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RFFIT和MNT检测抗狂犬病毒中和抗体的比较研究 被引量:9
1
作者 程满荣 徐葛林 +5 位作者 吴杰 唐建蓉 郑新雄 董关木 吴小红 张永振 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期30-33,共4页
目的对RFFIT和MNT两种方法检测抗狂犬病毒中和抗体的相关性,敏感性和重复性进行比较。方法用MNT和RFFIT两种方法来检测已免疫的人血清52份,未免疫的人血清40份。结果显示这两种方法检测已免疫血清的一致性是88.5%,其相关性是r=0.886,MN... 目的对RFFIT和MNT两种方法检测抗狂犬病毒中和抗体的相关性,敏感性和重复性进行比较。方法用MNT和RFFIT两种方法来检测已免疫的人血清52份,未免疫的人血清40份。结果显示这两种方法检测已免疫血清的一致性是88.5%,其相关性是r=0.886,MNT的敏感性和特异性分别是84.9%,100%;RFFIT的灵敏度和特异性分别是100%,89.0%。MNT和RFFIT重复检测一个样品的变异系数(CV)分别是62.3%、13.3%。结论RFFIT与MNT的相关性较好,RFFIT的灵敏度和重复性均比MNT好,因此,RFFIT在大多数需要检测RV中和抗体的情况下可替代MNT。 展开更多
关键词 狂犬病毒 rffit MNT 中和抗体
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Establishment and Preliminary Application of a Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test (RFFIT) for Rabies Virus 被引量:11
2
作者 Pengcheng Yu Xinjun Lv +2 位作者 Xinxin Shen Qing Tang Guodong Liang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2013年第4期223-227,共5页
The World Health Organization (WHO) standard assay for determining levels of the rabies virus neutralization antibody (RVNA) is the rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT), which is used to evaluate the immuni... The World Health Organization (WHO) standard assay for determining levels of the rabies virus neutralization antibody (RVNA) is the rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT), which is used to evaluate the immunity effect after vaccination against rabies. For RFFIT, CVS-11 was used as the challenge virus, BSR cells as the adapted cells, and WHO rabies immunoglobulin (WHO STD) as the reference serum in this study. With reference to WHO and Pasteur RFFIT procedures, a micro-RFFIT procedure adapted to our laboratory was produced, and its specificity and reproducibility were tested. We tested levels of RVNA in human serum samples after immunization with different human rabies vaccines (domestic purified Vero cell rabies vaccine (PVRV) and imported purified chick embryo cell vaccine (PCECV)) using different regimens (Zagreb regimen and Essen regimen). We analyzed the levels of RVNA, and compared the immune efficacy of domestic PVRV and imported PCECV using different immunization regimens. The results showed that the immune efficacy of domestic PVRV using the Zagreb regimen was as good as that of the imported PCECV, but virus antibodies were generated more rapidly with the Zagreb regimen than with the Essen regimen. The RFFIT procedure established in our laboratory will enhance the comprehensive detection ability of institutions involved in rabies surveillance in China. 展开更多
