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利用CRISPR/Cas9技术构建Quaking敲除的小鼠胚胎成纤维细胞株
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作者 高登科 马白荣 +5 位作者 郭怡莹 刘薇 刘田 靳亚平 江舟 陈华涛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期65-72,共8页
【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)Quaking基因敲除细胞株,并检测Quaking基因对NIH3T3细胞增殖能力的影响。【方法】首先,利用在线网站设计两条靶向作用于Quaking外显子的sgRNA,成功构建了两个分别靶向Quakin... 【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)Quaking基因敲除细胞株,并检测Quaking基因对NIH3T3细胞增殖能力的影响。【方法】首先,利用在线网站设计两条靶向作用于Quaking外显子的sgRNA,成功构建了两个分别靶向Quaking基因第1、第2外显子的CRISPR/Cas9重组慢病毒质粒。将构建的Quaking基因CRISPR/Cas9重组慢病毒载体和pcDNA3.1-Quaking过表达质粒共转染至HEK293T细胞中,通过Western blot实验检测Quaking蛋白的敲除效率。其次,将筛选得到的敲除效率高的重组慢病毒质粒(LentiCRISPRv2-sgRNA1)与辅助包装质粒共转染入HEK293T细胞进行慢病毒包装,慢病毒转导NIH3T3细胞后,利用嘌呤霉素筛选阳性单克隆细胞株。最后,通过Western blot及免疫荧光染色鉴定敲除效果。【结果】发现Quaking蛋白在该细胞株中不表达,并测序证实了发生片段敲除。CCK8检测发现,Quaking基因敲除显著抑制了NIH3T3细胞的增殖能力。【结论】本研究首次通过CRISPR/Cas9技术成功构建了小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)Quaking基因敲除细胞株,为后续研究Quaking基因在小鼠生理功能调节中的作用机制提供了体外模型基础。 展开更多
关键词 quaking CRISPR/Cas9 小鼠胚胎成纤维细胞 基因敲除
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血浆Quaking和环氧合酶-2水平预测冠心病患者行经皮冠状动脉介入术后支架内再狭窄 被引量:4
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作者 王萍 匡圆圆 +3 位作者 刘昱博 张银妆 高浩东 马琦琳 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期739-747,共9页
目的:经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)是治疗冠心病的重要手段之一,支架植入术后发生的支架内再狭窄(in-stent restenosis,ISR)是影响冠心病患者PCI术后远期疗效及预后的重要因素。本研究旨在探讨血浆Quaki... 目的:经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)是治疗冠心病的重要手段之一,支架植入术后发生的支架内再狭窄(in-stent restenosis,ISR)是影响冠心病患者PCI术后远期疗效及预后的重要因素。本研究旨在探讨血浆Quaking(QKI)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)水平与冠心病患者PCI术后ISR的相关性。方法:连续选取2019年9月至2020年9月在中南大学湘雅医院心血管内科行冠状动脉造影并行支架植入术的冠心病患者218例,选取同期在体检中心体检的与冠心病患者基线资料相匹配的35例个体作为对照组。入院后收集两组患者的临床资料,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定血浆QKI、COX-2水平。术后12个月复查冠心病患者的冠状动脉造影,根据是否发生ISR将218例冠心病患者分为无再狭窄组(NISR组,n=160)与再狭窄组(ISR组,n=58)。比较NISR组与ISR组的一般资料及冠状动脉临床指标,采用多因素logistic回归分析ISR的影响因素。记录1年内主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE)发生情况,并据此将58例PCI术后ISR患者分为未发生MACE组(34例)与发生MACE组(24例),比较两组的血浆QKI、COX-2水平,采用受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线探究血浆QKI、COX-2水平对PCI术后ISR及MACE的诊断价值。结果:与对照组相比,冠心病组COX-2及QKI水平明显下降(均P<0.001)。与NISR组相比,ISR组超敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbAlc)显著升高(均P<0.001),COX-2及QKI水平明显下降(均P<0.001)。血浆COX-2与hs-CRP水平呈负相关(r=-0.385,P=0.003)。多因素logistic回归分析发现血浆高水平QKI、COX-2是冠心病患者PCI术后ISR的保护因素,高水平hs-CRP是危险因素。ROC曲线分析显示:血浆QKI诊断冠心病患者PCI术后ISR的灵敏度为77.5%,特异度为65.5%;血浆COX-2 展开更多
关键词 冠心病 经皮冠状动脉介入治疗 quaking 环氧合酶-2 支架内再狭窄 主要不良心血管事件
