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LncRNA GAS5靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响 被引量:1
1
作者 赵勇 梁丽丽 江南 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2023年第8期744-751,共8页
目的:探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌(MTB)感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响。方法:qRT-PCR检测2019年3月31日至2022年3月31日在河南省商丘市胸科医院确诊的结核病患者75例... 目的:探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)靶向调控miR-144-3p对结核分枝杆菌(MTB)感染的巨噬细胞凋亡和炎性反应的影响。方法:qRT-PCR检测2019年3月31日至2022年3月31日在河南省商丘市胸科医院确诊的结核病患者75例、同期健康体检者75名血清中LncRNA GAS5、miR-144-3p水平;将巨噬细胞(160 nmol/L佛波酯诱导分化后的贴壁THP-1细胞)分为8组,即MTB组、MTB+pcDNA组、MTB+pcDNA-GAS5组、MTB+inhibitor NC组、MTB+miR-144-3p inhibitor组、MTB+pcDNA-GAS5+mimic NC组、MTB+pcDNA-GAS5+miR-144-3p mimic组,另取正常培养的巨噬细胞作为对照组(NC组)。检测巨噬细胞中LncRNA GAS5、miR-144-3p表达(qRT-PCR法)及细胞上清中炎性细胞因子水平(ELISA法);分别检测巨噬细胞增殖(CCK-8法)、凋亡(流式细胞术)及检测巨噬细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达(Western blot)水平;验证LncRNA GAS5与miR-144-3p的关系(双荧光素酶报告基因实验)。结果:结核病患者血清中LncRNA GAS5表达量为0.24±0.02,低于健康体检者(1.00±0.00);结核病患者血清中miR-144-3p表达量为2.35±0.12,高于健康体检者(1.00±0.00),差异均有统计学意义(t值分别为329.090、97.428,P值均<0.001)。MTB组LncRNA GAS5表达量为0.22±0.02、细胞凋亡能力为(3.84±0.24)%、Bax蛋白表达量为0.22±0.02,均低于NC组[1.00±0.00、(9.79±0.23)%、1.21±0.12],miR-144-3p表达量(2.46±0.13)、炎性细胞因子水平[γ-干扰素(IFN-γ):(212.26±9.65)pg/ml;白细胞介素-6(IL-6):(123.35±5.12)pg/ml;肿瘤坏死因子α(TNF-α):(325.58±12.28)pg/ml]、细胞增殖能力(1.45±0.14)及Bcl-2蛋白表达量(1.53±0.15),均高于NC组[1.00±0.00、(35.58±1.23)pg/ml、(25.46±1.18)pg/ml、(51.12±2.03)pg/ml、0.86±0.07、0.56±0.05],差异均有统计学意义(q值分别为41.205、73.979、36.403、31.876、61.384、66.990、81.580、13.484、22.943,P值均<0.001)。MTB+pcDNA-GAS5组LncRNA GAS5表达量(0.86±0.07)、细胞凋亡能 展开更多
关键词 rna探针 生长停滞特异性转录本5 分枝杆菌 结核 巨噬细胞
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鸡血管活性肠肽RNA探针制备及其在鸡肠Remak神经的原位杂交反应 被引量:4
2
作者 柳金雄 冯亚玫 +1 位作者 张晖 陈秋生 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期111-115,共5页
应用RT-PCR方法从鸡脑中扩增血管活性肠肽(VIP)基因片段,将其连接于pGM-T easy。分别利用pGM-T easy中T7和SP6启动子及其RNA聚合酶,以线性化的VIP/pGM-Teasy为模板转录合成正、反义DIG标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探... 应用RT-PCR方法从鸡脑中扩增血管活性肠肽(VIP)基因片段,将其连接于pGM-T easy。分别利用pGM-T easy中T7和SP6启动子及其RNA聚合酶,以线性化的VIP/pGM-Teasy为模板转录合成正、反义DIG标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探查VIP-mRNA在鸡肠Remak神经(INR)中的分布情况。结果表明,INR的神经元胞体中有VIP-mRNA的转录,且这种神经元数量众多;原位杂交阳性神经元胞体大部分是大型神经元细胞,呈圆形或椭圆形;阳性神经元胞体在INR神经节中呈层状或成群分布。INR的神经纤维呈弱阳性。在节间束也有少量的阳性细胞分布。本研究从基因水平证明INR中有VIP神经元存在。 展开更多