关键词 Rapid fluorescent focus inhibition test rffit RVNA RABIES Vaccination regimen
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一起一犬伤13人狂犬病暴露事件的综合处置及效果评价 被引量:7
3
作者 李幸乐 李凤丽 +3 位作者 周瑞清 普海燕 黄学勇 许汴利 《河南预防医学杂志》 2017年第1期4-7,共4页
目的综合处置一起一犬伤13人的狂犬病暴露事件,评价预防处置措施效果,为规范化处置一犬伤多人事件提供依据。方法根据《狂犬病暴露后预防处置工作规范(2009版)》对一犬伤13人事件中的13人进行伤口清洗、狂犬病疫苗和/或狂犬病免疫球蛋... 目的综合处置一起一犬伤13人的狂犬病暴露事件,评价预防处置措施效果,为规范化处置一犬伤多人事件提供依据。方法根据《狂犬病暴露后预防处置工作规范(2009版)》对一犬伤13人事件中的13人进行伤口清洗、狂犬病疫苗和/或狂犬病免疫球蛋白接种;分别采用RT-PCR方法和RFFIT方法进行伤人犬的实验室诊断和狂犬病暴露后处置人群免疫效果评价。结果伤人犬被打死、焚烧后深埋处理。犬脑组织标本经RT-PCR检测狂犬病病毒N、L基因均有特异性条带出现。13例伤者均为Ⅲ级暴露,均在24 h内主动至当地狂犬病预防处置门诊进行暴露后预防处置,其全程免疫后第15 d的血清抗狂犬病病毒中和抗体水平均>0.5 IU/mL。结论伤人犬为狂犬病病犬,13例狂犬病暴露后免疫人群全程免疫后血清中和抗体均达到保护性水平。及时、有效的多部门合作对一犬伤多人事件的处置具有积极意义。 展开更多
关键词 一犬伤多人 暴露后免疫 RT—PCR rffit
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RFFIT、FAVN、ELISA及狂犬病中和抗体检测试剂盒对狂犬病抗体检测的比较研究 被引量:7
4
作者 于鹏程 由淑珍 +4 位作者 卢学新 陶晓燕 刘淑清 纪军 朱武洋 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期265-268,共4页
为了比较RFFIT、FAVN、ELISA及狂犬病中和抗体检测试剂盒(RVNA Kit)等四种方法对狂犬病抗体的检测效果,对65份狂犬病疫苗免疫前、免疫后临床血清样本,分别使用RFFIT、FAVN、ELISA及RVNA Kit方法对狂犬病病毒特异性抗体进行测定,并对检... 为了比较RFFIT、FAVN、ELISA及狂犬病中和抗体检测试剂盒(RVNA Kit)等四种方法对狂犬病抗体的检测效果,对65份狂犬病疫苗免疫前、免疫后临床血清样本,分别使用RFFIT、FAVN、ELISA及RVNA Kit方法对狂犬病病毒特异性抗体进行测定,并对检测结果的阳性符合率、相关性及重复性进行分析。检测结果显示,RFFIT、FAVN及RVNA kit的阳性符合率为100%,三种方法与ELISA试剂盒的阳性符合率为95.38%,对0.5IU/mL^10IU/mL的血清样本进行阳性符合率分析显示,四种方法的阳性符合率为100%;相关性研究结果表明,RFFIT、FAVN及RVNA Kit之间任意两种方法检测结果的相关系数均超过0.97,但ELISA与其他三种方法检测结果的相关系数均低于0.86;同一份样品的重复性检验结果显示,RVNA Kit和ELISA比RFFIT和FAVN具有更好的重复性,而RVNA Kit的重复性最好,其变异系数仅6%。研究结果表明,RFFIT、FAVN及RVNA Kit等三种方法可通用于血清中抗狂犬病病毒中和抗体的检测,而ELISA检测结果与中和抗体效价有一定差距,但在经过优化、校验后ELISA也可以在有效范围内用于狂犬病抗体的检测。 展开更多
关键词 RVNA KIT rffit ELISA FAVN
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ELISA法与RFFIT法检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体的比较 被引量:9
5
作者 刘华章 黄桂花 +1 位作者 曹庆 刘远 《热带医学杂志》 CAS 2008年第5期497-499,共3页