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震颤蛋白-RNA相互作用在心血管疾病中的作用
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作者 卜佳乐 汤子君 +3 位作者 谢宜欣 李珂娟 李勇男 张小卫 《生命的化学》 CAS 2024年第6期1047-1054,共8页
RNA结合蛋白-震颤蛋白(quaking,QKI)是信号转导和激活RNA蛋白家族的成员,属于异质核糖核蛋白K同源结构域蛋白家族。QKI通过与RNA相互作用进而影响细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡和细胞衰老等多种细胞生物学过程,可通过与RNA相互作用参与... RNA结合蛋白-震颤蛋白(quaking,QKI)是信号转导和激活RNA蛋白家族的成员,属于异质核糖核蛋白K同源结构域蛋白家族。QKI通过与RNA相互作用进而影响细胞分化、细胞增殖、细胞凋亡和细胞衰老等多种细胞生物学过程,可通过与RNA相互作用参与多种心血管疾病的发生发展。然而,目前缺乏对QKI/RNA作用机制在心血管疾病中研究进展的系统性总结。本文通过描述QKI的结构特征,阐述QKI与RNA相互调节影响的细胞生物学活动,总结QKI与RNA相互作用在心血管疾病中的潜在影响,旨在为心血管疾病提供新的诊疗靶点和理论依据。 展开更多
关键词 震颤蛋白 信使RNA 微小RNA 环状RNA 心血管疾病
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控制性爆破安全施工技术应用分析 被引量:5
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作者 单旭辉 姚孟发 《南水北调与水利科技》 CAS CSCD 2007年第B06期57-59,共3页
渠道开挖边线外侧有大片房屋,施工时爆破飞石以及震动控制是工程难点,所以采取控制性爆破的方法进行施工。为了减少飞石以及震动的影响,将采取增加炮孔堵塞长度、控制单响药量、在孔口覆盖土袋、搭设双排防护架等综合防护方法,以确保村... 渠道开挖边线外侧有大片房屋,施工时爆破飞石以及震动控制是工程难点,所以采取控制性爆破的方法进行施工。为了减少飞石以及震动的影响,将采取增加炮孔堵塞长度、控制单响药量、在孔口覆盖土袋、搭设双排防护架等综合防护方法,以确保村民的人身及财产安全。 展开更多
关键词 控制性爆破 飞石 震动
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Influence of Weather Conditions on the Surface Morphology and Wetting Behaviour of Superhydrophobic Quaking Aspen Leaves 被引量:1
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作者 J. J. Victor U. Erb 《American Journal of Plant Sciences》 2013年第5期61-68,共8页
The effects of different environmental conditions on the wetting properties and surface morphology of surperhydrophobic quaking aspen leaves harvested during the 2011 growth season are examined. During this particular... The effects of different environmental conditions on the wetting properties and surface morphology of surperhydrophobic quaking aspen leaves harvested during the 2011 growth season are examined. During this particular season quaking aspen leaves were not able to retain their superhydrophobic properties and associated surface structure features as they have usually been able to do in other years. Representative scanning electron microscopy images and wetting property measurements of quaking aspen leaf surfaces harvested throughout this season are presented and discussed with the objective of linking weather induced environmental stresses that occurred in 2011 to the sudden and unusual reduction in non-wetting properties and drastic changes in leaf surface structure. Erosion and regeneration rates of leaf wax crystals and the impact that environmental factors can have on these are considered and used to explain the occurrence of these unexpected changes. 展开更多