关键词 鸡肠Remak神经 血管活性肠肽(VIP) 原位杂交 rna探针
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鸡SP-mRNA探针制备及其在INR的杂交反应 被引量:3
3
作者 冯亚玫 柳金雄 +1 位作者 刘仪 陈秋生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期117-122,共6页
应用RT-PCR方法从鸡脑中扩增P物质(Substance P,SP)基因片段,将其连接于pGM-T质粒并转化大肠杆菌,挑取阳性克隆,测序鉴定为目的片段。分别利用pGM-T质粒中T7和SP6启动子及T7和SP6RNA聚合酶,以线性化的SP/pGM-T为模板转录合成正、反义DI... 应用RT-PCR方法从鸡脑中扩增P物质(Substance P,SP)基因片段,将其连接于pGM-T质粒并转化大肠杆菌,挑取阳性克隆,测序鉴定为目的片段。分别利用pGM-T质粒中T7和SP6启动子及T7和SP6RNA聚合酶,以线性化的SP/pGM-T为模板转录合成正、反义DIG标记RNA探针。通过原位杂交(in situhybridization histo-chemistry,ISHH)技术,用新合成的探针探查SP-mRNA在鸡肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)中的分布情况。结果表明,鸡INR中SP-mRNA阳性神经元数量众多,在空、回肠段和直肠段INR中的阳性细胞分别占总神经元的82.98%和98.01%。阳性细胞呈多突起的椭圆形或梭形,在INR神经节中较有规律地层状分布或成群出现,在神经节边缘分布更为密集,并且在节间束也有少量的阳性细胞分布。本研究从基因水平证明INR中大部分神经元有SP的mRNA转录,这些神经元作为外来的SP神经纤维可以支配到肠道和输卵管。 展开更多
关键词 肠Remak神经 P物质 rna探针 原位杂交
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辣椒轻斑驳病毒葫芦岛分离物RNA杂交检测体系的建立 被引量:3
4
作者 周涛 于曼 +2 位作者 张鑫宇 安梦楠 吴元华 《中国植保导刊》 北大核心 2018年第12期8-13,共6页
辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)可引起辣椒叶片以及果实的花叶和畸形症状,造成相当的经济损失。为了建立辣椒轻斑驳病毒的高特异性和灵敏度的分子检测体系,采用非放射性的化合物地高辛(DIG)标记检测PMMoV正义链的RNA探... 辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)可引起辣椒叶片以及果实的花叶和畸形症状,造成相当的经济损失。为了建立辣椒轻斑驳病毒的高特异性和灵敏度的分子检测体系,采用非放射性的化合物地高辛(DIG)标记检测PMMoV正义链的RNA探针,建立了该病毒Dot blot杂交和Northern blot杂交检测体系,并通过RT-PCR法验证了杂交体系的检测特异性。结果表明,RNA探针对PMMoV具有很高的检测特异性和灵敏度,适用于病毒的早期检测以及相关分子研究。 展开更多
关键词 辣椒轻斑驳病毒 特异性检测 DOT blot杂交 NORTHERN blot杂交 rna探针
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烟草花叶病毒辽宁分离物Northern杂交检测体系的建立 被引量:2
5
作者 李艳丽 安梦楠 +1 位作者 王冠中 吴元华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期137-142,共6页