目的比较狂犬病疫苗免疫后血清抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)与快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)两种检测方法。方法对93名研究对象采用0、3、7、14和28d程序进行暴露后免疫,分别采用ELISA法与WHO认可的金标法RFFIT法检测免疫D0、D3、D7、... 目的比较狂犬病疫苗免疫后血清抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)与快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)两种检测方法。方法对93名研究对象采用0、3、7、14和28d程序进行暴露后免疫,分别采用ELISA法与WHO认可的金标法RFFIT法检测免疫D0、D3、D7、D14、D45d的血清抗体。结果免疫D0、D3、D7、D14、D45dELISA法检测抗体阳性率分别为8.6%、11.8%、22.6%、49.6%、86%,RFFIT法检测抗体阳性率分别为0%、0%、22.58%、100%、100%,ELISA法与RFFIT法阳性符合率分别为0%、0%、34.8%、100%、100%;阴性符合率分别为100%、100%、81.4%、0%、0%。结论ELISA法检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体,免疫早期D0、D3、D7假阳性率较高,免疫D14、D45则假阴性率较高。建议采用WHO认可的方法做检测。 展开更多
关键词 狂犬病抗体 酶联免疫吸附试验 快速免疫荧光灶抑制试验
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Comparison of RFFIT Tests with Different Standard Sera and Testing Procedures 被引量:6
6
作者 Peng-cheng Yu Akira Noguchi +3 位作者 Satoshi Inoue Qing Tang Simon Rayner Guo-dong Liang 《Virologica Sinica》 CAS CSCD 2012年第3期187-193,共7页
The World Health Organization (WHO) standard assay for determining antibody level is the rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT) and is used to determine the degree of immunity after vaccination against ra... The World Health Organization (WHO) standard assay for determining antibody level is the rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT) and is used to determine the degree of immunity after vaccination against rabies. To compare the difference in RFFIT results between the laboratories of The National Institute of Infectious Disease in Japan (NIID) and the Chinese Centre for Disease Control (CCDC) as well the influence of the choice of standard serum (STD) for the detection, the two laboratories detection methods were simultaneously manipulated by RFFIT. The reference serums used in NIID and the WHO standard serum used in CCDC were compared in the same RFFIT detection to determine the titer of four sera samples C1, Sl, S2 and S4 in parallel, and the titers of the detected sera samples were calculated using the standard formula for neutralizing antibody titer. No significant difference was found in RFFIT methods from the two laboratories and the RFFIT testing procedures of the two laboratories have good consistency. However, different titers were obtained with the tentative internal standard serum (TI-STD) produced by adjusting to 2.0 IU of WHO standard serum in NIID and the WHO STD. The titer determined with the TI-STD was higher than that determined with WHO STD, This difference appears to be significant and requires further investigation 展开更多
关键词 Rapid fluorescent focus inhibition test rffit Standard serum Neutralizing antibody TITER