关键词 quaking ASPEN LEAVES SUPERHYDROPHOBIC Surface Structure WAX Crystal Erosion/Regeneration WEATHER Conditions
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Altered Fire Regimes and the Persistence of Quaking Aspen in the Rocky Mountains: A Literature Review
6
作者 Aaron Rosenblum 《Open Journal of Forestry》 2015年第5期563-567,共5页
The persistence of quaking aspen (Populus tremuloides Michx.) is of significant importance to land managers in the Rocky Mountain region. Fire suppression in the past century has been implicated as a mechanism influen... The persistence of quaking aspen (Populus tremuloides Michx.) is of significant importance to land managers in the Rocky Mountain region. Fire suppression in the past century has been implicated as a mechanism influencing aspen population dynamics, as aspen are generally considered an early seral disturbance adapted species. The heterogeneity of aspen community assemblages and fire regimes makes it difficult to discern what the result of fire suppression has been at large spatial and temporal scales. Decision makers should investigate the questions at hand at the stand level in their study location to best determine the mechanisms at play, as well as consider future potential changes to the system. 展开更多
关键词 quaking ASPEN POPULUS Tremuloides FIRE FIRE Regimes Rocky MOUNTAINS
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Early Season Development of Micro/Nano-Morphology and Superhydrophobic Wetting Properties on Aspen Leaf Surfaces
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作者 George Christopher Tranquada Jared Jennings Victor Uwe Erb 《American Journal of Plant Sciences》 2015年第13期2197-2208,共12页
The rapid growth and early development period of the dual-scale surface topography was studied on the adaxial leaf surfaces of two aspen tree species with non-wetting leaves: the columnar European aspen (Populus tremu... The rapid growth and early development period of the dual-scale surface topography was studied on the adaxial leaf surfaces of two aspen tree species with non-wetting leaves: the columnar European aspen (Populus tremula “Erecta”) and quaking aspen (Populus tremuloides). Particular attention was focused on the formation of micro- and nano-scale asperities on their cuticles, which was correlated with the development of superhydrophobic wetting behaviour. Measurements of the wetting properties (contact angle and tilt-angle) provided an indication of the degree of hydrophobicity of their cuticles. Scanning electron microscopy and optical profilometry micrographs were used to follow the growth and major morphological changes of micro-scale papillae and nano-scale