为了建立烟草花叶病毒辽宁分离物(TMV-LN)的高特异性、高灵敏度的分子杂交检测体系,从粗提纯的TMV-LN粒子中提取RNA,设计特异性引物通过RT-PCR扩增TMV-LN的CP和3'端非翻译区域,将片段连至p UC119载体获得重组质粒p UCTMV-PP,体外转... 为了建立烟草花叶病毒辽宁分离物(TMV-LN)的高特异性、高灵敏度的分子杂交检测体系,从粗提纯的TMV-LN粒子中提取RNA,设计特异性引物通过RT-PCR扩增TMV-LN的CP和3'端非翻译区域,将片段连至p UC119载体获得重组质粒p UCTMV-PP,体外转录获得地高辛(DIG)标记的TMV-LN正义链RNA杂交检测探针,同时构建DNA检测探针作为对照。采用点印迹(Dot-blot)杂交和Northern杂交对比RNA探针和DNA探针对TMV-LN的检测特异性和灵敏性。检测结果表明,RNA探针和DNA探针在点印记杂交和Northern杂交中均表现出良好的检测特异性,RNA探针在检测灵敏度方面要略好于DNA探针,且点印迹杂交体系在病毒定性方面较为快捷,Northern杂交体系在病毒基因组RNA的定量方面具有明显优势。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒辽宁分离物 rna探针 DNA探针 点印迹杂交 NORTHERN杂交
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地高辛标记的小鼠β-1,4-半乳糖基转移酶RNA探针的制备和应用 被引量:1
6
作者 沈爱国 龚蕾蕾 +3 位作者 丁斐 严美娟 王汉洲 顾建新 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期365-368,共4页
为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- ... 为了制备小鼠 β-1,4-半乳糖基转移酶 ( β-1,4-galactosyltransferase ,β-1,4-Gal T- )地高辛标记的 RNA探针以探讨β-1,4-Gal T- m RNA在坐骨神经组织的表达定位 ,本研究用提取的小鼠脑总 RNA,采用 RT-PCR方法 ,得到β-1,4-Gal T- 的 DNA片断 ,将其克隆到 p GEM-T载体 ;采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ;运用点杂交的方法分析标记探针的灵敏度 ;最后应用该探针 ,通过原位杂交的方法 ,分析 β-1,4-Gal T- m RNA在小鼠坐骨神经的表达。结果 :构建了β-1,4-Gal T- /p GEM-T质粒 ,获得了高效价的地高辛标记的正、反义β-1,4-Gal T- RNA探针 ,应用该探针发现 β-1,4-Gal T- 在小鼠坐骨神经髓鞘中有表达。以上结果表明 ,制备的地高辛标记的正、反义 β-1,4-Gal T- RNA原位杂交探针可特异地检测β-1,4-Gal T- m RNA在组织中的表达。本研究为进一步分析β-1,4-Gal T- 在坐骨神经及其它神经组织发育和损伤过程中的表达奠定基础。 展开更多
关键词 地高辛标记 小鼠 β—1 4—半乳糖基转移酶I rna探针 rna原位杂交探针 RT—PCR
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KAI1 RNA探针的制备及其在胰腺癌中的应用 被引量:2
7
作者 徐建华 郭晓钟 +6 位作者 刘民培 邵晓冬 任丽楠 安天义沈阳军区总医院消化内科 王迪 李宏宇 赵佳钧 《胰腺病学》 2002年第3期159-161,共3页
目的 制备DIG标记KAIl RNA探针和分析KAIl基因在胰腺癌中的表达。方法 以线性KAIl基因DNA质粒为模板,采用体外转录法掺入DIG-11-UTP制备RNA探针,并通过化学发光法检测。应用该探针通过Northern blot对12例正常胰腺组织和30例原发性胰腺... 目的 制备DIG标记KAIl RNA探针和分析KAIl基因在胰腺癌中的表达。方法 以线性KAIl基因DNA质粒为模板,采用体外转录法掺入DIG-11-UTP制备RNA探针,并通过化学发光法检测。应用该探针通过Northern blot对12例正常胰腺组织和30例原发性胰腺癌组织中的KAIl基因mRNA进行分析。结果 该方法标记的KAIl RNA探针浓度为1 ug/μl时即可检测。Northern bolt分析发现25例无转移的胰腺癌中KAIl基因在2.4kb处存在明显的杂交信号,5例发生转移的晚期胰腺癌杂交信号较弱,正常胰腺组织中该基因的表达水平呈阴性或弱阳性。结论 本法标记的KAIl RNA探针灵敏度高,KAIl基因低表达与胰腺癌的转移有关。 展开更多
关键词 胰腺癌 KAI1基因 rna探针 制备
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生长抑素前体蛋白1和前脑啡肽原mRNA在鸡肠Remak神经中的分布 被引量:2
8
作者 柳金雄 冯亚枚 陈秋生 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第2期294-302,共9页
肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)是禽类特有的一根自主神经节链,但INR中肽类递质的分布至今仍然存在许多疑问。本文应用RT-PCR方法从鸡脑组织提取的RNA中扩增生长抑素前体蛋白1(Somatostatin precursor1,PSS1)和前脑啡肽原(... 肠Remak神经(Intestinal nerve of Remak,INR)是禽类特有的一根自主神经节链,但INR中肽类递质的分布至今仍然存在许多疑问。本文应用RT-PCR方法从鸡脑组织提取的RNA中扩增生长抑素前体蛋白1(Somatostatin precursor1,PSS1)和前脑啡肽原(Preproenkephalin,PPE)基因片段,将其连接于pGM-Teasy质粒,经过转化大肠杆菌、挑取阳性克隆和测序鉴定,确定为目的片段。分别以线性化的SS1/pGM-Teasy和PPE/pGM-Teasy质粒为模板,用体外转录的方法合成正反义地高辛标记RNA探针。通过原位杂交方法将合成的探针用于探查PPE和PSS1 mRNA在鸡空回肠段和直肠段INR中的分布情况。结果表明:INR中大部分神经细胞中有PPE和PSS1的mRNA的转录,其中PPE探针杂交阳性细胞在空回肠段和直肠段INR分别占83.79%±7.96%和96.04%±4.53%,而PSS1探针在空回肠段和直肠段INR中的杂交阳性细胞分别占86.98%±7.93%和86.07%±6.11%;在整个INR中都可能有PPE和PSS1 mRNA共存于同一神经细胞的现象;原位杂交阳性神经细胞胞体呈有突起的梭形或椭圆形,其纵轴与INR延伸的方向平行;阳性神经细胞胞体在INR神经节中呈层状或成群分布,在节间束也有少量的阳性细胞分布。本文从基因水平证明INR中大量神经细胞进行PPE或PSS1的mRNA的转录。 展开更多
关键词 鸡肠Remak神经 生长抑素前体蛋白1 前脑啡肽原 原位杂交 rna探针
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苏云金芽胞杆菌cryI基因探针的制备及质粒基因定位 被引量:1
9
作者 关雄 黄志鹏 高日霞 《福建农业大学学报》 CSCD 1996年第3期329-333,共5页
将pESI经EcoRI酶解后回收纯化的含有苏云金芽胞杆菌cryI基因高保守区的EcoRI-F片段重组到pSELECT-1的EcoRI位点,通过DIG体外标记转录制备高灵敏度、背景清楚的RNA探针,并利用该探针进行苏云... 将pESI经EcoRI酶解后回收纯化的含有苏云金芽胞杆菌cryI基因高保守区的EcoRI-F片段重组到pSELECT-1的EcoRI位点,通过DIG体外标记转录制备高灵敏度、背景清楚的RNA探针,并利用该探针进行苏云金芽胞杆菌8010杀虫基因定位.结果表明。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 cryI基因 rna探针 基因定位
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β-1,4半乳糖基转移酶-I在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化 被引量:2
10
作者 朱敏 沈爱国 +2 位作者 丁斐 顾建新 顾晓松 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2003年第3期317-322,共6页
目的 分析 β 1,4半乳糖基转移酶 I (β 1,4 galactosyltransferaseI,β 1,4 GalT I)mRNA在正常和损伤坐骨神经髓鞘上的定位及其表达变化。方法 采用RT PCR方法 ,分析 β 1,4 GalT I在小鼠坐骨神经中的表达水平。将RT PCR扩增的 ... 目的 分析 β 1,4半乳糖基转移酶 I (β 1,4 galactosyltransferaseI,β 1,4 GalT I)mRNA在正常和损伤坐骨神经髓鞘上的定位及其表达变化。方法 采用RT PCR方法 ,分析 β 1,4 GalT I在小鼠坐骨神经中的表达水平。将RT PCR扩增的 β 1,4 GalT I片段 ,克隆到pGEM T载体中。采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义 β 1,4 GalT IRNA探针。通过原位杂交及图像分析的方法 ,分析 β 1,4 GalT ImRNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的定位及其表达变化。结果 检测到 β 1,4 GalT I在大鼠坐骨神经的髓鞘中有表达 ,并在坐骨神经损伤后 1~ 2d内表达最高 ,随后表达下降。结论 提示 β 1,4 GalT I可能在周围神经最主要的胶质细胞—施万细胞中表达 ,并在周围神经损伤后发生表达变化 ,这样为进一步分析 β 1,4 GalT I在周围神经再生中的调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 β-1 4半乳糖基转移酶-Ⅰ 大鼠 坐骨神经损伤 rna探针 原位杂交 胶质细胞