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狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立及初步应用 被引量:6
7
作者 王伟伟 王远征 +1 位作者 张国强 马昱 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第11期1355-1359,共5页
目的建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,用于不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测。方法用市售的不同狂犬病疫苗株抗原免疫NIH小鼠,制备免疫血清,用不同的疫苗株抗原包被酶标板,分别测定小鼠血清抗体效价,并通过不同株抗原抗体的... 目的建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,用于不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测。方法用市售的不同狂犬病疫苗株抗原免疫NIH小鼠,制备免疫血清,用不同的疫苗株抗原包被酶标板,分别测定小鼠血清抗体效价,并通过不同株抗原抗体的交叉中和实验,分析抗原的差异性;在此基础上,将不同毒株抗原按不同比例混合包被酶标板,分别测定阳性血清样本,并与快速免疫荧光抑制试验(RFFIT)检测结果比较,确定包被抗原模式,建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,绘制标准曲线,确定最佳定量范围及灵敏度,确定Cut-off值;并对其特异性、精密性、准确性及稳定性进行验证;用建立的方法与其他市售狂犬病病毒抗体检测试剂分别检测血清样品,分析检测结果的一致性及相关性。结果狂犬病病毒抗原AG∶CTN-1=4∶1为最适包被抗原模式,试剂经优化后,检测抗体效价范围在535.00~33.44 mIU/ml之间,具有良好的线性关系(r>0.99),最低检出限为8.36 mIU/ml,Cut-off值为0.735 mIU。该方法检测人血清白蛋白、破伤风阳性血清、乙肝表面抗原阳性血清、白喉阳性质控血清均未发生反应;试验内变异系数在6.68%~7.84%之间;回收率在97.25%~104.50%之间;试剂置37℃3 d,与4℃保存试剂测定结果差异无统计学意义(P>0.05)。该方法检测血清样品与市售狂犬病病毒抗体检测试剂比较,均具有良好的一致性;与RFFIT测定结果比较,二者差异无统计学意义(P>0.05),回归方程为Y=-0.475+3.246 X,相关系数为0.801。结论已建立了狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,可用于大规模狂犬病病毒抗体的筛查。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 抗体 酶联免疫吸附测定 快速免疫荧光抑制试验
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基于狂犬病病毒CVS-11假病毒的中和抗体检测新技术及初步应用 被引量:5
8
作者 邓瑶 吕新军 +4 位作者 于鹏程 许洪林 唐青 朱武洋 谭文杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期775-778,共4页
目的建立一种可替代快速荧光灶抑制试验(RFFIT法)的简易高通量狂犬病病毒中和抗体(RVNA)检测技术。方法我们构建了表达荧光素酶报告基因与CVS-11包膜蛋白的狂犬病病毒假病毒,建立了狂犬病病毒中和抗体检测技术(改良RFFIT方法),... 目的建立一种可替代快速荧光灶抑制试验(RFFIT法)的简易高通量狂犬病病毒中和抗体(RVNA)检测技术。方法我们构建了表达荧光素酶报告基因与CVS-11包膜蛋白的狂犬病病毒假病毒,建立了狂犬病病毒中和抗体检测技术(改良RFFIT方法),与标准RFFIT方法结果平行比较,并进一步应用于北京地区宠物犬与饲养人群血清中和抗体检测。结果改良RFFIT方法与标准RFFIT方法平行检测的46份待检血清与5份阴性参比血清,符合率为100%,且使用CVS-11假病毒测得的样品RVNA数值与标准RFFIT所得数值高度相关(n=46,r=0.94,P〈0.0001)。改良RFFIT方法用于北京地区宠物犬与饲养人群血清中RVNA滴度测定,均为阳性,其平均IU值为33.01IU/ml。结论基于狂犬病病毒CVS-11假病毒的中和抗体检测技术简易高效,可替代传统RFFIT方法。本研究中北京地区宠物犬与饲养人群91份样本均可检出明显的狂犬病病毒保护性中和抗体。 展开更多
关键词 狂犬病病毒中和抗体(RVNA) 快速荧光灶抑制试验 CVS-11 假病毒颗粒
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人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)的免疫原性评价
9
作者 吴小红 李加 +3 位作者 曹守春 王云鹏 石磊泰 李玉华 《微生物学免疫学进展》 CAS 2023年第6期48-52,共5页
