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吉祥草乙酸乙酯提取物抗炎作用及机制研究 被引量:10
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作者 付雪娇 邹坤 +2 位作者 王桂萍 张秀 陈剑锋 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期822-825,共4页
目的探讨吉祥草乙酸乙酯提取物及该部位分离得到的化合物RCE-4的抗炎活性及机制。方法采用细菌脂多糖(LPS)刺激经佛波酯(PMA)诱导的人单核细胞THP-1体外炎症模型检测其干预前后上清液中促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的分泌量,角... 目的探讨吉祥草乙酸乙酯提取物及该部位分离得到的化合物RCE-4的抗炎活性及机制。方法采用细菌脂多糖(LPS)刺激经佛波酯(PMA)诱导的人单核细胞THP-1体外炎症模型检测其干预前后上清液中促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的分泌量,角叉菜胶致小鼠足趾肿胀模型检测其肿胀抑制率,通过佐剂关节炎模型检测组织内和血清中NO的含量。结果其能显著减少促炎因子的分泌量(P<0.001),抑制角叉菜胶致小鼠足趾肿胀作用(P<0.05),减少佐剂性关节炎模型组织内和血清中NO的含量(P<0.01),并且抑制作用具有时间和剂量依赖性。结论吉祥草乙酸乙酯提取物及RCE-4具有明显的抗炎活性,其作用机制可能与抑制促炎细胞因子和NO的释放有关。 展开更多
关键词 吉祥草 抗炎活性 促炎性细胞因子 rce-4
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吉祥草中甾体皂苷RCE-4对人宫颈癌Caski细胞Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4通路的影响 被引量:6
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作者 颜为红 邹坤 +6 位作者 贺海波 张永峰 李小妹 李小琴 杨小姣 汪鋆植 邓张双 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第3期247-254,共8页
目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4影响Ras/Erk和p16/cyclin D1/CDK4信号通路促进Caski细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养人宫颈癌Caski细胞株,用RCE-4作为处理因素,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布;Real-time PCR检测... 目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4影响Ras/Erk和p16/cyclin D1/CDK4信号通路促进Caski细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养人宫颈癌Caski细胞株,用RCE-4作为处理因素,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布;Real-time PCR检测p16、cyclin D1和CDK4m RNA表达水平;Western blot检测Ras/Erk信号通路总蛋白和磷酸化蛋白表达水平。结果:RCE-4呈剂量依赖性抑制Caski细胞增殖,其作用24 h的IC50值为12.33μmol/L;升高G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例;抑制Ras、p-Raf、p-Mek1/2和p-Erk1/2蛋白表达,降低p-Raf/Raf、p-Mek1/2/Mek1/2和p-Erk1/2/Erk1/2比值,上调p16的m RNA表达,下调cyclin D1和CDK4的m RNA表达。结论:RCE-4可抑制Caski细胞的增殖,诱导细胞在G0/G1期阻滞,其诱导作用与其抑制Ras/Erk和p16/cyclin D1/CDK4信号通路激活有关。 展开更多
关键词 rce-4 细胞周期 CASKI细胞 Ras/Erk信号通路 p16/cyclinD1/CDK4信号通路
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吉祥草中甾体皂苷RCE-4激活p53-ROS通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制研究 被引量:5
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作者 杨小姣 邹坤 +5 位作者 尉小琴 覃慧林 颜为红 张永峰 贺海波 汪鋆植 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期62-67,共6页
