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携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究
被引量：
1
1
作者
刘辉
王春红
+5 位作者
陈亚龙
李林芳
吴红平
钱炎珍
姜梨华
钱其军
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期178-182,共5页
目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒...
目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒骨架质粒pPE3共转染大肠杆菌BJ5183,同源重组产生腺病毒重组质粒(pPE3-F11-RGD-4C),该重组质粒与PDC328-EF1-EGFP共转染人胚肾293细胞进行包装,产生重组腺病毒(AD11-RGD-4C-EG-FP)。用该重组腺病毒感染HepG2、BEL-7404以及BJ细胞,通过荧光显微镜观察感染效率。结果所构建的重组腺病毒PCR扩增出1 123 bp包含目的片段的基因片段。同时,制备了高滴度的重组病毒,纯化后病毒滴度为1.3×1010pfu/ml。当MOI=10,48 h时该重组病毒对HepG2、BEL-7404及BJ细胞的感染效率明显高于对照组腺病毒(AD11-EGFP)。结论成功构建了可提高腺病毒感染效率的嵌合型腺病毒(AD11-RGD-4C-EGFP),为进一步的研究奠定了基础。
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关键词
rgd
-
4
c
HI环
腺病毒载体
肝细胞癌
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职称材料
靶向肽位置影响融合蛋白与细胞结合活性
被引量：
2
2
作者
王海
石必枝
+2 位作者
杨胜利
李宗海
罗晓莹
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期74-78,共5页
目的:探讨靶向多肽与标签蛋白(绿色荧光蛋白)的位置关系是否会影响融合蛋白与细胞之间的结合能力。方法:将获得的GE11和LyP1两种靶向多肽分别与增强型绿色荧光蛋白在不同位置融合表达,通过原核系统表达纯化,将纯化的蛋白加入血清饥饿的S...
目的:探讨靶向多肽与标签蛋白(绿色荧光蛋白)的位置关系是否会影响融合蛋白与细胞之间的结合能力。方法:将获得的GE11和LyP1两种靶向多肽分别与增强型绿色荧光蛋白在不同位置融合表达,通过原核系统表达纯化,将纯化的蛋白加入血清饥饿的SMMC-7721肝癌细胞株培养液中,处理3h,通过荧光显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白的情况检查融合多肽与细胞的结合情况。结果:绿色荧光蛋白的羧基端和GE11、LyP1多肽分别融合表达,处理细胞后,融合蛋白显示与细胞有很强的结合能力;当GE11、LyP1在绿色荧光蛋白氨基端融合时,融合蛋白几乎不能与细胞结合。在此基础上,检测了多种靶向肽对多种细胞的靶向效应。结论:不合适的融合策略会降低,甚至消除靶向多肽的结合能力;融合大分子量蛋白也会改变靶向肽的靶向效应。因此,当使用靶向多肽携带基因进行研究时,其在融合蛋白中的位置应该非常谨慎。
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关键词
靶向肽
GEll
LyP1
rgd
4
c
原文传递
题名
携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究
被引量：
1
1
作者
刘辉
王春红
陈亚龙
李林芳
吴红平
钱炎珍
姜梨华
钱其军
机构
浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所
第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期178-182,共5页
基金
国家自然科学基金重点项目(30730104)
浙江省自然基金重点项目(Z205618)~~
文摘
目的在嵌合型腺病毒的fiber中插入具有整合素特异性的RGD肽,构建可提高腺病毒感染效率的腺病毒载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2、BEL-7404以及成纤维细胞BJ的感染效率。方法将RGD-4C插入到AD5/11嵌合型腺病毒载体fiber的HI区,与腺病毒骨架质粒pPE3共转染大肠杆菌BJ5183,同源重组产生腺病毒重组质粒(pPE3-F11-RGD-4C),该重组质粒与PDC328-EF1-EGFP共转染人胚肾293细胞进行包装,产生重组腺病毒(AD11-RGD-4C-EG-FP)。用该重组腺病毒感染HepG2、BEL-7404以及BJ细胞,通过荧光显微镜观察感染效率。结果所构建的重组腺病毒PCR扩增出1 123 bp包含目的片段的基因片段。同时,制备了高滴度的重组病毒,纯化后病毒滴度为1.3×1010pfu/ml。当MOI=10,48 h时该重组病毒对HepG2、BEL-7404及BJ细胞的感染效率明显高于对照组腺病毒(AD11-EGFP)。结论成功构建了可提高腺病毒感染效率的嵌合型腺病毒(AD11-RGD-4C-EGFP),为进一步的研究奠定了基础。
关键词
rgd
-
4
c
HI环
腺病毒载体
肝细胞癌
Keywords
rgd
-
4
c
HI loop adenovirus ve
c
tors hepato
c
ar
c
inoma
分类号
R730.59 [医药卫生—肿瘤]
下载PDF
职称材料
题名
靶向肽位置影响融合蛋白与细胞结合活性
被引量：
2
2
作者
王海
石必枝
杨胜利
李宗海
罗晓莹
机构
上海交通大学医学院附属仁济医院
上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期74-78,共5页
基金
"十一五计划"(2008ZX10002-023)
国家高技术研究发展计划(2007AA021203)资助项目
文摘
目的:探讨靶向多肽与标签蛋白(绿色荧光蛋白)的位置关系是否会影响融合蛋白与细胞之间的结合能力。方法:将获得的GE11和LyP1两种靶向多肽分别与增强型绿色荧光蛋白在不同位置融合表达,通过原核系统表达纯化,将纯化的蛋白加入血清饥饿的SMMC-7721肝癌细胞株培养液中,处理3h,通过荧光显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白的情况检查融合多肽与细胞的结合情况。结果:绿色荧光蛋白的羧基端和GE11、LyP1多肽分别融合表达,处理细胞后,融合蛋白显示与细胞有很强的结合能力;当GE11、LyP1在绿色荧光蛋白氨基端融合时,融合蛋白几乎不能与细胞结合。在此基础上,检测了多种靶向肽对多种细胞的靶向效应。结论:不合适的融合策略会降低,甚至消除靶向多肽的结合能力;融合大分子量蛋白也会改变靶向肽的靶向效应。因此,当使用靶向多肽携带基因进行研究时,其在融合蛋白中的位置应该非常谨慎。
关键词
靶向肽
GEll
LyP1
rgd
4
c
Keywords
Targeting peptide GEl 1 LyP1
rgd
4
c
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
携带RGD多肽的嵌合型腺病毒载体AD11-RGD-4C-EGFP的构建及其感染效率的研究
刘辉
王春红
陈亚龙
李林芳
吴红平
钱炎珍
姜梨华
钱其军
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
下载PDF
职称材料
2
靶向肽位置影响融合蛋白与细胞结合活性
王海
石必枝
杨胜利
李宗海
罗晓莹
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
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