目的研究狂犬病病毒aG株生产的人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)免疫接种后抗体动态水平,评价疫苗的免疫原性,并对企业A和企业B生产的狂犬病疫苗进行效力评价。方法采用企业A和B生产的人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)(简称狂苗)按暴露后免疫程序... 目的研究狂犬病病毒aG株生产的人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)免疫接种后抗体动态水平,评价疫苗的免疫原性,并对企业A和企业B生产的狂犬病疫苗进行效力评价。方法采用企业A和B生产的人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)(简称狂苗)按暴露后免疫程序接种受试者,分别于免疫前、第1针免疫后3、7、14、42 d抽血并分离血清,用快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测中和抗体滴度,比较2组受试者血清样本的抗体阳转率和抗狂犬病中和抗体滴度;并对2015年1月至2023年3月企业A和企业B申报批签发的狂苗抽检效价结果进行回顾性分析,效力检测采用《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)2020版(三部)人用狂犬病疫苗效价测定法。结果企业A和企业B生产的狂苗第1针免疫后7 d抗体阳转率分别为50.6%、51.5%,14、42 d阳转率均为100%,抗体阳转率差异无统计学意义(χ^(2)=0.0161,P=0.899);第1针免后7 d中和抗体几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为1.5、2.2 IU/mL,差异无统计学意义(t=0.316,P=0.752);第1针免后14 d的GMT分别为5.7、8.7 IU/mL,差异无统计学意义(t=0.864,P=0.388);第1针免后42 d的GMT分别为9.7、9.8 IU/mL,差异无统计学意义(t=0.092,P=0.925)。参照《中国药典》2015版附录3503和《中国药典》2020版附录3503第一法(NIH法)检测的企业A和企业B的疫苗效价几何均值分别为6.8和6.0 IU/剂,差异无统计学意义(t=1.699,P=0.094)。参照《中国药典》2020版附录3503第二法(改良NIH法)检测的企业A和企业B生产的狂苗效价均≥4.0 IU/剂。结论2家企业利用狂犬病病毒aG株在原代地鼠肾细胞上生产的狂苗均可以及时地在人体内诱导产生保护性抗体,回顾分析表明效价检测结果全部符合规定,疫苗具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 人用狂犬病疫苗 狂犬病病毒aG株 快速荧光灶抑制试验 疫苗免疫原性 疫苗效力
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RFFIT与特殊群体再次暴露后预防处置的临床研究
10
作者 冯嘉心 胡晓波 《中文科技期刊数据库(全文版)医药卫生》 2023年第7期0062-0064,共3页
通过RFFIT对特殊人群再次暴露后狂犬病中和抗体水平监测,为做好狂犬病的预防处置程序提供科学依据。方法:对2021年10月-2023年3月在我院门诊就诊并进行RFFIT的74名患者资料进行统计分析,针对全程接种完第一天、3个月后、6个月后,分别测... 通过RFFIT对特殊人群再次暴露后狂犬病中和抗体水平监测,为做好狂犬病的预防处置程序提供科学依据。方法:对2021年10月-2023年3月在我院门诊就诊并进行RFFIT的74名患者资料进行统计分析,针对全程接种完第一天、3个月后、6个月后,分别测定其狂犬病中和抗体并进行对照研究,定量评价其接种免疫效果,探讨患者体内狂犬病中和抗体效价与特殊群体免疫应答相关性。结论:RFFIT监测狂犬病中和抗体,明确特殊人群再次暴露后3个月及6个月时血液中抗体水平均能达到有效保护水平,因此,对于特殊人群,均可采用6个月为再次暴露处置的时间节点,即初次全程接种狂犬病疫苗后,若再次暴露,6个月内可不加强免疫,超过6个月加强剂狂犬病疫苗。 。 展开更多
关键词 rffit 特殊群体 再次暴露 预防处置
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ELISA与RFFIT两种方法检测人狂犬病抗体的对比 被引量:1
11
作者 熊春 《中国卫生标准管理》 2016年第13期159-160,共2页
目的对比酶联免疫吸附试验(ELISA)与快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)检测人狂犬病抗体的效果。方法选取狂犬抗体疫苗接种者免疫后血清100份,分别随机选用ELISA与RFFIT检测。结果免疫0 d、3 d、7 d、14 d和45 d时ELISA法检测阳性率分别为9... 目的对比酶联免疫吸附试验(ELISA)与快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)检测人狂犬病抗体的效果。方法选取狂犬抗体疫苗接种者免疫后血清100份,分别随机选用ELISA与RFFIT检测。结果免疫0 d、3 d、7 d、14 d和45 d时ELISA法检测阳性率分别为9.00%、12.00%、25.00%、48.00%、86.00%;RFFIT法检测阳性率分别为0.00%、0.00%、23.00%、100.00%、100.00%。结论 ELISA与RFFIT两种方法检测人狂犬病抗体均可适用于抗狂犬病毒抗体检测,但ELISA法免疫早期假阳性率较高,后期假阴性率较高。 展开更多
关键词 狂犬病 抗体