epicuticular wax (ECW) crystals, which led to a significant improvement in non-wetting behaviour. Both species exhibited syntopism in the form of small and larger nano-scale ECW platelet morphologies. These findings provide additional support for earlier suggestions that due to fluctuations in leaf hydrophobicity throughout the growing season, canopy storage capacity may also vary considerably throughout this time period. 展开更多
关键词 COLUMNAR European ASPEN LEAVES DEVELOPMENT of SUPERHYDROPHOBIC Leaf Surfaces Epicuticular WAX Morphologies Nano-Scale WAX Crystals quaking ASPEN LEAVES
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RNA结合蛋白QKI的中枢调控功能研究进展
8
作者 刘钊 高媛 +1 位作者 李彬 史海水 《生命的化学》 CAS CSCD 2017年第6期1065-1070,共6页
QKI蛋白(Quaking QKI)属STAR蛋白家族,兼具信号转导特性与RNA激活功能。QKI蛋白是RNA代谢过程中的重要功能分子,在mRNA前体剪接、mRNA稳定性与定位及mRNA翻译等过程中发挥着重要的作用。大量研究发现,QKI蛋白在多种肿瘤、心血管系统发... QKI蛋白(Quaking QKI)属STAR蛋白家族,兼具信号转导特性与RNA激活功能。QKI蛋白是RNA代谢过程中的重要功能分子,在mRNA前体剪接、mRNA稳定性与定位及mRNA翻译等过程中发挥着重要的作用。大量研究发现,QKI蛋白在多种肿瘤、心血管系统发生发展过程中发挥重要的调控功能。在中枢神经系统,QKI蛋白与多发性硬化症、精神分裂症、抑郁症等多种神经精神疾病的发生发展过程也存在关联,但其中枢调控功能与具体机制尚未系统阐明。本文就QKI蛋白在中枢神经系统调控功能,尤其是与神经精神疾病发生发展相关的功能研究及可能机制作一综述。 展开更多
关键词 QKI蛋白 RNA结合蛋白 神经精神疾病
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RNA结合蛋白quaking:单核-巨噬细胞分化及功能的重要调控者
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作者 武梦琪 邓乐乐 +2 位作者 安珮瑜 汪莉 翟东昇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1032-1038,共7页
巨噬细胞是可塑性较强的一类固有免疫细胞,能够极化为不同表型,发挥吞噬、趋化等多种功能,参与疾病的发生发展。RNA结合蛋白quaking(QKI)通过影响RNA剪切、转位及表达等过程调控单核细胞分化、巨噬细胞极化及多种细胞功能。QKI调控单核... 巨噬细胞是可塑性较强的一类固有免疫细胞,能够极化为不同表型,发挥吞噬、趋化等多种功能,参与疾病的发生发展。RNA结合蛋白quaking(QKI)通过影响RNA剪切、转位及表达等过程调控单核细胞分化、巨噬细胞极化及多种细胞功能。QKI调控单核细胞向巨噬细胞的分化,QKI缺失促进巨噬细胞极化为M1型,发挥促炎表型。相反,QKI过表达则促进其极化为M2型。除此以外,QKI还影响巨噬细胞吞噬受体、趋化因子表达。由于组织定居巨噬细胞特性存在差异,QKI调控巨噬细胞参与多种疾病发展(如动脉粥样硬化、炎症性肠病等)的调控机制多样。主要涉及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)转录因子调控、信号转导子与转录激活子1/核因子κB(STAT1/NF-κB)炎症信号通路及吞噬受体mRNA前体剪接等。 展开更多
关键词 quaking(QKI) 单核细胞 巨噬细胞 综述
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浅谈多层砌体结构抗震设计 被引量:7
10
作者 李彬 王宇亮 陈光 《山西建筑》 2008年第2期105-106,共2页
针对砌体结构的特点,对多层砌体房屋抗震计算进行了分析,探讨了多层砌体结构的布置,提出了对附属构件进行抗震设计及验算时应注意的事项,并列出了多层砖房构造柱及现浇混凝土圈梁的设置要求,以完善多层砌体结构的抗震设计。
关键词 砌体结构 抗震设计 构造柱 圈梁
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论高层建筑抗震概念设计 被引量:7
11
作者 王红霞 《山西建筑》 2007年第35期74-75,共2页
简述了建筑抗震概念设计的含义,分析了高层混凝土建筑结构设计更应重视概念设计的原因,并详细阐述了建筑抗震概念设计的基本内容,指出了概念设计应注意的问题,以完善高层建筑结构设计,提高设计人员的设计水平。
关键词 抗震设计 概念设计 高层建筑
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钢筋混凝土框架结构抗震性能分析 被引量:6
12
作者 韦合 梁汝鸣 张鑫 《山西建筑》 2007年第32期67-68,共2页
介绍了三种钢筋混凝土框架结构在地震中的典型屈服破坏机制,通过比较这三种主要破坏机制,分析了其抗震要求,并对其抗震能力进行了阐述,最后提出了可以改善和提高框架结构抗震能力的方法,以进一步改善结构的受力性能,提高框架的抗震能力。