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从果蝇染色体DNA制备RNA探针及其染色体原位杂交定位
11
作者 蔡平 王瑾瑛 +4 位作者 陈铁河 向正华 孟璘 王新民 李怀义 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 1993年第1期5-8,共4页
在相差显微镜下显微切割野生型黑腹果蝇唾液腺X染色体的1区片段,抽提该片段的DNA并与PGEM3Z质粒重组,然后转化到JM103 E.colt中,共切割12个染色体,抽提到大约10pgDNA,经重组、转化获得9个重组子。提取其中5个重组质粒分析其重组片段,2... 在相差显微镜下显微切割野生型黑腹果蝇唾液腺X染色体的1区片段,抽提该片段的DNA并与PGEM3Z质粒重组,然后转化到JM103 E.colt中,共切割12个染色体,抽提到大约10pgDNA,经重组、转化获得9个重组子。提取其中5个重组质粒分析其重组片段,2个约为0.6kb,另3个约为3.0kb。2个约为0.6kb重组片断用依赖DNA模板的SP6RNA聚合酶体外合成~3H标记的RNA,以此作探针进行染色体原位杂交定位,被克隆片段定位在果蝇唾液腺X染色体1E,1F位点上。本文结果表明重组到PGEM3Z质粒中染色体DNA可直接作为合成RNA探针的模板。 展开更多
关键词 rna探针 原位杂交 果蝇 DNA
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视黄酸对小鼠早期胚胎结构及0tx2基因表达的影响(英文)
12
作者 刘楚吾 G.VanMaele-Fabry +1 位作者 F.Clotman J.J.picard 《激光生物学报》 CAS CSCD 2000年第4期261-268,共8页
以全反式视黄酸 ( all trans-retinoic acid,AT-RA)体外处理 EB( early allantoic bud)期和 LB( lateallantoic acid)期的小鼠胚胎 ,然后用洋地黄毒苷 ( digoxigenin)标记的 0 tx2反意义 RNA探针对整体胚胎进行原位杂交。以 4× 1 0... 以全反式视黄酸 ( all trans-retinoic acid,AT-RA)体外处理 EB( early allantoic bud)期和 LB( lateallantoic acid)期的小鼠胚胎 ,然后用洋地黄毒苷 ( digoxigenin)标记的 0 tx2反意义 RNA探针对整体胚胎进行原位杂交。以 4× 1 0 - 6 mol/ l的 AT— RA处理 ,抑制或减少了胚胎的前肠形成 ,经处理的胚胎的头褶没有对照的那样明显向腹部突出 ,其神经沟也不整齐 ;经处理的 EB期胚胎 ,其 0 tx2表达范围剧烈地向前退缩或只有很微弱的表达 ;但以同样浓度处理 LB期胚胎时 ,与对照相比 ,0 tx2的表达除了在极少数胚胎中变得弱一些以外 。 展开更多
关键词 小鼠胚胎 原位杂交 rna探针 视黄酸
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应用RNA探针检测流感病毒特异性RNA
13
作者 金红 卜部匡司 飞田清毅 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期568-570,574,共4页
插入流感病毒A/Aichi(H3N2)NPcDNA的pBluescriptⅡSK+质粒,分别经XcmⅠ和BspMI线性化之后,以此为模板用T7和T3RNA多聚酶合成了同位素标记的正链和负链RNA探针。流感病毒在狗肾传... 插入流感病毒A/Aichi(H3N2)NPcDNA的pBluescriptⅡSK+质粒,分别经XcmⅠ和BspMI线性化之后,以此为模板用T7和T3RNA多聚酶合成了同位素标记的正链和负链RNA探针。流感病毒在狗肾传代细胞(MDCK)生长良好,而在其变异株MDCK-L细胞生长受阻。为了分析比较两种细胞中流感病毒基因复制情况,作者应用上述RNA探针,检测了接种流感病毒的两种细胞中病毒RNA(vRNA)、信使RNA(mRNA)和互补RNA(cRNA)量,结果表明,MDCK-L细胞RNA合成量明显减少,流感病毒基因合成受阻。RNA探针敏感性高,特异性强,能够用来了解各种RNA合成状况,是分子病毒学研究的一个重要方法。 展开更多
关键词 rna探针 流感病毒 MDCK细胞 特异性rna
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外源视黄酸对小鼠早期胚胎形态及Otx2基因表达的影响 被引量:1
14
作者 刘楚吾 Clotm.,F 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 1996年第3期47-53,共7页