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RFFIT法血清系列参考品的建立 被引量:3
12
作者 吴小红 李加 董关木 《中国药事》 CAS 2010年第11期1082-1084,共3页
目的建立血清参考品,用于RFFIT法检测抗狂犬病毒中和抗体。方法狂犬病疫苗免疫后人血清,采用小鼠脑内中和试验确定抗狂犬病毒中和抗体滴度后,混匀,分装,以第2批人免疫球蛋白国际标准品为参考品用RFFIT方法进行标定,并考察所建参考品的... 目的建立血清参考品,用于RFFIT法检测抗狂犬病毒中和抗体。方法狂犬病疫苗免疫后人血清,采用小鼠脑内中和试验确定抗狂犬病毒中和抗体滴度后,混匀,分装,以第2批人免疫球蛋白国际标准品为参考品用RFFIT方法进行标定,并考察所建参考品的稳定性。结果检测用标准血清效价为22.14IU.mL-1,弱阳性、强阳性参考品分别1.11IU.mL-1,9.20IU.mL-1,阴性参考品低于0.1IU.mL-1。结论建立的系列参考品适用于RFFIT法检测人血清中抗狂犬病中和抗体水平。 展开更多
关键词 血清参考品 快速免疫荧光灶抑制实验 狂犬病毒
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快速荧光灶抑制试验对我国部分肾综合征出血热毒株及病人血清的分型研究
13
作者 唐汉英 朱智勇 +4 位作者 翁景清 陆群英 姚苹苹 李敏红 刘合宾 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 1999年第3期185-187,共3页
目的:探讨肾综合征出血热(HFRS)毒株及病人血清分型方法。方法:快速荧光灶抑制试验(RFFIT)。结果:6株来自黑线姬鼠和病人的毒株,其免疫血清对Ⅰ型标准株76-118的中和效价较Ⅱ型标准株(UR)高4~256倍;... 目的:探讨肾综合征出血热(HFRS)毒株及病人血清分型方法。方法:快速荧光灶抑制试验(RFFIT)。结果:6株来自黑线姬鼠和病人的毒株,其免疫血清对Ⅰ型标准株76-118的中和效价较Ⅱ型标准株(UR)高4~256倍;而另6株来自褐家鼠和大白鼠的毒株,包括Gou3和K24的免疫血清,对Ⅱ型标准株UR的中和效价高于Ⅰ型76-118株8~128倍;被检的所有毒株和病人血清都能准确地分型。结论:RFFIT具有快速、简便、特异和准确灵敏的特点,不仅可检测中和抗体,且适用于HFRS病毒血清学分型。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 血清学分型 rffit
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检测狂犬病病毒中和抗体的快速荧光灶抑制试验(RFFIT)方法的建立 被引量:27
14
作者 严家新 李承平 +4 位作者 朱家鸿 曹瑞瑶 薛红钢 刘碧芬 徐葛林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期93-96,共4页
在制备出抗狂犬病病毒(RV)核蛋白(NP)荧光标记抗体的基础上,建立起检测RV中和抗体的快速荧光灶抑制试验(RFFIT)方法。经与小鼠中和试验(MNT)比较,其重复性、特异性和灵敏度差异均无显著意义。该方法在大多数需要检测RV中和抗... 在制备出抗狂犬病病毒(RV)核蛋白(NP)荧光标记抗体的基础上,建立起检测RV中和抗体的快速荧光灶抑制试验(RFFIT)方法。经与小鼠中和试验(MNT)比较,其重复性、特异性和灵敏度差异均无显著意义。该方法在大多数需要检测RV中和抗体的情况下可取代MNT。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 中和抗体 荧光灶抑制试验
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抗狂犬病病毒中和抗体效价快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的建立及应用 被引量:19
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作者 吴小红 李加 +5 位作者 唐建蓉 Hervé Bourhy 刘景华 曲效民 曹守春 董关木 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第11期1145-1148,共4页
目的建立抗狂犬病病毒中和抗体效价的快速荧光灶抑制试验(RFFIT),验证其与小鼠脑内中和法(MNT)的相关性,并用于马抗狂犬病病毒血清(ERIG)和人狂犬病免疫球蛋白(HRIG)及狂犬病疫苗免疫后血清中和抗体效价的测定。方法待测血清或免疫球蛋... 目的建立抗狂犬病病毒中和抗体效价的快速荧光灶抑制试验(RFFIT),验证其与小鼠脑内中和法(MNT)的相关性,并用于马抗狂犬病病毒血清(ERIG)和人狂犬病免疫球蛋白(HRIG)及狂犬病疫苗免疫后血清中和抗体效价的测定。方法待测血清或免疫球蛋白在96孔板中作3倍系列稀释,与能感染80%~95%细胞量的攻击病毒混合后,37℃体外中和1h,接种BSR细胞,培养24h后荧光染色,荧光显微镜下读取结果。用建立的RFFIT法与MNT法同时标定狂犬病免疫球蛋白国家标准品,并检测ERIG和HRIG以及疫苗免疫后血清样品的抗狂犬病病毒中和抗体效价,以比较两种方法的精密度和相关性。结果采用MNT法和RFFIT法检测我国抗狂犬病免疫球蛋白国家标准品的GMT分别为21.4和23.8IU/ml,两种方法的变异系数分别为62.3%和13.3%;两个实验室用RFFIT法测定我国国家标准品的结果分别为21.71和23.81IU/ml。两种方法测定ERIG和HRIG及疫苗免疫后血清中和抗体效价的结果差异无统计学意义,相关系数为0.976,两种方法的检测结果之间呈良好的正相关性。结论RFFIT法可替代MNT法检测抗狂犬病病毒中和抗体效价。 展开更多