关键词 框架结构 抗震能力 残余变形 受力性能
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RNA 结合蛋白 QKI 吸附海绵载体的构建及其对肝癌细胞增殖的影响
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作者 韦梦影 叶子晨 +1 位作者 卢兹凡 卢晓昭 《医学分子生物学杂志》 CAS 2015年第2期80-83,89,共5页
目的:构建针对 RNA 结合蛋白 quaking (QKI)的特异性吸附海绵载体(QRE-sponge),验证其对肝癌细胞系 HepG2中内源性 QKI 分子的抑制作用。方法利用人源 QKI 的特异性识别效应原件(qua-king responsive element, QRE)序列,重复13... 目的:构建针对 RNA 结合蛋白 quaking (QKI)的特异性吸附海绵载体(QRE-sponge),验证其对肝癌细胞系 HepG2中内源性 QKI 分子的抑制作用。方法利用人源 QKI 的特异性识别效应原件(qua-king responsive element, QRE)序列,重复13个拷贝,串联克隆至 pEGFP-C2真核表达载体中,转染 HepG2肝癌细胞及293 T 细胞。通过 Real time PCR,双荧光素酶报告基因检测及 MTT 实验进一步验证该吸附海绵的效果及其对肝癌细胞系 HepG2增殖的影响。结果 pEGFP-C2-QRE-SP 载体经测序证实构建成功,可以成功的在 HepG2细胞中表达,其绿色荧光呈阳性,且转染24 h 后显著影响 HepG2细胞中 QKI 下游靶基因的表达(P ﹤0.05)。双荧光素酶报告基因系统显示, pGL3-QRE-SP 载体可以显著抑制外源性 QKI 的活性(P﹤0.05)。 MTT 结果显示 pEGFP-C2-QRE-SP 载体促进 HepG2细胞的增殖。结论 QKI 吸附海绵载体策略构建的 pEGFP-C2-QRE-SP 载体可以成功的诱骗吸附 QKI,并促进肝癌细胞系 HepG2增殖,为进一步研究 QKI的功能研究提供了良好工具。 展开更多
关键词 RNA结合蛋白quaking 吸附海绵载体 肝癌细胞
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抗震柱轴压比限值问题探究 被引量:4
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作者 童智能 《山西建筑》 2008年第3期93-94,共2页
介绍了建筑物的抗震设计原则,探讨了轴压比对框架柱延性的影响,分析了影响框架柱延性的其他因素,得出了规范中轴压比限值多数情况下偏于保守,可适当做放宽调整的结论,可供结构设计人员考参借鉴。
关键词 框架柱 延性 轴压比 抗震设计
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震颤同系物-5过表达对卵巢癌细胞A2780增殖和凋亡的影响 被引量:3
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作者 段小霞 郭华 +2 位作者 付婷 晋雅凌 周卓 《陕西医学杂志》 CAS 2022年第5期529-533,共5页
目的:探讨RNA结合蛋白震颤同系物-5(QKI-5)在卵巢癌细胞中的表达以及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过免疫印迹实验(Western blot)检测正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞中QKI-5的表达差异,并选取QKI-5相对表达水平最低的卵巢癌细... 目的:探讨RNA结合蛋白震颤同系物-5(QKI-5)在卵巢癌细胞中的表达以及对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过免疫印迹实验(Western blot)检测正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞中QKI-5的表达差异,并选取QKI-5相对表达水平最低的卵巢癌细胞进行过表达慢病毒感染,构建稳定转染细胞系后通过细胞增殖和毒性分析(CCK8)和平板克隆实验检测细胞增殖和克隆能力的变化,通过流式细胞仪检测过表达QKI-5对卵巢癌细胞凋亡的影响。结果:Western blot实验结果显示,在卵巢癌细胞中QKI-5的表达水平相比正常卵巢上皮细胞显著降低,三株卵巢癌细胞中A2780细胞的QKI-5表达水平相对最低,通过慢病毒感染成功构建了稳定过表达QKI-5的A2780细胞系。CCK8和平板克隆实验结果显示,过表达QKI-5基因后A2780细胞增殖活力和克隆形成能力受到抑制(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示,QKI-5表达水平的增加能够显著促进A2780细胞的凋亡(P<0.05)。结论:RNA结合蛋白QKI-5在卵巢细胞中表达水平异常降低,QKI-5表达特异性扩增后能够抑制卵巢癌细胞A2780增殖和克隆形成能力并促进癌细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 卵巢癌 RNA结合蛋白 震颤同系物-5 增殖 凋亡 慢病毒
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提高新疆伽师县砌体房屋抗震性能的有效方法 被引量:1
16
作者 王玉香 赵玉新 《山西建筑》 2008年第2期27-28,共2页
对伽师县的概况进行了介绍,分析了伽师县地震灾害发生的原因,指出结构设计人员应重视砌体结构的抗震设计,提出了砌体房屋应采取的必要抗震措施,以提高房屋的抗震性能,使灾害降到最低。
关键词 砌体结构 抗震设计 延性 抗震措施
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皮肤检测在突触核蛋白病诊断中的价值