目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4对Hep G2的抑制作用及分子机制。方法:用RCE-4(1.62、3.13、6.25、12.5、25.0、50.0μM)处理Hep G2细胞24h后,采用MTT法检测不同浓度RCE-4对Hep G2细胞增殖的影响;RCE-4(6.25、12.5和25.0μM)分别... 目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4对Hep G2的抑制作用及分子机制。方法:用RCE-4(1.62、3.13、6.25、12.5、25.0、50.0μM)处理Hep G2细胞24h后,采用MTT法检测不同浓度RCE-4对Hep G2细胞增殖的影响;RCE-4(6.25、12.5和25.0μM)分别处理Hep G2细胞12、24和48h后,MTT法检测其对细胞增殖的影响;RCE-4(6.25、12.5和25.0μM)处理Hep G2细胞24h后用DCFH-DA荧光探针标记进行细胞内的活性氧水平检测,Hoechst33258染色观察细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,PI标记测定细胞周期,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测Hep G2细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,Western blot检测Bcl-2、Bax和p53蛋白表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果:RCE-4在16.2~50.0μM浓度范围内对Hep G2细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性,当药物浓度达到12.5μM时,抑制率达到最大到54.2%,并且经IC50分析软件进行计算其IC50值为12.03μM;RCE-4(6.25、12.5和25.0μM)处理Hep G2细胞12、24和48h均能显著抑制Hep G2细胞增殖,促进其凋亡(P〈0.05或P〈0.01);当药物浓度为25.0μM,作用时间24h时,其抑制率高达93.4%。RCE-4(6.25、1.25和25.0μM)处理Hep G2细胞24h后可显著增加Hep G2细胞内ROS水平,抑制细胞凋亡,阻滞细胞周期于G2/M期,降低线粒体膜电位,上调Bax和p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达和Bcl-2与Bax的比值,增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P〈0.05或P〈0.01)。结论:RCE-4可显著的抑制Hep G2细胞增殖和诱导凋亡,其作用机制可能与其增加细胞内ROS水平,促进p53及下游靶基因Bax表达,增强Caspase-9和Caspase-3活性,抑制Bcl-2表达,降低Bcl-2和Bax比值及线粒体膜电位,阻滞细胞于G2/M期有关。 展开更多
关键词 rce-4 HEPG2 细胞凋亡 活性氧 P53
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吉祥草甾体皂苷RCE-4诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡与自噬相互作用的分子机制 被引量:3
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作者 游方芳 程凡 +2 位作者 邹坤 张晶 陈剑锋 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1727-1735,共9页
目的解析RCE-4诱导的凋亡和自噬在其抑制人宫颈癌Ca Ski细胞增殖中的作用并探索增强其抗肿瘤活性的方法。方法应用各种自噬和凋亡抑制剂、siRNA质粒作为工具,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot分析凋亡和自噬相... 目的解析RCE-4诱导的凋亡和自噬在其抑制人宫颈癌Ca Ski细胞增殖中的作用并探索增强其抗肿瘤活性的方法。方法应用各种自噬和凋亡抑制剂、siRNA质粒作为工具,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot分析凋亡和自噬相关蛋白的表达。结果自噬抑制剂Baf A1与RCE-4协同效果最佳,联用后RCE-4对Ca Ski细胞的半数抑制浓度IC_(50)由4.669μmol·L^(-1)减小到1.368μmol·L^(-1),细胞凋亡率由49.96%增长到91.08%。Beclin 1 siRNA、Bcl-2 siRNA与RCE-4联用可使IC_(50)由4.669μmol·L^(-1)分别减小到1.536和1.582μmol·L^(-1)。凋亡抑制剂Z-VAD-FMK不影响RCE-4对Ca Ski细胞的敏感性。结论凋亡在RCE-4抑制Ca Ski细胞增殖中起主导地位,而自噬则起着保护细胞、拮抗凋亡的作用。可通过联用Baf A1或者抑制Beclin 1、Bcl-2表达来增强Ca Ski细胞对RCE-4的敏感性。 展开更多
关键词 rce-4 凋亡 自噬 相互作用 凋亡和自噬抑制剂 SIRNA质粒
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吉祥草活性成分RCE-4抑制宫颈癌Ca Ski细胞增殖、侵袭和迁移的活性及机制研究 被引量:3
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作者 陈重旭 游方芳 +5 位作者 金桂兰 程凡 邹坤 邢翔飞 奚炜 陈剑锋 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2021年第9期1558-1571,共14页
