了西瓜转基因抗病毒RNAi植物表达载体,为探讨RNA沉默在转基因抗病毒西瓜中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 西瓜 病毒病 rna沉默 植物表达载体
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dsRNA介导的抗ToMV和CMV植物表达载体的构建 被引量：1
6
作者 张伟 刘炜炜 +2 位作者 秦荣 张建云 黄家风 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1250-1255,共6页
[目的]构建通过表达dsRNA,诱导植物基因沉默机制可抗2种病毒的表达载体。[方法]根据已报道番茄花叶病毒(ToMV)的运动蛋白基因(MP)和黄瓜花叶病毒(CMV)的沉默抑制子基因(2b)的核苷酸序列设计特异性引物,扩增到部分△MP和2b基因;然后通过... [目的]构建通过表达dsRNA,诱导植物基因沉默机制可抗2种病毒的表达载体。[方法]根据已报道番茄花叶病毒(ToMV)的运动蛋白基因(MP)和黄瓜花叶病毒(CMV)的沉默抑制子基因(2b)的核苷酸序列设计特异性引物,扩增到部分△MP和2b基因;然后通过重组PCR技术将2个病毒基因进行融合,获得长度为676 bp的融合基因△MP-2b。再将融合基因以反向重复的方式与大豆内含子相连,并定向插入到植物表达载体pBIN438上35S启动子下游。[结果]构建了含两种不同病毒来源基因的植物表达载体pBIN438△MP-2b(i/r)。酶切和PCR鉴定证明所构建的载体与预期的设计完全一致。[结论]为利用RNA沉默原理进行植物广谱抗病研究奠定了基础。 展开更多
关键词 重组PCR 融合基因 rna沉默 载体构建 双价抗性
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