以全反式视黄酸(alltrans-retinoicacid,RA)体外处理EB(earlyallantoicbud)期和LB(Lateallantoicacid)期的小鼠胚胎,然后用洋地黄毒苷(digoxigenin... 以全反式视黄酸(alltrans-retinoicacid,RA)体外处理EB(earlyallantoicbud)期和LB(Lateallantoicacid)期的小鼠胚胎,然后用洋地黄毒苷(digoxigenin)标记的Otx2反意义RNA探针对整体胚胎进行原位杂交.0.5×10-6mol~2×10-6mol的RA处理EB和LB期胚胎12h后对其形态学和Otx2表达都没有影响;以4×10-6mol的RA处理,抑制或减少了胚胎的前肠形成,经处理的胚胎的头褶没有对照的那样明显向腹面突出,其神经沟也不整齐;以4×10-6mol的RA处理EB期的胚胎,其OtX2表达范围剧烈地向前退缩或只有很微弱的表达;但以同样浓度处理LB期胚胎时,与对照胚胎相比,OtX2的表达除了在极少数胚胎中变得弱一些外,在绝大多数胚胎中其表达模式没有变化. 展开更多
关键词 胚胎 视黄酸 小鼠 原位杂交 Otx2基因 形态学
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生物素标记IBDV─RNA探针的制备及其对IBDV─RNA检测的初步研究 被引量:1
15
作者 董志珍 胡永浩 +1 位作者 王蒲 沈正达 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 1994年第3期279-282,共4页
以传染性法氏囊病毒强毒株接种9日龄鸡胚尿囊腔,待鸡胚死亡后,收集其尿囊液,提取病毒。纯化的病毒RNA在3%琼脂糖凝胶电泳上呈现出290bp和3400bp的两条带。收集这两条带,以病毒全基因组制备生物素标记的探针。此探... 以传染性法氏囊病毒强毒株接种9日龄鸡胚尿囊腔,待鸡胚死亡后,收集其尿囊液,提取病毒。纯化的病毒RNA在3%琼脂糖凝胶电泳上呈现出290bp和3400bp的两条带。收集这两条带,以病毒全基因组制备生物素标记的探针。此探针有良好的特异性。它不与其它3种禽类病毒(NDV,IBV,ILV)的核酸抽提物发生交叉反应。此试验是快速、敏感、可重复的。其敏感度达0.5pg。 展开更多
关键词 IBD 病毒 鸡病 生物素标记
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鸡整胚原位杂交RNA探针的制备
16
作者 陈丽 陀杨娟 孙晋虎 《广西医科大学学报》 CAS 2015年第1期8-10,共3页
目的:建立一种快速、简便、高效的鸡胚整胚原位杂交地高辛标记的RNA探针的制备方法。方法:应用RT-PCR方法从鸡胚总RNA中扩增目的片段,连接到PGM-T克隆载体上,分别利用PGM-T载体中的SP6和T7RNA聚合酶上的启动子,以线性化的DNA为模板体外... 目的:建立一种快速、简便、高效的鸡胚整胚原位杂交地高辛标记的RNA探针的制备方法。方法:应用RT-PCR方法从鸡胚总RNA中扩增目的片段,连接到PGM-T克隆载体上,分别利用PGM-T载体中的SP6和T7RNA聚合酶上的启动子,以线性化的DNA为模板体外转录成地高辛标记的正反义RNA探针。结果:成功得到地高辛标记的RNA探针,探针在鸡整胚原位杂交中有杂交信号。结论:成功转录得到地高辛标记的正反义探针,为后续的以鸡胚为模型整胚原位杂交试验做好了探针的准备。 展开更多
关键词 鸡胚 rna探针 整胚原位杂交 地高辛
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前列腺特异性膜抗原RNA探针的制备
17
作者 崔卫国 张琚 +4 位作者 李青 周耀 祝韶军 冯剑利 强万明 《南开大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期59-62,共4页
从前列腺癌细胞系 LNCa P中提取总 RNA,经 RT-PCR扩增前列腺特异性膜抗原 (PSM)靶序列 ,将其定向插入带 T7RNA聚合酶启动子的 p SPORT1质粒 ,转入大肠杆菌 DH5 α,经蓝白斑筛选获得重组质粒 .以此重组质粒线性化 DNA为模板 ,以地高辛标... 从前列腺癌细胞系 LNCa P中提取总 RNA,经 RT-PCR扩增前列腺特异性膜抗原 (PSM)靶序列 ,将其定向插入带 T7RNA聚合酶启动子的 p SPORT1质粒 ,转入大肠杆菌 DH5 α,经蓝白斑筛选获得重组质粒 .以此重组质粒线性化 DNA为模板 ,以地高辛标记的 r UTP及其他三种 r NTP为底物 ,经 T7RNA聚合酶体外转录 ,成功地制备了地高辛标记的 PSM特异性 RNA探针 ,为研究以 PSM为分子生物学指标的前列腺癌分期诊断奠定了基础 . 展开更多
关键词 前列腺特异性膜抗原 前列腺肿瘤 前列腺癌 rna探针 RT-PCR扩增 基因诊断 免疫治疗