本文探讨吉祥草活性单体RCE-4对宫颈癌Ca Ski细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制。采用MTT法和克隆形成实验检测RCE-4对Ca Ski细胞增殖的影响,划痕实验及Transwell小室实验研究RCE-4对Ca Ski细胞的迁移和侵袭的影响,间接免疫荧光实验和We... 本文探讨吉祥草活性单体RCE-4对宫颈癌Ca Ski细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制。采用MTT法和克隆形成实验检测RCE-4对Ca Ski细胞增殖的影响,划痕实验及Transwell小室实验研究RCE-4对Ca Ski细胞的迁移和侵袭的影响,间接免疫荧光实验和Western blot法检测RCE-4对β-catenin和YAP/TAZ蛋白入核转运的影响,采用Western blot法检测RCE-4对Wnt/β-catenin、Hippo/YAP信号路通及下游靶蛋白表达的影响。结果显示,RCE-4可以显著抑制Ca Ski细胞的增殖、迁移和侵袭;RCE-4处理后,β-catenin和YAP/TAZ蛋白入核减弱,GSK3β、p-β-catenin、p-YAP、p-LATS1的蛋白表达量增加,PAK4、p-GSK3β、β-catenin、MST1、LATS1、NUAK2、YAP/TAZ、YAP的蛋白表达量减少,下游靶蛋白MMPs、c-Myc、SOX2、CYR61、VCAM-1、ICAM-1的表达被抑制,提示RCE-4体外可能通过对Wnt/β-catenin和Hippo/YAP信号通路的调控发挥其抗Ca Ski细胞侵袭和迁移的作用。 展开更多
关键词 rce-4 侵袭 迁移 WNT/Β-CATENIN Hippo/YAP
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吉祥草活性成分RCE-4触发内质网应激调控人宫颈癌Ca Ski细胞周期阻滞 被引量:1
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作者 牟丽云 邢翔飞 +4 位作者 陈重旭 张晶 金桂兰 奚伟 陈剑锋 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2021年第9期1224-1231,共8页
目的探索吉祥草活性成分RCE-4抑制宫颈癌Ca Ski细胞增殖的机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)和克隆形成实验考察RCE-4对Ca Ski细胞生长的影响,并计算其半抑制浓度(IC_(50));流式细胞术检测细胞周期的变化;Western blot检测内质网应激... 目的探索吉祥草活性成分RCE-4抑制宫颈癌Ca Ski细胞增殖的机制。方法四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)和克隆形成实验考察RCE-4对Ca Ski细胞生长的影响,并计算其半抑制浓度(IC_(50));流式细胞术检测细胞周期的变化;Western blot检测内质网应激及细胞周期相关分子蛋白水平的表达。结果RCE-4对人宫颈癌Ca Ski细胞的增殖具有明显抑制作用,作用24、48、72 h的IC_(50)值分别为8.61、4.69、4.34μmol·L^(-1)。Western blot结果显示RCE-4激活了内质网应激PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路。流式细胞术结果显示RCE-4可明显诱导细胞G 2/M期阻滞,细胞内CDK1、cdc25C、p-cdc25C、CyclinB1、Chk2、p-Chk2、GADD45α、MDM2蛋白水平明显降低,p21、p27和ATM蛋白水平明显升高。结论RCE-4可能通过触发内质网应激诱导Ca Ski细胞G 2/M期阻滞从而抑制人宫颈癌Ca Ski细胞增殖。 展开更多
关键词 吉祥草 rce-4 宫颈癌 内质网应激 细胞周期阻滞 细胞增殖
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吉祥草活性成分RCE-4与塞来昔布联合应用抗宫颈癌Ca Ski细胞增殖效果与机制研究
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作者 甄虹恒 游方芳 +3 位作者 程凡 邹坤 陈重旭 陈剑锋 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1911-1920,共10页
本研究旨在探讨RCE-4与非甾体抗炎药联用抗宫颈癌Ca Ski细胞增殖的协同作用及分子机制。采用MTT法和CalcuSyn V2.0软件检测细胞增殖并计算联合用药指数(combination index,CI);Western blot法分析蛋白表达;Jc-1染色检测线粒体膜电位;吖... 本研究旨在探讨RCE-4与非甾体抗炎药联用抗宫颈癌Ca Ski细胞增殖的协同作用及分子机制。采用MTT法和CalcuSyn V2.0软件检测细胞增殖并计算联合用药指数(combination index,CI);Western blot法分析蛋白表达;Jc-1染色检测线粒体膜电位;吖啶橙/溴化乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)染色检测细胞凋亡;免疫共沉淀法检测Bcl-2-Beclin 1复合体的相对含量。结果显示,塞来昔布与RCE-4的协同效果最好,最佳协同指数为0.32。二者联用能显著抑制环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和核转录因子κB(nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)的表达,促进非甾体抗炎药活化因子1(non-steroidal anti-inflammatory drugs activity gene-1,NAG-1)的表达。