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作者 刘玥滢 李凯 苏闻 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1189-1195,共7页
α-突触核蛋白(α-syn)的朊蛋白样传播特性被认为是突触核蛋白病发病机制的关键。多种α-syn检测方法在诊断突触核蛋白病方面具有高敏感度和特异度。以皮肤为样本检测α-syn采用微创、低侵入性的取材方式,应用不同检测方法均具有高敏感... α-突触核蛋白(α-syn)的朊蛋白样传播特性被认为是突触核蛋白病发病机制的关键。多种α-syn检测方法在诊断突触核蛋白病方面具有高敏感度和特异度。以皮肤为样本检测α-syn采用微创、低侵入性的取材方式,应用不同检测方法均具有高敏感度和特异度,在突触核蛋白病的诊断中具有潜在的临床应用价值。文中综述了以皮肤为取材部位,应用多种方法检测α-syn诊断突触核蛋白病的最新进展,强调α-syn播种活性在疾病早期及鉴别诊断中的临床应用。 展开更多
关键词 皮肤 Α突触核蛋白 突触核蛋白病 实时震荡诱导转化测定技术 播种活性
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实时震荡诱导转化技术在α-突触核蛋白谱系病中的作用研究进展
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作者 张芮 甘婷婷 +2 位作者 毛珩旭 张小康 徐评议 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1267-1271,共5页
神经元和神经胶质细胞内α-突触核蛋白(α-syn)异常沉积形成的路易小体是α-syn谱系病的诊断标志物,但因目前脑活检困难致其早期诊断存在滞后,而鉴于病理条件下α-syn可发生朊蛋白样复制并播散至外周,故利用实时震荡诱导转化(RT-QuIC)... 神经元和神经胶质细胞内α-突触核蛋白(α-syn)异常沉积形成的路易小体是α-syn谱系病的诊断标志物,但因目前脑活检困难致其早期诊断存在滞后,而鉴于病理条件下α-syn可发生朊蛋白样复制并播散至外周,故利用实时震荡诱导转化(RT-QuIC)技术进行颅外组织病理性α-syn的超微量检测,可为α-syn谱系病的早期诊断提供依据。本文主要围绕RT-QuIC技术在检测α-syn谱系病患者不同组织中α-syn播种活性的应用进展进行综述,拟初步总结其在α-syn谱系病早期诊断和鉴别诊断中的潜在价值。 展开更多
关键词 α-突触核蛋白谱系病 Α-突触核蛋白 实时震荡诱导转化技术
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慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5对肺腺癌细胞系H1299的增殖和凋亡的影响 被引量:1
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作者 方可欣 王昕晨 +1 位作者 洪开听 竺王玉 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期40-45,共6页
目的探讨慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5(QKI-5)对肺腺癌细胞凋亡的影响。方法应用GV358(过表达)和GV248(抑制表达)载体分别构建针对QKI-5基因的慢病毒过表达载体和抑制表达载体,转染293T细胞产生慢病毒颗粒,收集并测定慢病毒滴度。将经... 目的探讨慢病毒载体介导RNA结合蛋白-5(QKI-5)对肺腺癌细胞凋亡的影响。方法应用GV358(过表达)和GV248(抑制表达)载体分别构建针对QKI-5基因的慢病毒过表达载体和抑制表达载体,转染293T细胞产生慢病毒颗粒,收集并测定慢病毒滴度。将经测序鉴定的QKI-5过表达的慢病毒或抑制表达的慢病毒转染到肺腺癌细胞H1299,Real-time PCR检测QKI-5 mRNA表达,集落形成实验检测H1299细胞增殖情况,膜联蛋白V(annexin V)、碘化丙啶(PI)检测H1299细胞凋亡情况,Western blotting检测促凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8表达。结果成功构建QKI-5过表达慢病毒载体和抑制表达慢病毒载体,与对照组比较,QKI-5过表达后,QKI-5mRNA表达增加,细胞集落形成减少,肺腺癌细胞早期凋亡增加,促凋亡蛋白Caspase-8表达增加;QKI-5抑制表达后,QKI-5 mRNA表达降低,细胞集落形成增加,但肺腺癌细胞凋亡无明显变化,然而促凋亡蛋白Caspase-8表达减少。结论慢病毒介导QKI-5抑制增殖,可能通过Caspase-8促进肺腺癌细胞系H1299的凋亡。 展开更多
关键词 肺腺癌 RNA结合蛋白-5 H1299细胞系 载体构建 慢病毒感染 实时定量聚合酶链反应
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Olfactory swab sampling optimization for α-synuclein aggregate detection in patients with Parkinson’s disease 被引量:2