关键词 狂犬病 中和抗体 快速荧光灶抑制试验 小鼠脑内中和法
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ELISA与RFFIT 2种方法检测人狂犬病抗体的比较 被引量:2
16
作者 吴小红 董关木 +1 位作者 L.Audry H.Bourhy 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1966-1968,共3页
目的:比较酶联免疫吸附试验(ELISA)与快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体。方法:临床狂犬病疫苗免疫前、免疫后血清共123份,分别用2种方法检测血清抗狂犬病抗体,比较一致性、敏感性和特异性。结果:ELISA与RFFI... 目的:比较酶联免疫吸附试验(ELISA)与快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体。方法:临床狂犬病疫苗免疫前、免疫后血清共123份,分别用2种方法检测血清抗狂犬病抗体,比较一致性、敏感性和特异性。结果:ELISA与RFFIT的一致性为92.7%。结论:2种方法检测结果无明显差异,均可适用于抗狂犬病毒抗体检测。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附试验(ELISA) 快速免疫荧光灶抑制试验(rffit) 抗体检测 狂犬病毒
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人二倍体细胞狂犬病疫苗免疫8年后加强免疫效果研究 被引量:6
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作者 朱加宏 吴小红 +2 位作者 李玉华 朱凤才 胡月梅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期233-236,共4页
目的揭示人二倍体细胞狂犬病疫苗(human diploid cell rabies vaccine,HDCV)免疫8年后加强免疫的效果。方法选取参加过冻干HDCV临床Ⅲ期全程免疫的对象60例,在初次免疫8年后进行单剂加强免疫。观察加强免疫后的不良反应情况,在加... 目的揭示人二倍体细胞狂犬病疫苗(human diploid cell rabies vaccine,HDCV)免疫8年后加强免疫的效果。方法选取参加过冻干HDCV临床Ⅲ期全程免疫的对象60例,在初次免疫8年后进行单剂加强免疫。观察加强免疫后的不良反应情况,在加强免疫前和加强免疫后14d分别采集血清,采用快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)检测狂犬病病毒中和抗体(rabies virus neutralizing antibody,RVNA)。对加强免疫前后的RVNA阳性率和几何均值(geometric mean titer,GMT)进行比较。结果54例受试者完成随访和RVNA检测。受试者在加强免疫后30min及随访15d期间未发生不良反应。加强免疫前和加强免疫后RVNA阳性率为51.85%(28/54)、96.30%(52/54)。加强免疫前和加强免疫后RVNA的GMT为1.42IU/ml、30.61IU/ml。结论冻干HDCV免疫8年后单剂加强免疫效果良好。 展开更多
关键词 狂犬病 人二倍体细胞狂犬病疫苗 快速荧光灶抑制试验 中和抗体
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荧光标记抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体的制备及初步应用 被引量:2
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作者 李洁 宋云 +3 位作者 王文娟 唐青 于鹏程 朱武洋 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期372-376,共5页
抗狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)核蛋白荧光抗体具有价格昂贵、保质期短和购买周期长等缺点,非常不利于各级疾病预防控制系统对该试剂的紧急使用。作为国家狂犬病实验室,亟需研发具有自主知识产权的异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothio... 抗狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)核蛋白荧光抗体具有价格昂贵、保质期短和购买周期长等缺点,非常不利于各级疾病预防控制系统对该试剂的紧急使用。作为国家狂犬病实验室,亟需研发具有自主知识产权的异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记抗RABV核蛋白单克隆抗体(Monoclonal antibody,MAb),并且商品化,使其广泛应用于流行病学调查和实验室的病原学和血清学诊断,实现国家狂犬病监测和检测相关试剂的标准化,从而为我国狂犬病防控提供技术支持。