同时,联用也显著抑制了微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 3,LC3)-II、Beclin 1、p62以及自噬相关基因(autophagy-related gene,ATG)3/4B/5/7/14的表达,促进了线粒体膜电位的去极化,显著抑制了B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-xl(B cell lymphoma-xl,Bcl-xl)的表达,促进了Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、Bcl-2/Bcl-xl相关死亡启动因子(Bcl-2/Bcl-xl-associated death promoter,Bad)以及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase,cleaved-caspase)3/7/9的表达。另外,二者联用也极显著地抑制了Bcl-2-Beclin 1复合体的形成。综上所述,RCE-4与塞来昔布联用可能通过抑制Bcl-2-Beclin 1复合体的形成,抑制RCE-4诱导的自噬并增强其凋亡,从而提高RCE-4对宫颈癌Ca Ski细胞的敏感性。 展开更多
关键词 rce-4 塞来昔布 凋亡 自噬 Bcl-2-Beclin 1复合体
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吉祥草中甾体皂苷RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用 被引量:11
8
作者 杨小姣 白彩虹 +5 位作者 邹坤 贺海波 尉小琴 覃慧林 张永峰 汪鋆植 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期476-482,共7页
目的观察吉祥草中甾体皂苷RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法采用传统方法分离鉴定RCE-4。将0.3 m L Caski(4×107/m L)细胞悬液接种于裸鼠右侧后腿背部皮下,建立宫颈癌移植瘤模型,然后按瘤体积大小随机分为模型组、紫杉醇(1... 目的观察吉祥草中甾体皂苷RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法采用传统方法分离鉴定RCE-4。将0.3 m L Caski(4×107/m L)细胞悬液接种于裸鼠右侧后腿背部皮下,建立宫颈癌移植瘤模型,然后按瘤体积大小随机分为模型组、紫杉醇(10 mg/kg)和RCE-4(25、50、100 mg/kg)组,1次/d给药,连续4周,末次给药的次日处死裸鼠,称量裸鼠体质量、瘤质量,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。光镜下观察移植瘤组织形态学变化,TUNEL染色测定细胞凋亡率,免疫组化检测肿瘤组织中COX-2表达,荧光定量PCR测定移植瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,计算Bcl-2/Bax值,Western blot检测移植瘤组织中Survivin蛋白表达。结果 RCE-4(25、50、100 mg/kg)可明显降低宫颈癌裸鼠移植瘤的体积和瘤质量(P<0.05,P<0.01),上调Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和COX-2、Survivin蛋白表达及Bcl-2/Bax值(P<0.05,P<0.01)。结论RCE-4对宫颈癌裸鼠移植瘤的生长具有显著抑制作用,其机制可能与其上调Bax、Caspase-9、Caspase-3的表达和下调Survivin、Bcl-2、COX-2的表达有关。 展开更多
关键词 甾体皂苷rce-4 吉祥草 宫颈癌 CASKI细胞 裸鼠 细胞凋亡
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保护性自噬对吉祥草皂苷RCE-4诱导的人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的抑制作用 被引量:2
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作者 王桂萍 付雪娇 +2 位作者 邹坤 张秀 陈剑锋 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期42-45,共4页
目的:明确甾体皂苷RCE-4处理Ca Ski细胞后诱导细胞发生自噬,并探讨自噬对RCE-4诱导的细胞凋亡的影响。方法:光学显微镜观查自噬抑制前后细胞形态的变化,透射电镜观察RCE-4诱导Ca Ski细胞自噬以及凋亡之后细胞形态的变化;MTT法检测自噬... 目的:明确甾体皂苷RCE-4处理Ca Ski细胞后诱导细胞发生自噬,并探讨自噬对RCE-4诱导的细胞凋亡的影响。方法:光学显微镜观查自噬抑制前后细胞形态的变化,透射电镜观察RCE-4诱导Ca Ski细胞自噬以及凋亡之后细胞形态的变化;MTT法检测自噬活性抑制之后RCE-4细胞毒活性变化;流式细胞仪检测自噬抑制之后细胞凋亡率的变化。结果:MTT结果表明,自噬抑制剂3-MA存在的情况下,RCE-4的细胞毒活性明显增强,RCE-4浓度为5μM时,自噬抑制之后,抑制率由93%降低至66%,Ca Ski细胞的IC50由5.1μM下降至2.6μM,流式细胞仪检测自噬抑制之后细胞凋亡率的变化发现,细胞凋亡率由12.1%增加到23.0%。结论:RCE-4诱导的Ca Ski细胞保护性自噬对其诱导的细胞凋亡具有抑制作用。 展开更多
关键词 吉祥草皂苷rce-4 自噬 凋亡 自噬抑制剂
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