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人VMAT_2基因RNA探针制备及其在COS-7细胞中的表达
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作者 张京钟 余爽 +2 位作者 赵春礼 段德义 徐群渊 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期158-162,共5页
本研究目的在于制备人 型囊泡单胺转运体 (VMAT2 )基因的反义和正义 RNA探针 ,以检测 VMAT2 基因能否在真核细胞表达。从携带 p GEM-Easy-T-VMAT2 克隆载体中通过限制性酶切反应得到 VMAT2 基因 ,与 p BK-RSV载体重组构建真核表达载体 ... 本研究目的在于制备人 型囊泡单胺转运体 (VMAT2 )基因的反义和正义 RNA探针 ,以检测 VMAT2 基因能否在真核细胞表达。从携带 p GEM-Easy-T-VMAT2 克隆载体中通过限制性酶切反应得到 VMAT2 基因 ,与 p BK-RSV载体重组构建真核表达载体 p BK-RSV-VMAT2 ;分别以 T7和 T3聚合酶制备反义和正义探针 ,通过斑点杂交检测探针浓度。转染猴肾成纤维细胞COS-7,原位杂交及免疫荧光细胞化学检测 VMAT2 的表达。结果证明 ,反义和正义探针浓度分别为 80 ng/μl及 12 0 ng/μl;原位杂交及免疫组织化学证实重组的真核表达载体 p BK-RSV-VMAT2 在 COS-7的表达阳性率为 (10 .6± 1.2 ) %。本研究结果表明获得 VMAT2 基因反义链及正义链 RNA探针 ,并检测到 VMAT2 展开更多
关键词 VMAT2基因 rna探针 COS-7细胞 表达 帕金森病
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Irx5a在野生型斑马鱼早期发育中的表达
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作者 舒莉萍 何志旭 +1 位作者 许威 丁可军 《贵阳医学院学报》 CAS 2016年第7期755-759,共5页
目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a基因,将其克隆入pCS^(2+)质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系制备Ir... 目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a基因,将其克隆入pCS^(2+)质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系制备Irx5a的反义mRNA探针;用该反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了Irx5a-pCS^(2+)重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测Irx5a基因的表达,发现从3.7 hpf开始有表达,并且在胚胎神经系统和造血系统都有明显表达。结论:Irx5a基因可能参与了Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统和造血系统的发育。 展开更多
关键词 Irx5a pCS^2+质粒 DNA 重组 rna探针 全胚胎原位杂交技术
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应用体外转录法和荧光素制备RNA探针的技术
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作者 宁俊红 孙文夏 陈东戎 《药物生物技术》 CAS CSCD 2008年第1期28-30,共3页
为建立一种快速制备RNA探针的方法,以研究不同的RNA与RNA之间的相互作用,介绍一种用体外转录法制备RNA,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)纯化得到纯化的RNA,最后用荧光素标记得到RNA探针的新方法,用该方法制备RNA探针简便、高效、安全... 为建立一种快速制备RNA探针的方法,以研究不同的RNA与RNA之间的相互作用,介绍一种用体外转录法制备RNA,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)纯化得到纯化的RNA,最后用荧光素标记得到RNA探针的新方法,用该方法制备RNA探针简便、高效、安全,尤其适合小剂量RNA探针的制备。 展开更多
关键词 体外转录法 荧光素 rna探针 制备技术
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