制备FITC标记的抗RABV核蛋白MAb,并将其初步应用于直接免疫荧光实验(Direct fluorescent assay,DFA)和快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)。将本实验室制备的抗RABV核蛋白MAb 3B12进行FITC标记,通过DFA确定荧光标记抗体(FITC--3B12)工作浓度,以市售FITC标记MAb作为阳性对照,对狂犬病相关临床样本进行DFA和RFFIT检测。DFA实验结果显示,FITC--3B12的工作浓度为1∶80,与市售荧光抗体的检测结果符合率为100%。RFFIT结果显示,FITC-3B12与市售荧光抗体的检测结果无统计学差异,且具有良好的重复性(CV<15%)。以上结果表明,本实验室所制备的抗RABV核蛋白荧光抗体可应用于狂犬病相关的DFA及RFFIT检测。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病病毒(RABV) 异硫氰酸荧光素(FITC) 单克隆抗体(MAb) 直接免疫荧光实验(DFA) 快速荧光灶抑制试验(rffit)
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抗狂犬病病毒单链抗体的筛选及鉴定 被引量:3
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作者 陈继军 毛晓燕 +1 位作者 乔玉玲 毕司英 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期27-31,共5页
目的:利用噬菌体展示技术构建的噬菌体抗体库,筛选、表达及鉴定具有体外中和活性的抗狂犬病病毒单链抗体。方法:以21份接受狂犬病病毒疫苗免疫的健康人外周血构建的抗狂犬病病毒scFv噬菌体免疫库为基础,免疫管包被纯化狂犬病病毒颗粒,... 目的:利用噬菌体展示技术构建的噬菌体抗体库,筛选、表达及鉴定具有体外中和活性的抗狂犬病病毒单链抗体。方法:以21份接受狂犬病病毒疫苗免疫的健康人外周血构建的抗狂犬病病毒scFv噬菌体免疫库为基础,免疫管包被纯化狂犬病病毒颗粒,通过三轮筛选,ELISA检测单克隆噬菌体抗体颗粒的阳性率,DNAStar和Vbase2对阳性克隆进行序列分析。序列正确的单链抗体构建原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达单链抗体。经压力破碎、镍亲和层析对表达的蛋白进行纯化。RFFIT检测纯化蛋白对狂犬病病毒的体外中和活性。同时使用间接ELSIA检测获得的scFv对3aG,CVS,CTN及PV株的交叉反应性。结果:共获得40个阳性、基因测序结果正确的单链抗体。其中7个获得原核表达菌株,但只有3个获得较高的可溶性表达。RFFIT结果表明有4个scFv比活大于500 IU/mg。7个scFv对4种病毒株均有一定的交叉反应。结论:成功从该scFv噬菌体免疫库中筛选出特异性scFv;RFFIT结果表明获得的scFv具有体外中和狂犬病病毒的活性。 展开更多
关键词 单链抗体 狂犬病病毒 快速荧光灶抑制实验
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一种人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的瞬时表达及性质分析
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作者 宋宪铭 安晨 +3 位作者 张超 熊颖 张祺 陈继军 《微生物学免疫学进展》 2019年第2期17-21,共5页
目的瞬时表达人源重组抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对抗体性质进行分析。方法 PCR法扩增抗体轻、重链可变区并分别构建真核表达质粒;瞬时转染HEK293 EBNA1细胞;抗体经亲和纯化后,CE-SDS法分析纯化后抗体单体比例,用快速荧光灶抑制试验(RFF... 目的瞬时表达人源重组抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对抗体性质进行分析。方法 PCR法扩增抗体轻、重链可变区并分别构建真核表达质粒;瞬时转染HEK293 EBNA1细胞;抗体经亲和纯化后,CE-SDS法分析纯化后抗体单体比例,用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)分析抗体体外抗狂犬病病毒中和活性,ELISA分析抗体与3aG、CTN、PV及CVS株的结合。结果提取瞬时表达质粒的A260/280 nm比值在2.0~2.1之间纯化后抗体非还原CE-SDS单体纯度为74.4%;还原CE-SDS抗体轻、重链峰合计占比超过95%;抗体RFFIT体外中和活性为293.37 IU/mL,比活达628.21 IU/mg,抗体与3aG、CTN、PV及CVS株交叉反应均为阳性。结论该株抗体具有较高体外抗狂犬病病毒中和活性,与主要疫苗株均有较强结合。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 单克隆抗体 快速荧光灶抑制试验(rffit) 瞬时表达
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