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作者 Matilde Bongianni Mauro Catalan +23 位作者 Daniela Perra Elena Fontana Francesco Janes Claudio Bertolotti Luca Sacchetto Stefano Capaldi Matteo Tagliapietra Paola Polverino Valentina Tommasini Giulia Bellavita Elham Ataie Kachoie Roberto Baruca Andrea Bernardini Mariarosaria Valente Michele Fiorini Erika Bronzato Stefano Tamburin Laura Bertolasi Lorenzo Brozzetti Maria Paola Cecchini Gianluigi Gigli Salvatore Monaco Paolo Manganotti Gianluigi Zanusso 《Translational Neurodegeneration》 SCIE 2022年第1期390-400,共11页
Background: In patients with Parkinson’s disease (PD), real-time quaking-induced conversion (RT-QuIC) detection of pathological α-synuclein (α-syn) in olfactory mucosa (OM) is not as accurate as in other α-synucle... Background: In patients with Parkinson’s disease (PD), real-time quaking-induced conversion (RT-QuIC) detection of pathological α-synuclein (α-syn) in olfactory mucosa (OM) is not as accurate as in other α-synucleinopathies. It is unknown whether these variable results might be related to a different distribution of pathological α-syn in OM. Thus, we investigated whether nasal swab (NS) performed in areas with a different coverage by olfactory neuroepithelium, such as agger nasi (AN) and middle turbinate (MT), might affect the detection of pathological α-syn. Methods: NS was performed in 66 patients with PD and 29 non-PD between September 2018 and April 2021. In 43 patients, cerebrospinal fluid (CSF) was also obtained and all samples were analyzed by RT-QuIC for α-syn. Results: In the first round, 72 OM samples were collected by NS, from AN (NSAN) or from MT (NSMT), and 35 resulted positive for α-syn RT-QuIC, including 27/32 (84%) from AN, 5/11 (45%) from MT, and 3/29 (10%) belonging to the non-PD patients. Furthermore, 23 additional PD patients underwent NS at both AN and MT, and RT-QuIC revealed α-syn positive in 18/23 (78%) NSAN samples and in 10/23 (44%) NSMT samples. Immunocytochemistry of NS prepara-tions showed a higher representation of olfactory neural cells in NSAN compared to NSMT. We also observed α-syn and phospho-α-syn deposits in NS from PD patients but not in controls. Finally, RT-QuIC was positive in 22/24 CSF samples from PD patients (92%) and in 1/19 non-PD. Conclusion: In PD patients, RT-QuIC sensitivity is significantly increased (from 45% to 84%) when NS is performed at AN, indicating that α-syn aggregates are preferentially detected in olfactory areas with higher concentration of olfactory neurons. Although RT-QuIC analysis of CSF showed a higher diagnostic accuracy compared to NS, due to the non-invasiveness, NS might be considered as an ancillary procedure for PD diagnosis. 展开更多
关键词 Parkinson disease ALPHA-SYNUCLEIN Real-time quaking-induced conversion assay Olfactory mucosa Cerebrospinal fluid
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